• Author / Uploaded
• deessire

Citation preview

Base Agar Gelosa Sangre Medio para propósitos generales, para el aislamiento y cultivo de numerosos microorganismos. Con la adición de sangre, el medio es útil tanto para el aislamiento y cultivo de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes a partir de una gran variedad de muestras, como para la observación de reacciones de hemólisis. También, este medio de cultivo, puede utilizarse como medio base para preparar el medio agar chocolate. El agar sangre es una combinación de un agar base (agar nutritivo) con el agregado de 5 % de sangre ovina, también puede usarse sangre humana, para cultivos en una placa de Agar. El agar sangre aporta muchos factores de enriquecimiento. Se usa también para ver la capacidad hemolítica de los microorganismos patógenos (que es un factor de virulencia). Observando los halos hemolíticos alrededor de las colonias se determina el tipo de hemólisis que posee:

•

Hemolyses of Streptococcus spp. (left) α-hemolysis (S. mitis); (middle) β-hemolysis (S. pyogenes); (right) γhemolysis (= non-hemolytic, S. salivarius

• • •

alfa: halos verdosos (hemolisis parcial) beta: halos incoloros (hemolisis total) gamma: inexistencia de halos (sin hemolisis)

Beta hemolisis en agar sangre (los tres círculos son colonias; lo de alrededor de los círculos es la beta hemolisis

Glóbulos rojos (eritrocitos o hematíes) de la sangre en una placa de Petri con agar de las utilizadas para el diagnóstico de infecciones. La placa de la izquierda muestra una infección por estafilococos y la de la derecha, por estreptococos. Red blood cells on an agar plate are used to diagnose infection. The plate on the left shows a positive staphylococcus

infection. The plate on the right shows a positive streptococcus infection and with the halo effect shows specifically a beta-hemolytic group A. FUNDAMENTO La infusión de músculo de corazón y la peptona, otorgan al medio un alto valor nutritivo, que permite el crecimiento de una gran variedad de microorganismos, aún de aquellos nutricionalmente exigentes. El cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agregado de sangre al medio de cultivo, en concentración final de 5-10 %, aporta nutrientes para el crecimiento bacteriano, y permite detectar hemólisis.

Mac Conkey Agar Mac Conkey Agar Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en el mismo. FUNDAMENTO En el medio de cultivo, las peptonas, aportan los nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano, la lactosa es el hidrato de carbono fermentable, y la mezcla de sales biliares y el cristal violeta son los agentes selectivos que inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva. Por fermentación de la lactosa, disminuye el pH alrededor de la colonia. Esto produce un viraje del color del indicador de pH (rojo neutro), la absorción en las colonias, y la precipitación de las sales biliares. Sirve como indicador visual de pH, distinguiendo así las bacterias gram negativas que pueden fermentar la lactosa (Lac+) y las que no pueden (Lac-). LAC + Al utilizar la lactosa en el medio, bacterias Lac+ como Escherichia coli, Enterobacter y Klebsiella producen acidez, lo cual baja el PH bajo 6,8 lo que tiene como consecuencia la aparición de colonias de color rojo oscuro. LAC – Bacterias que no fermenten la lactosa como Salmonella, Proteus y Shigella utilizaran peptona en su lugar, formando ammonio, lo cual incrementa el PH del agar, formando colonias blancas o incoloras.

(LAC +) IZQ

Y (LAC –) DERECHA

Los microorganismos no fermentadores de lactosa producen colonias incoloras MICROORGANISMOS Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Salmonella typhimurium Shigella flexneri Proteus mirabilis Enterococcus faecalis

CARACTERISTICAS DEL MEDIO Medio Preparado: Rojo púrpura

COLONIAS Rojas con halo turbio Rosadas mucosas Incoloras, transparentes Incoloras, transparentes Incoloras transparentes Diminutas, incoloras, opacas

Sal y Manitol Agar Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de estafilococos. Es recomendado para el aislamiento de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos, productos cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria También, este medio puede utilizarse para el cultivo de especies halófilas de Vibrio, si no se dispone de medios apropiados (TCBS Medio, Medio Marino, etc.), aunque algunas especies pueden no desarrollar

FUNDAMENTO Se trata de un medio altamente selectivo debido a su alta concentración salina. Los estafilococos coagulasa positiva hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o púrpura. Las colonias sospechosas, se repicarán en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrógeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentración) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompañante, y el rojo fenol es el indicador de pH Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo Los estafilococos crecen en altas concentraciones de sal, y pueden o no fermentar el manitol. Los estafilococos coagulasa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color. Los estafilococos que no fermentan el manitol, se visualizan como colonias rojas, rodeadas de una zona del mismo color o púrpura. MICROORGANISMOS

CRECIMIENTO

Staphylococcus aureus ATCC Excelente 25923 Staphylococcus epidermidis Bueno ATCC 14990 Escherichia coli ATCC 25922 Inhibido Klebsiella pneumoniae ATCC Inhibido 700603 CARACTERÍSTICAS DEL MEDIO: ROJO

