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EPIDEMIOLOGÍA Y MANEJO INTEGRADO DE PROBLEMAS FITOSANITARIOS EN

AGAVE TEQUILANA WEBER VAR. AZUL ENFERMEDADES

DEL AGAVE TEQUILERO

Dr. Gil Virgen Calleros

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TEQUILA EPIDEMIOLOGÍA Y MANEJO INTEGRADO DE PROBLEMAS FITOSANITARIOS EN

AGAVE TEQUILANA WEBER VAR. AZUL Resumen Se determinaron los principales fitopatógenos y maleza que se asocian al cultivo de agave (A. tequilana W. var. azul) en la zona de Altos y Centro del Estado de Jalisco. Se realizaron muestreos continuos de septiembre de 1998 a abril de 1999. También se determinó el estado fitosanitario en la zona de los Altos, tomando una muestra de 100 plantas en un sitio determinado por cada 100 hectáreas. Por otra parte se estudió bajo condiciones de laboratorio el efecto de la temperatura y el pH sobre el crecimiento radial del micelio de Fusarium oxysporum. Asimismo se evaluaron diferentes agroquímicos con acción tanto fungicida como bactericida para el control de la pudrición del cogollo causada por Erwinia carotovora. Los fitopatógenos encontrados fueron: Erwinia carotovora, Fusarium oxysporum, Phytophthora sp, Didymosphaeria sp (Asterina mexicana), Botryodiplodia sp, Pleospora sp, un virus no identificado y nemátodos de los géneros Pratylenchus sp, Dorylaimus sp, y Helicotylenchus sp.

El estudio del estado fitosanitario en la zona de los Altos mostró un 56.1% de plantas enfermas por Erwinia sp (pudrición del cogollo) desde un grado 2 a grado 5 (1 = planta sana; 5 = planta muerta) y un 43.9% de plantas sanas. Del total de plantas enfermas cerca del 88% se encuentran en grado 2. También se determinó que el mayor número de plantas con grado 5 se encontró en predios con una alta infestación de maleza. Datos similares se encontraron en la zona de tequila, aunque en este caso se determinó un porcentaje mayor (cerca de 20%) de plantas enfermas con Fusarium, especialmente en la zona del municipio de Tequila. La maleza asociada a agave incluye 20 especies de gramíneas y las más abundantes fueron: Digitaria spp, Chloris gayana y Rhynchelytrum repens. También se encontraron 12 especies de maleza de hoja ancha. El rango óptimo de pH para el desarrollo del micelio de F. oxysporum fue de 5.0 a 6.5 a 20oC y de 5.0 a 7.0 a 10 oC. Con respecto a la evaluación de agroquímicos se encontró que el sulfato de cobre pentahidratado fue el más consistente en el control de la pudrición del cogollo.

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TEQUILA INTRODUCCIÓN

Algunos de los principales patógenos que se han reportado en agave Agave tequilana L. Weber var azul, son: la mancha negra Asterina mexicana y la antracnosis Colletotrichum agaves ( Pérez, 1980 y Villalvazo, 1986), el tizón de las pencas causado por Alternaria sp y Stangonospora gigantea, la pudrición roja de las pencas causada por Chalariopsis sp, la pudrición de la raíz causada por los hongos Armillaria mellosa y Fusarium sp. (Granados 1993). Por otra parte, también se han asociado al agave la bacteria del género Erwinia sp, así como los hongos Fusarium sp y Phytium sp, (Valenzuela, 1994). La pudrición del tallo causada por Fusarium oxysporum, (Luna, 1996). Entre los fitopatógenos más importantes de este cultivo sin duda alguna destacan aquellos asociados a la pudrición del cogollo y a la marchitez del agave. Estos síntomas se han atribuídos a fitopatógenos tales como Erwinia sp y Fusarium sp, o bien por la acción de ambos fitopatógenos (Martínez, 1994 y Velez et al, 1996). Los síntomas típicos de la pudrición del cogollo son lesiones necróticas y acuosas en las hojas, que en la mayoría de los casos, inician en la

espina apical o en las espinas laterales. Estas lesiones avanzan hacia el centro de la hoja y en el centro del cogollo causan una pudrición descendente que llega hasta la piña y puede provocar la muerte de la planta. Por otra parte el hongo Fusarium sp produce síntomas iniciales tales como: «encarrujamiento» o «enrollamiento» de las hojas y decoloración de las hojas que contrasta con el azul típico de las plantas sanas. También causa una pudrición seca del sistema radicular, dejando el tejido con una apariencia polvosa, la cual avanza hacia la piña (muerte ascendente). A diferencia de la pudrición bacteriana, no existen lesiones acuosas en las hojas (Martínez et al. 1998). Estas 2 enfermedades se han diseminado considerablemente en las áreas cultivadas de agave, ocasionando un grave problema. Ante tal situación, existe la necesidad de generar conocimientos básicos acerca de los factores que favorecen el desarrollo y diseminación de las enfermedades, lo cual permitirá generar estrategias de manejo integrado. Por otra parte, sobre el problema que implica la presencia de maleza en

