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• Nelson Conislla Castillo

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2017

AISLAMIENTO IDENTIFICACIÒN DE HONGOS

E

MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL

UNIVERSIDAD NACIONAL JOSE FAUSTINO SANCHEZ CARRION INGENIERÍA AGRARIA, INDUSTRIAS ALIMENTARIAS Y AMBIENTAL

ESCUELA PROFESIONAL DE INGENIERÍA AMBIENTAL. ASIGNATURA: MICROBIOLOGIA AMBIENTAL TEMA: PRACTICA DE LABORATORIO N°3 DOCENTE: HUAYNA DUEÑAS LUIS ALBERTO ALUMNOS: PACHECO SANTILLAN DERIAN ANDRÉ PASTOR HUAMÁN CINTHYA ROSALES BAUTISTA ROBINSON TRUJILLO ROSALES EVELIN THALIA ZAMUDIO CHAVEZ JUAN LUPESCO

CICLO: VI HUACHO – PERÚ 2016 UNJFSC – INGENIERA AMBIENTAL

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1 OBJETIVOS Se pretende conseguir que los alumnos conozcan:   

Las buenas prácticas de trabajo en el laboratorio de Microbiología. Identificar los distintos tipos de hongos que se pueden encontrar en muestras biológicas y ambientales Aislas y sembras estos hongos en placa Petri utilizando correctamente sus respectivos agares, en distintos métodos de aislamientos

 Conocer las características macro morfológicas de colonias fúngicas de distintos tipos de hongos ya sea en : color, superficie, borde, consistencia, aspecto y desarrollo

 Atender las explicaciones y sugerencias de nuestro docente antes de realizar las practicas de laboratorio de microbiología en el aisalmiento de hongos

2 FUNDAMENTOS En el examen de las colonias y en las observaciones microscópicas, se utilizan una serie de términos que son útiles para describir las observaciones y que conviene recordar. 

La unidad fundamental microscópica de un hongo es la hifa. La combinación de hifas da lugar al crecimiento en masa del conocido micelio.



Las hifas divididas en células individuales por paredes transversales son denominadas septadas y las que no se subdividen aseptadas.

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La porción del micelio que se extiende hacia el sustrato del medio de cultivo se denomina micelio vegetativo.

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La porción que se proyecta hacia el exterior se denomina micelio aéreo o micelio reproductor.

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La identificación de los hongos está primariamente basada en las diferencias morfológicas de las estructuras reproductivas y la forma en que las esporas o conidios se producen en células

MORFOLOGÍA AL MICROSCOPIO DE DIFERENTES HONGOS Rhizopus oryzae: Las especies del género Rhizopus son comunes en muchos tipos de materiales y son frecuentes contaminantes en el laboratorio. Crecen muy bien en la mayoría de los medios de cultivo para hongos, especialmente en agar-patata a 24ºC. Presentan colonias algodonosas que se extienden por toda la placa. Las esporas se encuentran en esporangios globosos y grandes en forma de embudo. Esta especie fue utilizada en la segunda guerra mundial por los prisioneros británicos en Java para fermentar la soja y hacerla mas digerible. De esta forma se complementaba la escasa dieta de la que disponían.

Cladosporium cladosporioides: las especies del género Clasdosporium son también bastante comunes. La mayoría son patógenos de plantas, aunque algunas son saprofitos y originan problemas de putrefacción. C. cladosporioides presenta conidios no esféricos septados y ramificados. Es un hongo saprofito que se ha aislado del aire, suelo, textiles y pintura. Crece bien en agar-patata a 24ºC. Se utiliza en la industria como microorganismo de referencia para los ensayos de resistencia de diferentes materiales a los hongos.

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Penicillium chrysogenum: las especies del género Penicillium están muy extendidas y con frecuencia son agentes de destrucción. Algunas especies se utilizan en fermentaciones a nivel industrial para la obtención de diferentes compuestos como el ácido cítrico, ácido glucónico, penicilina, etc. En general los miembros de este género presentan micelio vegetativo septado, sin color o coloreado. Este micelio aparece en parte sumergido y en parte aéreo. Las diferentes partes en que se divide el micelio reproductor aparecen en la figura. P. chrysogenum presenta colonias azul-verdosas muy Conidios Fiálidas Métula Rama Tallo 10 extendidas, con el reverso amarillento. Esta especie produce penicilina, glucosa oxidasa, etc. Crece en agarextracto de malta a 24ºC.