CARACTERISTICAS DE LAS COLONIAS Amarilla Roja Inhibido Inhibido

AGAR DEXTROSA SABOURAUD El agar Sabouraud es un tipo de agar que contiene peptonas.1 Se usa para cultivar dermatofitos y otros tipos de hongos. Medio Sabouraud dextrosa (SAB): El ágar Sabouraud dextrosa, modificado por Emmons, contiene un 2% de glucosa y es ligeramente ácido (pH=6.9), se considera el medio estándar para recuperar y mantener una amplia variedad de hongos que pueden aislarse en el laboratorio de micología clínica. Es el medio estándar para observar la morfología típica de los hongos, pero no es el medio ideal de crecimiento o para estudiar la esporulación. Este medio permite el crecimiento de actinomicetos aerobios, pero el SAB original (4% de glucosa), dificulta la recuperación de algunos hongos, sobre todo de Blastomyces dermatitidis. Se utiliza indistintamente en tubo o en placa. Fue inventado por, Raymond Sabouraud en 1892. Más tarde Emmons mejoró el medio, el nivel de pH se fue acercando al neutral para permitir el crecimiento de otros subcultivos de hongos

CANDIDA ALBICANS Líquido ascítico Es el líquido contenido y formado en la cavidad peritoneal por trasudación (ICC, cirrosis hepática, hipoproteinemia…), exudación (neoplasias, infecciones, traumatismos, pancreatitis…) o por derrame quiloso (lesión u obstrucción del conducto torácico). Cuando esta cavidad se inflama debido a una infección o el líquido ascítico contenido en ella se sobreinfecta deviene una peritonitis, cuyo resultado es el acúmulo de gran cantidad de éste.

Clásicamente se han reconocido 2 tipos de peritonitis, la primaria y la secundaria. El progreso médico ha contribuido a la aparición de nuevas formas de infección peritoneal, como aquellas que ocurren en pacientes en diálisis peritoneal crónica, con derivaciones ventriculoperitoneales de LCR o con derivaciones peritoneovenosas del líquido ascítico.

La peritonitis primaria, de prevalencia escasa, se produce espontáneamente sin evidencia de patología intraabdominal, es prácticamente una enfermedad no quirúrgica (ligada a ciertos grupos de enfermos con cirrosis hepática, síndrome nefrótico y otras condiciones predisponentes) y su etiología varía dependiendo de si los pacientes son pediátricos o adultos.

Las causas de peritonitis secundarias son múltiples, destacando las inflamaciones de la pared intestinal o de vísceras contiguas con posterior perforación intestinal (apendicitis, pancreatitis…), traumatismos o como complicación de la cirugía. Otras causas son mecánicas (obstrucciones intestinales…), vasculares (colitis isquémica necrotizante…) y neoplasias.

En aquellos casos en que el acúmulo de líquido ascítico sea debido a peritonitis infecciosa, nos podemos encontrar en la tinción de gram con: · Peritonitis primaria: - Niños: * Streptococcus pneumoniae y Streptococcus pyogenes: ídem a lo visto en LCR. * Haemophilus influenzae y otros estreptococos: con menor frecuencia. Ídem a lo visto en LCR. - Adultos: es esencialmente la peritonitis del cirrótico con ascitis. * Escherichia coli y otras enterobacterias: ídem a lo visto en LCR. * Enterococcus spp.: menor frecuencia. Muy difíciles de diferenciar del resto de estreptococos. Se asemejan mucho al neumococo, pero sin forma lanceolada. 18: Imagen gram: IMAGEN 18 · Peritonitis secundaria: por lo general es una infección mixta que comprende predominantemente anaerobios obligados y facultativos (de 3 a 6 microorganismos de media). El líquido peritoneal presenta > 3 gr/dL de proteínas totales y multitud de leucocitos (principalmente polimorfonucleares (PMN) ). Se debe realizar examen del contenido en amilasa. Es habitual la presencia de 17.000 a 25.000 leucocitos/mm3 con desplazamiento a la izquierda de la fórmula, y valores elevados de hematocrito y uremia (el flujo neto de formación de líquido peritoneal puede llegar a ser de 300-500 ml/hora; en estos casos el hemograma puede rendir solo 5.000 leucocitos/mm3, pero el recuento diferencial muestra un desplazamiento extremo hacia formas PMN inmaduras). En la tinción de Gram, si es positiva, nos encontraremos con más de 2 tipos de bacterias que, ordenadas de mayor a menor prevalencia, son: - E.coli y otras enterobacterias: ídem a lo visto en líquido pleural. - Bacteroides spp.: ídem a lo visto en líquido pleural. - Cocos anaerobios: ídem a lo visto en líquido pleural. - Clostridium spp.: grandes bacilos gram (+), con o sin esporas, como trozos de cinta. 19: Imagen gram de muestra; 20: Imagen gram de cultivo: IMAGEN 19 - Enterococcus spp.: ídem a lo visto en líquido pleural. - Streptococcus spp. y Staphilococcus spp.: ídem a lo visto en LCR. - Fusobacterium spp.: ídem a lo visto en líquido pleural. · Peritonitis asociada a dispositivos intraperitoneales: escapan al fundamento de esta revisión, ya que directamente se remiten al laboratorio de microbiología. Pero cabe resaltar que, mayoritariamente se observan Staphilococcus spp. y en algunas ocasiones bacilos gram (-) y levaduras tipo Candida.