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TEQUILA el cultivo de agave, se ha producido poca documentación para el Estado de Jalisco. Actualmente poco o nada se sabe sobre su biología, taxonomía, distribución, grado de infestación, así como los posibles efectos directos que por competencia pudieran ocasionar al cultivo o sobre el efecto indirecto, como lo es, su posible papel como hospederos naturales de fitopatógenos. Los conocimientos generados a la fecha han sido relacionados con el control químico y en su mayoría se han limitado a la realización de pruebas de efectividad de los herbicidas, y los resultados a la fecha muestran inconsistencia, por tanto no aportan beneficios evidentes al cultivo. En la actualidad es indiscutible que existe la necesidad de generar información sobre la distribución espacial de especies de maleza asociadas al cultivo del agave. Estos conocimientos son básicos para entender las interacciones entre las especies de maleza y los cultivos (Pimienta, 1984). Los conocimientos generados sobre un fuerte sustento ecológico y biológico de las especies de maleza, permitirán establecer un manejo adecuado de la maleza asociada al agave.

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El presente trabajo pretende recabar y producir información referente a los aspectos básicos de las principales enfermedades y de la maleza asociada a agave para fundamentar futuras estrategias de manejo y control integral de los organismos que atacan este cultivo en las zonas productoras del Estado de Jalisco.

Los objetivos del presente proyecto son: Identificación de las principales enfermedades, así como la entomofauna y maleza asociada al cultivo de agave, incluyendo algunos de los principales enemigos naturales. Evaluación del estado fitosanitario actual de agave. Estudio epidemiológico de las enfermedades con énfasis en la marchitez, considerando la interrelación patógeno-insecto-maleza, así como la información meteorológica relevante en el desarrollo de las mismas. Determinación de las estrategias de manejo integrado, considerando control químico, biológico, modificación de las características del suelo y prácticas culturales para el manejo y control de enfermedades.

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TEQUILA MATERIALES

Y MÉTODOS

Aislamiento e identificación de las enfermedades Para la identificación de las principales enfermedades, se colectaron muestras de plantas enfermas, separándolas por grupo de síntomas (pudrición de cogollo, marchitez, manchas foliares, etc.) para facilitar su identificación. Dichas muestras se procesaron en medio de cultivos papa-dextrosa-agar (PDA) y agar nutritivo (AN). Para ello, se cortaron trozos de 0.5 cm de diámetro de las áreas dañadas. Posteriormente, se desinfectaron con una solución de hipoclorito de sodio al 3% durante 2 minutos, enjuagándose después tres veces con agua destilada estéril. Los trozos de tejido desinfectado fueron colocados en placas de petri con medio PDA o bien con AN; este último, para observar los agentes asociado a la «pudrición de cogollo». Las placas sembradas se incubaron a 20+2 oC durante 48 horas, para el caso de bacterias y 5 a 7 días para hongos. Para el caso de los fitopatógenos asociados a manchas foliares, se realizaron observaciones en un estereoscopio para determinar la presencia de estructuras reproductivas.

Cuando estas no se encontraron, las muestras se incubaron en cámaras húmedas por un período de 2 a 3 días, hasta que aparecieran las estructuras, realizando cortes para su observación. La identificación de los fitopatógenos asociados a agave se realizó con claves taxonómicas especializadas para hongos, propuestas por Barnett y Hunter, (1987). Las bacterias se resembraron en medio Cristal Violeta Pectato (CVP) el cual es selectivo para el desarrollo de Erwinia, dado que solo se encontró la presencia de esta bacteria.

Pruebas de Patogenicidad para E. carotovora Se realizaron inoculaciones sobre plantas sanas de agave de 1 año de edad, mediante la inyección de una suspensión bacteriana a una concentración de 107 células/ml. La inoculación se llevó a cabo en tres plantas, tomando cada una como una unidad experimental Asimismo, se realizó también la inoculación de agua destilada estéril en 3 plantas sanas, las cuales sirvieron como testigo. Todo ello se llevó a cabo en 3 niveles de la planta en el ápice del

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TEQUILA cogollo, parte media de la planta y en la base del cogollo. Después de inoculadas las plantas se cubrieron con bolsas de plástico para favorecer el desarrollo de la pudrición. La evaluación se tomo como el número de días en que apareció la lesiones iniciales y otra más tomando el tiempo transcurrido hasta que la planta completa murió. En todos los casos la inoculación fue subepidérmica, es decir por infiltración de la suspensión bacteriana.

Aislamiento de bacterias antagónicas Se tomaron muestras de suelo de la rizósfera de plantas que presentaban una apariencia sana, en el rancho El Llano, localizado en el municipio de Santa Cruz del Astillero. El suelo fué tamizado en una malla No. 60. Con el suelo se inocularon placas de Petri que contenían medio PDA, usando una esponja estéril de 2 cm de diámetro impregnada con el suelo y presionándola tres veces sobre la placa de Petri, de tal manera que se fuera diluyendo la muestra. Las placas de petri con PDA inoculadas se incubaron a 29+oC durante 24 horas. Las colonias bacterianas se transfirieron por picadura con la punta de un palillo estéril, a otra caja con medio PDA. Después de crecidas y purificadas, se transfirió de nuevo a un tubo con PDA inclinado. Los cultivos puros se conser-

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varon a 4oC hasta su posterior utilización en pruebas de inhibición .