Aspergillus flavus : las especies de este género crecen en casi todos los sustratos. Tienen especial importancia en el deterioro de alimentos. Producen toxinas peligrosas para el

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hombre y los animales. No todas las especies son perjudiciales, algunas se utilizan en la industria por sus capacidades fermentativas. Así se utilizan en la producción de sake, ácido oxálico, ácido cítrico, glucónico, etc. Los conidióforos emergen de forma perpendicular desde unas células especializadas con paredes engrosadas, denomonadas “pie” ‘[(e) en la figura]. La presencia de células pie, los diferencia del género Penicillium. Los conidióforos terminan en una forma globosa denominada “vesícula” (flecha en la figura). Estas vesículas soportan las fiálidas y las métulas. A. flavus presenta conidióforos largos y tienden a redondearse para dar una vesícula globosa. Las fiálidas ocupan la circunferencia completa. Las fiálidas son uniseriadas o biseariadas. Los conidios son amarillo-verdosos. Crece bien en agar-patata y en agar-extracto de malta a 24ºC.

3 MATERIALES Y MUESTRAS         

placa Petri mechero vaso precipitado autoclave encendedor alcohol al 96% agua destilada Agar sabouraund Asas de siembra

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Levadura de panificación Azúcar Frutas con hongos Pan con hongos Hojas con hongos Uñas humanas con hongos

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4 PROCEDIMIENTO Preparación de levadura 1. En un vaso precipitado colocar 10ml de agua destilada

2. Agregar dos cucharadas de azúcar y diluirla.

3. Agregar dos cucharadas de levadura de panificación (granulada)

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4. Taparla con un pedazo de papel y dejar reposar por media hora

SIEMBRA MUESTRA DE PAN CON HONGOS 1.- Primero esterilizar las asas de siembra

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2. raspar la zona con hongos y tomar una pequeña muestra

3. llevar la muestra tomada a las placas Petri ya preparadas con el agar para la siembra colocar la muestra al centro con mucho cuidado

5. Sellarla y llevarala a la estufa para la incubación a 22°c -25°c por 3 a 5 dias

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6. Pasado el periodo se observa la muestra

7. Observación microscópica

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SIEMBRA DE MUESTRA DE LEVADURA 1.- Esterilizar la asa de siembra

2.-Introducir el asa de siembra en la levadura previamente preparada

3.- llevar la muestra a la placa Petri para la siembra, la placa Petri ya se encuentra con el agar

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4.- sellarla y llevarla a incubar a una temperatura de 22°c-25°c por 3 a 5 dias

5.- Pasado el periodo se muestra la muestra

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6.- Muestra observada al microscopio

5 RESULTADOS Después del tiempo necesario que se encuentra en la estufa se observa lo siguiente: Dentro de la observación morfológica al microscopio se distinguieron algunas características de la estructuras microscópicas del micelio aislado, como las dimensiones de hifas estructuras características como frecuencia de septos, clamp y anastomosis principalmente

6 RECOMENDACIONES  



 

Es imprescindible el uso de bata de laboratorio. El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar cada práctica es conveniente desinfectar la superficie de trabajo, Los desinfectantes más habituales para esto son el alcohol (etanol 96°). Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama, Se deben evitar los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que pueden crear corrientes que originen contaminaciones o producir accidentes. Durante las prácticas está prohibido comer, beber. Cuando se manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz, ojos, etc. Libros, carpetas, abrigos y cualquier otro material que no se utilice en la realización de la práctica deben estar apartados del lugar de trabajo.

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Para deshacerse del material contaminado se utilizarán los recipientes adecuados, que serán esterilizados posteriormente, Nunca se debe tirar nada contaminado por la fregadera o a la basura común. Bajo ningún concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del laboratorio. No se debe pipetear nunca con la boca, Utilizar siempre pipeteadores manuales. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de microorganismos, etc.) se comunicará inmediatamente.