Inhibición in vitro Se realizó de acuerdo a la metodología propuesta por Virgen-Calleros et al (1996), la que consistió en colocar en el centro de una placa de Petri, con medio PDA, un disco de 0.5cm de diámetro de micelio de F.oxysporum, y alrededor del hongo a una distancia de 2 cm, una siembra por picadura de 10 aislados bacterianos. Las placas se incubaron a 20oC + 3oC, por 72 horas. Las bacterias que inhibieron el crecimiento micelial del hongo fueron seleccionadas para su posterior identificación mediante el uso de pruebas bioquímicas propuestas por MacFaddin (1990).

Evaluación del estado fitosanitario Para determinar la importancia de los problemas fitopatológicos en agave se realizó un muestreo aleatorio, en la zona de los altos para estimar la distribución, incidencia y severidad de las 2 principales enfermedades («pudrición de cogollo» y «marchitez»). Se midieron empleando la escala arbitraria de 1 a 5, propuesta por Martínez et al (1998), donde 1 es planta sana y 5 planta muerta (cuadros 1 y 2). El muestreo se realizó en los municipios de la zona altos, utilizando 1 sitio de muestreo

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TEQUILA para cada 100 has de cultivo. El muestreo dentro de los predios se realizó de manera sistematizada. En cada uno de los predios muestreados se dejaron 4 hileras de planta como borde y se inició en la quinta hilera. Así mismo, se dejaron las primeras 20 plantas para evitar el efecto de orilla y se tomaron los datos en las siguientes 20 plantas. Lo anterior se repitió cada 5 surcos, para completar un total de 100 plantas por predio muestreado. Los datos obtenidos fueron usados para determinar el porcentaje de plantas enfermas y grado de severidad.

Identificación, frecuencia y densidad de maleza Se llevó a cabo un muestreo de maleza en 34 sitios en los municipios Arenal, Amatitan, Tequila, Zapotlanejo, Tototlán, Arandas y Jesús María en el Estado de Jalisco, durante el verano y otoño de 1998. En cada sitio se realizaron conteos de especies en cuatro cuadrantes de 0.5 m x 0.5 m (0.25m2) por sitio, registrándose el número de especies por cuadrante. Además, se registró el porcentaje de cobertura por especie en cada sitio y se realizó un reconocimiento visual de aquellas especies que aparecen como rodales en las áreas aledañas al cultivo. Al momento de realizar la cuantificación y colecta de especies en campo para su

identificación taxonómica, fueron revisadas para detectar síntomas de la enfermedad conocida como “marchitez”, para seleccionarlas y someterlas posteriormente a un estudio sobre su función como posible hospedero natural. Con los datos obtenidos del registro de especies por cuadrante, se obtuvo la frecuencia, densidad absoluta y relativa de cada especie.

Efecto de la temperatura y pH sobre el crecimiento micelial de F. oxysporum Se determinó el crecimiento del micelio de F. oxysporum a diferentes niveles de pH y temperatura (cuadro 3). Se tomó un disco de 9 mm de diámetro, colocándolo al centro de la placa de petri con medio PDA. Para ajustar los valores de pH se utilizó ácido acético al 30% para acidificar y NaOH 1N para alcalinizar. Para los valores de rangos de pH de 3.0 y 3.5 se utilizó carragaenina como medio gelificante en lugar de agar. La carragaenina no causa efecto directo sobre el crecimiento del micelio del hongo, esta se usó en lugar de agar, dada que la condición de acidez no permite que este último solidifique. Las placas se incubaron a 10° C y 20° C hasta que en algún valor se alcanzara el máximo desarrollo del micelio del diámetro total de la caja de petri. El

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TEQUILA experimento se analizó con un diseño completamente al azar en arreglo factorial a (pH) x b (temperatura) con la finalidad de conocer si existe interacción entre estos factores. La separación de medias se realizó mediante la prueba de Scheffe. Las variables medidas fueron crecimiento radial del micelio hasta que se alcanzó el máximo desarrollo (9 cm), momento en que se tomó la última lectura.

Efecto de las condiciones climatológicas en la distribución de las enfermedades Para determinar el efecto de las condiciones climatológicas, sobre la presencia y distribución de las principales enfermedades, se tomaron en cuenta temperatura ambiente (promedio de la temperatura máxima y mínima), temperatura del suelo y precipitación, los datos de estas condiciones climatológicas se obtuvieron de las estaciones meteorológicas (propiedad de Agave Azul) establecidas en 3 municipios de la región productora de agave del estado de Jalisco (Tequila en la zona Centro y Acatic y Tepatitlán en la zona Altos), estos datos correspondieron al año 1998. Los datos promedio de las condiciones señaladas anteriormente fueron analizados en función de la distribución y presencia de las principales enfermedades.