7 CONCLUSIONES 

Personalmente se concluye que los hongos al igual que las bacterias son seres vivos microscópicos ya que a estos también se le realizan los métodos de morfología y todo lo que esto conlleva de igual manera la tinción claramente otro tipo de tinción que de las bacterias puesto que su estructura no es la misma



Se pudo observar como es que se clasifican en la morfología, también que tipo de hongo era en el que se presenatba en los alimentos y la levadura



Se aprendio a realizar las tinciones en hongos y a que en ninguna de las practicas anteriores debemos de ser mas cuidadosos de lo común ya que aunque trabajamos con hongos de comidas y no son tan peligrosos podríamos ser alérgicos a ellos

8 CUESTIONARIO 1.- ¿DIBUJAR LA ESTRUCTURA DE 4 HONGOS DIFERENTES? . Somáticas Micelio es el conjunto de filamentos y un trozo del mismo se denomina hifa. Las hifas pueden presentar septos y entonces el micelio está tabicado. Septos primarios son los formados cuando hay división nuclear y adventicios los otros. Si los tabiques están ausentes se habla de micelio continuo. Los mohos son micromicetos filamentosos. Cuando el hongo es una célula aislada se dice unicelular o levadura . Los cortos filamentos compuestos por las células que brotan de una levadura constituyen el pseudomicelio. Plecténquima es un

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conjunto de hifas entrelazadas que se asemejan a un tejido. Se dice prosénquima si las hifas pueden ser reconocidas y pseudoparénquima cuando han perdido su individualidad. Esclerocio es un plecténquima generalmente macroscópico que puede permanecer en vida latente. Rizomorfa es un cordón grueso donde el conjunto de las hifas fusionadas ha tomado el aspecto de raíz. Rizoides son las hifas de succión, como raicillas, que penetran en el substrato. Haustorio es la hifa de succión del hongo parásito dentro de la célula del hospedador. Apresorios son unas hifas achatadas que se adhieren al substrato o al hospedador como sostén, especialmente en el comienzo de la infección.

Reproductoras Anamorfo es el hongo con multiplicación asexuada y teleomorfo es el mismo con reproducción sexuada. Se les asigna distinto género y especie. Holomorfo indica el ciclo de vida total. Esporas son los elementos de perpetuación de la especie. De acuerdo a la morfología reciben distinto nombre: alantospora con forma de banana, aleuriospora con base plana, dictiospora con septos longitudinales y transversales, didimospora con un tabique, equinulada como un erizo, escolescospora como un gusano, estaurospora como una estrella, feospora de color obscuro, fragmospora con tabiques transversales, fusiforme como un huso, helicospora como una espiral, hialospora de color claro y translúcido, planospora móvil, verrucosa con verrugas, zoospora con flagelos. Las balistosporas son proyectados violentamente una vez maduras. Las hipnosporas son aquéllas capaces de permanecer con vida latente por largo tiempo. Las esporas pueden ser de origen asexuado (mitosporas) o sexuado

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(meiosporas), y por su ubicación relativa internas o externas. Las mitosporas se originan en las estructuras anamórficas y las meiosporas en las teleomórficas.

Anamórficas Artrosporas o artroconidios son esporas desarrolladas en una hifa terminal que al madurar se separan. En algunos hongos se forman artrosporas separadas por una zona libre de citoplasma (disyuntor) cuya pared se rompe liberando las entosporas o clamido-artrosporas. Clamidospora o clamidoconidio es una hipnospora o célula de resistencia, terminal o interh ifal, con pared gruesa y substancias de reserva. Blastosporas o blastoconidios son las esporas que se originan de una parte de una célula somática, una hifa, un conidióforo u otra espora, y se desarrollan antes de la formación del septo que lo separa de la célula de origen. Conidios o conidiosporas son las esporas asexuadas externas. Si están implantadas directamente sobre la hifa se llaman sésiles. La parte del micelio que origina y sostiene a las esporas se denomina esporóforo y si se trata de conidios se dice conidióforo. Fiálide es la célula conidiógena que desde un extremo origina por brotación y sin aumentar su longitud, los fialoconidios o fialosporas. La pared de la fiálide suele extenderse en el ápice formando un collarín. Anélide es una célula conidiógena con el ápice ancho y cicatrices en anillo, que se alarga con la formación de cada espora. Los conidióforos pueden ser simples o ramificados y a veces están agrupados en un conidioma. En Penicillium cada nivel de ramificaciones recibe distinto nombre, se llama métulas a las que sostienen a las fiálides productoras de esporas. En Aspergillus las fiálides o las métulas están implantadas sobre una vesícula o dilatación del esporóforo. Los conidios nacen de los conidióforos aisladamente o quedan reunidos, ya sea en una cabezuela mucosa o en cadenas. Éstas se forman por sucesión basípeta cuando todos las esporas surgen de la célula conidiógena o basífuga si es por brotación de la espora anterior. A veces después que se forma un conidio, el conidióforo se alarga lateralmente y origina el segundo conidio. El proceso continúa y las esporas quedan en zig-zag (proliferación simpodial). En algunos hongos surgen, simultáneamente o no, varios conidios en diferentes UNJFSC – INGENIERA AMBIENTAL