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Ensayo de control químico de la pudrición del cogollo Se realizó un ensayo de control químico de la «pudrición del cogollo» (E. carotovora), usando 2 formulaciones de Sulfato de cobre pentahidratado (uno sistémico y otro no sistémico) (cuadro 4). El experimento se estableció en el municipio de Zacoalco de Torres. El ensayo se estableció bajo un diseño de bloques al azar, con 4 repeticiones. La unidad experimental fue de 5 plantas de agave. Las plantas fueron seleccionadas con la presencia de grado 2 de la enfermedad, de acuerdo a la escala de daño propuesta por Martínez et al (1998) (Cuadro 1). El ensayo inició con la primera aplicación el 30 de abril de 1999, se realizaron 2 aplicaciones posteriores los días 7 y 14 de mayo. Después de cada una de las aplicaciones se realizó la evaluación. Asimismo se realizó una evaluación final 2 meses después del inicio del ensayo (30 de junio de 1999). La evaluación consistió en realizar una nueva calificación usando la escala citada. Para confirmar que E. carotovora era el causante de la enfermedad evaluada, se hicieron aislamientos de muestras de hoja enferma en medio de cultivo CVP. La aplicación de los productos, fue aspersión dirigida al follaje procurando un buen cubrimiento se usó un vo-

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TEQUILA lumen de 200 litros de agua por hectárea. Con los datos de las evaluaciones se realizó el análisis de varianza y prueba de Tuckey al 0.05 de significancia con el paquete estadístico SAS. los ín-

dices de la enfermedad se transformaron en porcentajes de infección con la fórmula de Towsend-Heuberger para posteriormente realizar el ANVA, asimismo se calculó la eficacia de control con la fórmula de Abbott.

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TEQUILA RESULTADOS

Y DISCUSIÓN

Identificación de enfermedades Los principales fitopatógenos que se han identificado en diferentes partes de la planta se muestran en Cuadro 5. De acuerdo a las observaciones de incidencia y severidad los fitopatógenos más importantes por sus efectos sobre el desarrollo de la planta así como por su distribución son Erwinia carotovora. (“pudrición del cogollo”) y Fusarium oxysporum. (“marchitamiento”). Se ha encontrado que el daño de E. carotovora se asocia en la mayoría de las ocasiones con una pudrición que inicia a nivel de la base de las espinas, ya sean laterales o apicales, predominando en estas últimas, sobre todo en las hojas centrales de la planta, de donde posteriormente avanza la pudrición hacia la piña. Así mismo se observó que el avance de la pudrición por E. carotovora depende de la humedad que se forma en las hojas internas del cogollo, esto aparentemente se debe a que la película de agua que se forma sobre las hojas reduce el nivel de oxígeno, favoreciendo con ello el desarrollo de la bacteria. Lo anterior se ha demostrado en la degradación natural e inducida de te-

jido de tubérculos de papa infectados con E. carotovora, encontrándose que esta degradación es menor en condiciones de alto nivel de oxígeno (Maher y Kelman 1983) y es más severa cuando existen niveles bajo de oxígeno (Lund y Wyatt, 1972). Precisamente la humedad que se forma en el tejido puede causar una reducción en el nivel oxígeno a cero en 2.5 hr a 21oC, tal como lo han demostrado Burton y Wigginton (1970). Se conoce además, que en la degradación del tejido por Erwinias que causan pudriciones blandas, intervienen enzimas pectolíticas como pectato-liasas, poligalacturonasas y pectin-liasas (Kotoujansky, 1987), mismas que pueden verse involucradas en pudrición del cogollo de agave. Se encontraron también dos enfermedades que previamente no se habían reportado en este cultivo. La primera, es una mancha foliar causada por el hongo Botryodiplodia sp, que inicia como una mancha amarillenta (figura 1), la cual posteriormente se torna necrótica, momento en el cual se forman los picnidios sobre las manchas. Este patógeno presenta conidios bicelulares en picnidios en estroma y

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TEQUILA se encontró en los municipios de Magdalena y Acatlán de Juárez. Por otro lado en la zona de los altos se encontró ampliamente distribuida la otra enfermedad denominada mancha anular, que se presenta como una serie de pequeños puntos en círculos que a medida que maduran estas estructuras se tornan de un color rojo-negrusco. Este hongo presenta ascas bitunicadas con ascosporas bicelulares y peritecios en estromas formándose principalmente en las hojas externas de la planta. La presencia de este patógeno se puede encontrar en cualquier época del año en la zona de los altos.

rrió la pudrición completa. Esto ocurrió en las 3 plantas inoculadas, no así en donde solo se inoculó agua estéril. Determinando con ello que la bacteria Erwinia carotovora es responsable de la pudrición del cogollo. Trabajos simultáneos en CINVESTAV han mostrado que la utilización de primers específicos para la amplificación por PCR de esta bacteria han sido positivos en muestras enviadas por nuestro laboratorio (Olalde, 1999). En el caso de F. oxysporum las pruebas de patogenicidad están actualmente en desarrollo por lo cual no se muestran resultados.

Pruebas de patogenicidad La inoculación de E. carotovora resultó en el desarrollo de una lesión necrótica, semejante a aquella que ocurre en campo. Esta lesión apareció en promedio a los 20 días después de inoculada la planta, con un tamaño de lesión de casi 1 centímetro y fue mayor su avance cuando se inoculó en la parte central del cogollo, la pudrición completa del cogollo ocurrió en promedio de 5 meses después de inoculada (figura 5), inicialmente la pudrición del cogollo avanzó del sitio de inoculación hacia la piña, pero una vez que llegó a la base del cogollo la pudrición avanzó del sitio de la inoculación hacia el ápice del cogollo hasta que ocu-

Inhibición in vitro de F. oxysporum con bacterias antagónicas De casi un promedio de 500 cepas aisladas de rizobacterias en el laboratorio, solo 2 mostraron antagonismo al crecimiento micelial de F. oxysporum in vitro, mostrando halos de inhibición promedio de 0.5 a 1 cm de diámetro. Ambas cepas se probaron de nuevo in vitro colocándose una estría de la bacteria en un extremo y en el otro un disco de micelio del hongo (figura 6). Las bacterias antagónicas fueron identificadas como Bacillus sp. basados en pruebas bioquímicas propuestas por MacFaddin (1990). Actualmente se realizan también ensayos para demostrar su importancia en el control biológico.

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TEQUILA Evaluación del estado fitosanitario Con respecto al estado fitosanitario, los datos hasta ahora obtenidos muestran en la zona de los altos un 56.1% de plantas de enfermas por Erwinia (desde grado 2 a grado 5 de la escala) y un 43.9% de plantas sanas, a este respecto el cuadro 6 muestra un ejemplo de la severidad de daño causado por Erwinia sp. Se observó que tanto en el predio San Ramón como en el predio ingreso al Zamorano existió el mayor numero de plantas con grado 5 (muertas), en ambos casos los predios se encontraban con una alta incidencia de maleza. Esta condición puede favorecer la severidad de la pudrición del cogollo debido a que la circulación del viento se ve disminuida, favoreciendo con ello la formación de humedad sobre las hojas del cogollo y por ende el desarrollo de la bacteria. Asimismo la distribución de enfermedades por municipio es distinta, por citar en Jesús María se encontró que de las plantas enfermas el 53% correspondió a Erwinia, el 34% a Fusarium y el 23% a una combinación de Fusarium y Erwinia. Con todas las áreas muestreadas se realizará lo mismo para establecer el porcentaje por enfermedad, considerando las anteriores solamente debido a su importancia, con todo ello se establecerá al final del estudio las regiones de mayor incidencia.

Identificación y frecuencia de maleza En los Cuadros 7 y 8 aparecen las principales especies de maleza tanto de hoja ancha como hoja angosta. Se encontraron un total de 25 diferentes especies de maleza de hoja angosta y 58 de hoja ancha. Las especies de hoja angosta (gramíneas) presentaron un dominio en la densidad sobre las especies de hoja ancha, es decir se presentaron con densidades de población superiores y de esta forma mantienen un dominio espacial en los predios de agave. Entre las especies de hoja angosta (gramíneas) (Cuadro 7), destacan por su presencia y densidad Eragrostis mexicana, Rynchelitium repens, Cynodon dactylon, Digitaria ciliaris, Chloris gayana y Eleusine indica ya que estas especies presentan el mayor grado de distribución e infestación. El resto de las especies de hoja angosta, tienden a presentar un patrón de distribución de mayor agregación a nivel de localidad y menor grado de infestación ya que incluso en algunos casos únicamente se reporta su presencia debido a que presentaron una baja densidad por unidad de área. La especie Rhynchelitium repens tiende a presentar una fuerte infestación en aquellas plantaciones con pobre manejo del suelo.

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TEQUILA La comunidad vegetal de especies de hoja ancha (dicotiledóneas) presenta una mayor diversidad de especies (58 diferentes especies) en comparación a las especies de hoja angosta (Cuadro 8). Entre estas destacan por su distribución y grado de infestación, Amaranthus hibridus, Spermacoce verticilata, Phytolacca icosandra, Melampodium perfoliatum, Crotalaria pumila, además de las especies no identificadas de los generos; Sida, Ipomoea, Bidens y Anoda, los géneros Secchiopsis, Sicyos, Cyclanthera, Microsechium que corresponden a las especies conocidas como chayotillos y los géneros Solanum, Physalis y Euporbia spp, Todas ellas presentan una mayor distribución y mayor grado de infestación en las áreas cultivadas con agave. El resto de las especies reportadas son especies que al igual que muchas especies gramíneas su grado de infestación y distribución es baja y solo se reporta su presencia. Cabe resaltar que las especies de los géneros Ipomoea y las que corresponden a especies conocidas como chayotillosQ; Secchiopsis, Sicyos, Cyclanthera y Microsechium, por lo general, son especies que se desarrollan entre plantas de agave, se presume que estas especies no son favorecidas por las practicas de manejo de suelo (disturbio del suelo). Su desarrollo se favore-

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ce bajo el dosel de la planta de agave y en consecuencia su control puede presentar mayor grado de dificultad y por ello un probable efecto competitivo más directo. La especie Phytolacca icosandra (perenne), su presencia en la mayoría de las plantaciones se encuentra fuera del cultivo o en las orillas y presenta mayor infestación en aquellos huertos con bajo nivel de manejo agronómico y descuidados. Durante el proceso de colecta de especies de maleza, fueron analizadas con la finalidad de detectar síntomas de la enfermedad conocida como “marchitez del agave”, sin embargo, no se detectaron visualmente los síntomas característicos de esta enfermedad en ninguna de las especies encontradas tanto en las de hoja ancha (dicotiledóneas) como en gramíneas.