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puntos de la misma célula conidiógena (brotación múltiple). Los conidióforos suelen estar reunidos en un haz llamado coremio o sobre un conjunto de hifas entrelazadas constituyendo un conidioma, ya sea un esporodoquio (almohadilla de fiálides con las esporas expuestas) o una acérvula (estructura chata y cubierta al principio por el tejido del hospedador donde los esporóforos están en empalizada). Funículo es una cuerda de hifas de las cuales surgen, a intervalos, los conidióforos. Picnidio es un conidioma globoso o en forma de pera, cuya pared plectenquimatosa está recubierta internamente por las células conidiógenas y está abierto por un ostíolo. Las esporas originadas se llaman picnidiosporas. También la cavidad picnidial puede estar encerrada en una estructura somática compacta denominada estroma. Esporangio es una estructura globosa con una membrana peridial simple, generalmente en el extremo de un esporangióforo, que contiene innumerables esporangiosporas. El ápice dilatado del esporangióforo se llama columela. Cuando el esporangio tiene pocas esporas se denomina esporangiolo. Los merosporangios son cilíndricos, contienen pocas esporas y están reunidos sobre la columela o los extremos de las ramas del esporangióforo; si son monosporados suelen ser considerados como conidios. Los zoosporangios de los hongos acuáticos o parásitos contienen zoosporas móviles. Conidiosporangio es el zoosporangio inmaduro liberado por algunos hongos.

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Teleomórficas Gametas son las células diferenciadas que se fusionan y gametangios las estructuras que las producen. Homotálicos son los hongos que forman los gametangios de distinta polaridad en el mismo micelio. Cuando cada micelio da sólo gametangios de la misma polaridad, es necesario enfrentar dos micelios distintos del mismo hongo heterotálico para originar las esporas sexuadas. En muchos macromicetos se produce la somatogamia o fusión de células no diferenciadas que originan un micelio dicariótico, a veces con una conexión hifal a manera de puente (fíbula) entre cada célula. Las oosporas son hipnosporas sexuadas originadas por heterogamia. La estructura femenina u oogonio produce unos elementos grandes inmóviles u oosferas que en algunos hongos se fusionan con los anterozoides (zoosporas) producidos en la estructura masculina o anteridio, y en otros se ponen en contacto con el anteridio por medio de los tubos de fertilización. Las zigosporas son hipnosporas sexuados formados por isogamia. La hifa emite un mamelón en el que se diferencian dos partes: suspensor y gametangio. Los gametangios se fusionan originando la zigospora que suele estar rodeada por hifas protectoras nacidas de los suspensores. Ascosporas son las esporas sexuadas internas que se originan en un número limitado (generalmente 4 u 8) dentro de una célula llamada asco. En las levaduras se fusionan los citoplasmas de dos células de polaridad distinta e inmediatamente o mucho después de la cariogamia ocurre la meiosis formándose las ascosporas dentro del asco libre. En los hongos filamentosos se producen gametangios (anteridio y ascogonio), en general morfológicamente distintos, y los núcleos pasan a través del poro formado en el punto de contacto o de un tubo receptivo llamado tricogino. En algunas especies heterotálicas los espermacios, microconidios incapaces de germinar, cumplen la función de gametas masculinas. Después de la fecundación nacen hifas ascógenas binucleadas cuyas células terminales, en forma de cayado, se convierten en ascos. Las hifas somáticas vecinas a los elementos sexuales suelen formar un plecténquima originando un ascoma que si está cerrado y es esférico se llama cleistotecio. Cuando tiene las hifas fértiles (himenio) estratificadas y generalmente una forma de pera, poseyendo en la madurez un poro u ostíolo por donde salen las ascosporas, se denomina peritecio. Si el plecténquima tiene forma de copa con el himenio expuesto se habla de apotecio. El ascostroma es una estructura con cavidades o lóculos que contienen ascos. Los ascos tienen distinta forma según las especies, pueden ser sésiles o pedicelados, estar organizados en un fascículo común o nacer independientemente. Con frecuencia hay entre los ascos hifas estériles alargadas llamadas parafises. En el ostíolo UNJFSC – INGENIERA AMBIENTAL