Efecto de la temperatura y pH sobre el crecimiento micelial de F. oxysporum En el cuadro 9. se observa que a 10° C el desarrollo del micelio es más lento, requiriendo de 13 días para alcanzar el diámetro total de la caja de petri, así mismo el rango de pH en el que ocurrió el mayor desarrollo fue de 5.0 a 8.0. Por otra parte el crecimiento a 20° C fue mayor a 5.5, y de 6.5 a 7.5 de pH. Por otro lado, en este ensayo, el ANVA no

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TEQUILA mostró significancia para la interacción entre pH y temperatura. Así mismo la presencia de Fusarium sp, parece estar ligada a factores relacionados con características del suelo, tales como pH, entre otros, dado que hemos encontrado que el desarrollo del micelio en condiciones in vitro, se favorece en pH ligeramente ácido que va de 5.0 a 7.0 a 10oC y 20 oC . Lo anterior se ha demostrado en F. solani f sp. phaseoli, en donde se ha determinado que existe reducción en la germinación de las clamidosporas en temperaturas altas (de 25 a 30oC), y pH de 8.0 (hyakumachi, 1989).

Efecto de las condiciones climatológicas en la distribución de las enfermedades La evaluación de las condiciones climatológicas (tomando en cuenta solo el año 1998) se llevó solo a cabo relacionando la presencia de las principales enfermedades. Con respecto a la temperatura del suelo, se observa que en la región de Tequila es más alta durante todo el año en un promedio de 2 a 3 oC con respecto a Acatic y de 4 a 5 oC con relación a Tepatitlán, así mismo la temperatura más alta es en el mes de mayo en la zona de Tequila donde se registró 30.77 o C aquí, también se observa que la temperatura del suelo fue incrementando

hasta el mes de mayo, y en junio comienza a disminuir. Se ha demostrado que la germinación de las clamidosporas (estructuras de sobrevivencia o resistencia del patógeno) de la mayoría de las especies de Fusarium germinan a temperaturas promedio de 15 a 25 oC tal como se demostró en F. oxysporum f sp. phaseoli en donde la germinación ocurrió mayormente en temperaturas menores en promedio de 25 a 30 oC (Hyakumachi, 1989), mientras que en F. oxysporum f sp dianthi los síntomas de marchitez fueron más severos a temperaturas de 23 a 26oC (Ben-Yephet y Shteinberg, 1997), si estas condiciones favorecieran a F. oxysporum en el caso de agave, es probable que la germinación de las clamidosporas se diera de en los meses de enero, febrero, marzo y quizá abril para el caso de la zona Tequila, mientras que adicionalmente en el mes de mayo pudiera ocurrir germinación de clamidosporas para la zona de Tepatitlán, esto es de suma importancia para el manejo de este hongo, ya que nos indicaría que las medidas preventivas de control deben realizarse previo a la germinación de las clamidosporas para reducir la probabilidad de la infección de agave, especialmente en plantaciones establecidas. Por otro lado, el crecimiento del micelio in vitro es mayor a temperaturas de 20 a 25 oC y se ve favorecido a

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TEQUILA rangos de pH de 5.5 a 7.0 (fig. 8), mientras que a 30 oC, parece no ser tan favorable. Tanto la temperatura del suelo así como la temperatura ambiente no llegan a superar los treinta oC lo cual puede favorecer el desarrollo del patógeno. La humedad es otro factor que influye en la severidad de Fusarium y se reporta que las condiciones de baja humedad favorecen a este patógeno, especialmente cuando el suelo tiene una humedad de menos del 25%, de acuerdo con la precipitación de tres diferentes zonas (Tequila, Acatic y Tepatitlán), esta ocurre de junio a septiembre siendo mayor en julio y agosto, indicando que la severidad de Fusarium puede verse afectada en el periodo de lluvias, el cual comprende de mayo a octubre. La conjunción del crecimiento del micelio, la temperatura del suelo, temperatura ambiente y la precipitación nos hacen suponer que el período critico para que ocurra la infección en agave va del mes de enero a abril, siendo mayor el período de marzo y abril. Es en estos meses entonces, que se deben realizar algunas prácticas factibles para evitar la germinación y desarrollo del hongo. Esto puede hacerse al final del ciclo de lluvias en el mes de octubre a diciembre, para evitar el incremento de propagulos en la época seca y por ende reducir la posibilidad de infección.

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De acuerdo a los datos climatológicos registrados en 1998, mostraron una relación en la distribución de enfermedades, indicando en el caso de Fusarium se encontró en un 15% en la zona de los Altos, mientras que en la zona de Tequila se encontró con cerca de un 20% de incidencia, lo cual indica la importancia que tiene la temperatura y la humedad en la distribución de este patógeno. Esto puede también indicar que aquellas áreas con temperatura del suelo entre 15 y 25 oC y baja humedad del suelo, puede ser muy favorable para el hongo. Por otro lado, a diferencia de las condiciones favorables para el hongo, en el caso de la pudrición del cogollo, causado por E. carotovora esta enfermedad se ve favorecida por condiciones de alta humedad, que en el caso de las tres áreas de estudio, no existe diferencia entre la precipitación, lo cual indica que esta igualmente distribuida (cerca de 51% en los Altos y cerca del 50% en la zona de Tequila) y la época en la que ocurre probablemente la mayor infección es la época de lluvias, puesto que el nivel de oxígeno disminuye por el desplazamiento de la humedad, condiciones favorables para el desarrollo de la bacteria (Burton y Wigginton, 1970), estas condiciones ocurren en los meses de junio y julio.