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suele haber hifas cortas como pelos, las perifises. Algunos ascomas tienen hifas ornamentales. La liberación de los ascos puede ser explosiva o no. En algunos ascos se abre un opérculo en el momento de liberar las esporas. Los ascos bitunicados tienen dos paredes y la externa se rompe, dejando expandirse la interna, antes de la descarga de las ascosporas. Basidiosporas son las esporas sexuadas externas que se originan en el basidio. Este es una célula hifal binucleada que sufre cambios morfológicos y se llama probasidio al estado o parte de la misma donde se produce la cariogamia. Se denomina metabasidio a la parte o estado en el cual ocurre la meiosis y forma 4 (a veces 2) tubos pequeños o esterigmas en cada uno de los cuales se forma una basidiospora. Hay dos tipos de metabasidios. El holobasidio es cilíndrico o con aspecto de clava y en algunos hongos tiene forma de tenedor. Los fragmobasidios están divididos generalmente en 4 células por septos transversales o longitudinales. En muchos hongos las hifas se agregan para formar un basidioma macroscópico y en aquéllos con el himenio expuesto, las basidiosporas están sobre unas laminillas radiales o tubos o espinas ubicados generalmente en el envés. Algunos basidiomas son como una sombrilla extendida (píleo) sostenida por un pie que a veces tiene un anillo o resto de una membrana que unía al píleo con el pie. Otras veces hay en la base una volva o resto de un velo que envolvía a todo el basidioma joven. Hay hongos cuyos basidiomas se asemejan a un abanico, en otros son cilíndricos, esféricos o coralinos. En el basidioma cerrado el peridio envuelve a la gleba fértil y se rompe cuando las esporas están maduras. En las royas y carbones el probasidio es una espora de pared muy gruesa llamada teliospora o teleutospora, que germina formando un tubo o metabasidio que dará origen a las basidiosporas. En el micelio uninucleado de algunas royas se forma el espermogonio o picnio que da gametas llamadas espermacios o picnosporas y lleva las hifas receptivas en la parte exterior, pero no hay autogamia. Las células binucleadas formadas como resultado de la espermatización constituyen el estrato basal del ecidio y comienzan a dividirse produciendo cadenas de ecidiosporas. Por germinación de una ecidiospora surge un micelio binucleado que origina el uredosoro con las uredosporas generalmente de largos pedicelos. Éstos al germinar dan otra vez un micelio dicariótico que puede formar nuevas uredosporas o bien teleutosporas con células binucleadas y paredes gruesas en el teliosoro o teleutosoro. En los carbones el micelio binucleado se forma por fusión de dos células compatibles de diverso tipo y constituye un soro de teleutosporas o ustilosporas. Cada una de éstas al germinar se convierte en un metabasidio sin esterigmas que origina las basidiosporas o esporidios por brotación.

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2.-¿DESCRIBIR OTRA TECNICA DE AISLAMIENTO DE HONGOS? Aislamiento a partir de trozos de tejido vegetal 

Trozos de tejido afectado de la zona de avance son sembrados en medio de cultivo (ej. Madera) Aislamiento de bacteria a partir del tejido infectado



Tocando con el ansa en la zona de avance de la infección es posible aislar la bacteria. Aislamiento de bacterias por macerado del tejido vegetal



El tejido afectado es macerado en mortero y luego el macerado es estriado en placa. Aislamiento directo a partir del signo.



Cuando la muestra vegetal presenta signo es posible tomar una pequeña porción del mismo y sembrar en una placa con medio de cultivo. Aislamiento a partir del exudado bacteriano



Un trozo de tallo de una planta afectada vascularmente es colocado en agua en recipiente con agua o saline esteril. 3.-.MENCIONE

LA

IMPORTANCIA

DE

LOS

HONGOS

EN

MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL Se utilizan en la elaboración de productos alimenticios como el pan, vino, cerveza y queso. Son una valiosa fuente de alimentación para el ser humano como los champiñones, las setas , las trufas.

Algunas especies se utilizan en la industria para producir ácidos orgánicos, como el cítrico, láctico o gálico.

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Algunos son patógenos, para plantas, animales, y hombre (pie de atleta, tiña y candidiasis) 4.- ESCRIBIR ALGUNOS METODOS DE AISLAMIENTO Métodos de aislamiento Técnica de dilución en placa Esta técnica se utilizó para cuantificar los microorganismos en placa de cultivo realizando diluciones del suelo. Por consiguiente, se obtuvo un estimado de la población viable cultivable en los medios de cultivo. Procedimiento: se hicieron diluciones seriadas en base de las muestras en agua peptonada 0,1% desde la dilución 10−1-10−5 , las cuales e agitaron por cinco minutos, para luego realizar siembras masivas en superficie (0,1 mL) en los medios de cultivo. Se sembraron las diluciones 10−3-10−5, por duplicado posteriormente se llevaron a incubar de 3 a 6 días a 25° C para observar crecimiento de colonias de hongos, a partir de las cuales por subcultivos se obtuvieron cultivos axenicos de acuerdo a las diferentes características macroscópicas (Valencia, 1979). Técnica de lavado de suelo En esta técnica se utilizó el aparato lavador modificado que permitió aislar hongos filamentosos en estado activo, cuyas hifas permanecieron adheridas a las partículas o al sustrato. Procedimiento: se tomaron 20 g de suelo previamente cernido por tamiz de 2mm y se colocaron en el aparato lavador. Las partículas del suelo se tomaron del segundo embudo y se secaron sobre papel de filtro en una caja de Petri, para luego transferir 5 partículas sobre placas con agar PDA por duplicado. Posteriormente se llevaron las placas a incubación de 3 a 6 días

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a 25° C para observar crecimiento de colonias de hongos, a partir de las cuales se obtuvieron cultivos axenicos realizando subcultivos de acuerdo a las diferentes características macroscópicas.

9 BIBLIOGRAFIA Aquiathl Ramos, M. A., y Perez Chabela, M. L. 2004. Manual de practicas de Laboratorio de Microbiologia General. Universidad Autonoma Metropolitana, Unidad Iztapalapa. Mexico. Departamento de Biotecnologia . 116p. ARC-Plant Protection Research Institute. 1999. Collecting and preserving fungi. Biosystematics Division, ARC-PPRI,South Africa. 86p. Baker, F. J., y Breach, M. R. 1990. Manual de técnicas de Microbiologia Medica. Editorial Acribio. Zaragoza, España, 676 p. Castaño-Zapata, Jy Del Rio Mendoza, L. 1997. Manual para diagnostico de hongos, bavterias, virus y nematodos fitopatogenos. Zamorano- Universidad de Caldas. 210 p. CommonWealth Mycological Institute – C.A.B. 1985. Manual para Patologos Vegetales. Lamport Gilbert Printers Ltda. Gran Bretaña. 438 p. ICMSF. Microorganismos de los alimentos. Tecnicas de análisis Microbiologico. Vol 1, 2da edición, Editorial Acribia Zaragoza España. España 1984. Madigan, M. T.; JM.; y Parker J. 2003. Brock: Biologia de los Microoganismos. Editorial Prentice Hall Hispanoamericana S.A. 10° Ed. Madrid. 1011p. Manual de medios de cultivo Merck. Editorial Merck Alemana. 1994. Pelczar. M.. y Chan. E.C.S. 1984. Elementos de Microbiologia. Editorial MacGraw Hill. Mexico. UNJFSC – INGENIERA AMBIENTAL

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Pineda Vasquez , M.A., Sanchez de Praguer, M., Peña Rueda, A., ESCARRIA Parra, L. P.,GALLO Valdes, P.I.- Ramos Naranjo, F., Molina Tirado, O.I., Martinez Cevera, L., y Escobar, F. a. 2008. Microbiologia . Guias para el laboratorio. 2° Ed. Universidad Nacional de Colombia, Sede Palmira. Facultad de Ingenieria y Administración. Palmira. Valle del Cauca. 115p.

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