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TEQUILA Ensayo de control químico de la pudrición del cogollo en condiciones de campo Los resultados mostrados corresponden a la última evaluación para el control de pudrición bacteriana del cogollo, obtenidos en el municipio de Zacoalco de Torres. Como se observa en el cuadro 10 la diferencia para tratamientos resultó altamente significativa, no así para las repeticiones. El coeficiente de variación en este ensayo fue aceptable. Este cuadro también muestra claramente que los tratamientos de sulfato de cobre pentahidratado sistémico se mantuvieron con un menor grado de enfermedad y que las dosis baja, intermedia y alta resultaron estadísticamente iguales, mientras que el sulfato de cobre no sistémico resultó tan dañado como el testigo sin aplicación. Cabe señalar

que el ensayo se inicio con un grado de daño dos de acuerdo a la escala utilizada y 2 meses después en los tratamientos 1, 2 y 3 (cuadro 4) se mantiene estadísticamente el mismo nivel de daño no así en los tratamientos 4 y 5 (anexo 1). Por otra parte, los resultados del calculo de eficacia, muestran que el sulfato de cobre pentahidratado sistémico fue de 9 a 11 veces más eficaz que el sulfato de cobre no sistémico, esto dado que se toma el grado de daño al inicio del ensayo y al termino de dos meses el numero de plantas que pasaron al siguiente grado de daño de la enfermedad (anexo 2). Por otra parte se trabaja con el análisis de los datos climatológicos, de las estaciones establecidas por la empresa Cuervo, para establecer si existe una probable correlación con la presencia de algunas enfermedades.

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CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA CONCLUSIONES

Se determinó la presencia de 11 fitopatógenos asociados al cultivo de agave. La pudrición del cogollo es causada por la bacteria Erwinia carotovora y la marchitez fue atribuida a Fusarium oxysporum, además están ampliamente distribuidos y y fueron considerados como las enfermedades más importantes del cultivo. Se reportan 2 nuevas enfermedades foliares plenamente identificadas como Botryodiplodia sp y Didymosphaeria sp, la primera se encontró en el municipio de Magdalena y Acatlán de Juárez y la segunda en la zona de los Altos. Se encontró que una cepa de Bacillus sp. es altamente inhibitoria in vitro sobre el desarrollo de Fusarium oxysporum. La comunidad de especies de maleza gramíneas asociadas al cultivo de agave mantienen un dominio en su densidad sobre las especies de hoja ancha (dicotiledoneas), no obstante que estas últimas presentan una mayor diversidad florística, predominando en su mayoría las especies anuales en ambos tipos de especies.

La comunidad de especies de maleza asociadas al agave esta compuesta por dos gruposQ; a) aquellas especies que se desarrollan en el área abierta (entre hileras de plantas) y que representan la mayoría y b) aquellas especies que se desarrollan bajo el dosel de la planta de agave y que se benefician de la asociación directa mediante una asociación de tipo mutualista negativa entre las cuales predominan los géneros (Secchiopsis, Sicyos, Cyclanthera, Microsechium) del grupo de especies conocidas comúnmente como chayotillos y los pertenecientes al genero Ipomoea. La frecuencia y densidad del tipo de especies de maleza encontradas en asociación al agave sugiere que la comunidad y composición de la misma está fuertemente relacionada a las practicas de manejo del cultivo, como lo pudiera ser el tipo y frecuencia de uso de herbicidas, practicas de manejo del suelo (cultivos, fertilización, etc.) y la variación ambiental en las diferentes zonas productoras. En campo ninguna especie de maleza aquí reportada mostró síntomas de

113

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA la enfermedad conocida como “marchitez”. El pH favorable para el desarrollo de Fusarium a 10oC está en un rango de 5.0 a 6.5.

114

Sulfato de cobre pentahidratado sistémico en sus tres dosis mantuvo la planta con menor daño por la bacteria Erwinia sp.

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA LITERATURA

CITADA

BEN-YEPHET Y. y D SHTEINBERG. 1997. Effects of the host, pathogen, the enviroment and their interactions, on Fusarium wilt in carnation. Phytoparasitica 25: 207-216. B URTON , W., W IGGINTON , M.J. 1970. The effect of a film of water upon the oxygen status of a potato tuber. Potato Res. 13: 180-186. BOITEAU, G., J.R. BRADLEY, J.W., VAN DUYN, y R.E. STEINNER. 1979. Bean leaf beetle 1Q: Micro-spatial patterns ad sequential sampling of field populations 2. Entomol. 8Q:1139-1144. COSENS, R. 1985. A Simple Model Relating Yield Loss To Weed Density. Ann. Appl. Biol. 107: 239-253. D O N A L , W.W. 1994. Geostatistics for Mapping Weeds, With a Canada Thistle (Circium arvense) Patch as a Case Study. Weed Science 42: 648-657. GIL, V. K. 1997. Caracterización genética del Agave sp utilizando marcadores moleculares. Tesis de Maestria en Ciencias. CINVESTAV. GRANADOS, S.D. 1993. Los agaves de México, Universidad Autónoma de Chapingo. H YAKUMACHI , M. 1998. Carbon loss and Germinibilyty, Viability, and Virulence of Chlamidospores of Fusarium

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115

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA MAHER, E.A. and KELMAN, A. 1983. Oxygen status of potato tuber tissue in relation to maceration by pectic enzimes of Erwinia carotovora. Phytopathology 73: 536-539. MARTÍNEZ R. J.L. 1994. Informe sobre el diagnóstico de la marchitez en agave. Tequila Cuervo. Inédito. MARTÍNEZ, R., J. L., VÁZQUEZ, G. M., PIMIENTA, B. E., BERNAL, M. F., FLORES, M. F., IBARRA, D. R., TORRES, M. P., CUEVAS, C. H., MARTÍN DEL CAMPO, M. N., RODRÍGUEZ, R. R. y VIRGEN, C. G. 1998. Proyecto: Epidemiología y manejo integrado de problemas fitosanitarios en Agave tequilana Weber var. azul. Rev. Mex. Fitopatol. Vol 16 (1): 116. MORTENSEN, D.A. y H.D. COBLE. 1991. Two Approaches to Weed Control Decisionaid Software. Weed technology 5: 445452. PATTERSON, D.T. 1995. Effects of Environmental Stress on Weed/Crop Interactions. Weed Science. 43: 483-490. PÉREZ, S.P. 1980. Problemas fitosanitarios del maguey pulquero en la mesa central de México. Revista Chapingo No. 23-24. Chapingo, México.

116

PIMIENTA, B. E. 1984. Estimación del tamaño de muestra para levantamientos ecológicos de maleza en huertos de mango. Memorias del VI Congreso Nacional de la Ciencia de la maleza. Tapachula, Chis. VALENZUELA, A.G. 1994. El agave tequilero: su cultivo e industrialización. Editorial Agata. 119p VELEZ, G.C., AP ALVÁREZ DE LA C. y B. RODRÍGUEZ. G. 1996. Aislamiento de Erwinia del grupo carotovora como patógeno del Agave tequilana. Resumen XXIII Cong. Nal,. Fitopatología, Guadalajara, Jal. México. V ILLAVAZO , R.A.S. 1986. El cultivo del Mezcal ( Agave tequilana L. Weber) en la región de Tequila, Jalisco. Departamento de Fitotecnia. Universidad Autónoma de Chapingo, México. VIRGEN-CALLEROS G, SALAZAR G.M, AGUILERA G, L OLALDE P. V and HERNÁNDEZ D. R. 1996. In vitro inhibition of Verticillium sp and Fusarium sp. with isolates of Bacillus circulans. p 101-104. In: Wenhua T., Cook, J. and Rovira A. (Eds). Advances in biological control of plant diseases. Agricultural University of China Press.

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA Cuadro 1. Escala para evaluar el daño de marchitez del agave por E. carotovora Indice

Descripción

1

Planta Sana.

2

De 1 a 5 lesiones acuosas con una longitud de 1 a 30 cm. Iniciando en las espinas apicales o laterales.

3

Una o más lesiones acuosas de más de 30 cm. O bien, más de 6 lesiones de 5 a 30 cm.

4

Lesiones necróticas en el cogollo que avanzan hasta casí llegar a la piña.

5

Cogollo completamente dañado, llegando hasta la piña, planta evidentemente muerta. Cuadro 2. Escala para evaluar el daño de marchitez del agave por Fusarium sp.

Indice

Descripción

1

Planta Sana

2

De 1 a 5 hojas externas con encarrujamiento ligero

3

De 6 a 10 hojas externas con encarrujamiento

4

Planta con más de hojas10 con encarrujamiento acentuado.

5

Planta muerta fácil de desprender del suelo. Cuadro 3. Crecimiento radial del micelio de F. oxysporum a diferentes niveles de temperatura y pH. Temperatura oC

Valores pH

10

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

7.0

7.5

8.0

8.5

20

3.0

3.5

4.0

4.5

5.0

5.5

6.0

6.5

7.0

7.5

8.0

8.5

117

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA Cuadro 4. Tratamientos para el control de marchitez bacteriana del agave causado por Erwinia sp. Zacoalco de Torres, Jal. 1999. Tratamiento

Producto

Dosis de Producto

No. De Aplicaciones

Intervalo de Aplicaciones

G i.a/ha 1

Cu2SO4.5H20

1400

3

Cada 7-días

1750

3

“

2100

3

“

1750

3

“

-

-

-

sistémico 2

Cu2SO4.5H20 sistémico

3

Cu2SO4.5H20 sistémico

4

Cu2SO4.5H20

5

Testigo

118

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA Cuadro 5. Fitopatógenos asociados al cultivo de Agave tequilana Weber var. azul Fitopatógeno

Parte afectada

Nombre común

Nombre científico

Anillo rojo

Erwinia sp

Hojas

Pudrición del cogollo

Erwinia sp

Hojas y piña

Marchitez

Fusarium oxysporum

Raíces y piña

Pudrición de raíz

Phytophthora sp

Raíces

Mancha Anular

Didymosphaeria sp

(Asterina mexicana)

Hojas

Mancha foliar

Botryodiplodia sp

Hojas

Viruela

Pleospora sp

Hojas

Virus

Virus no identificado

Hojas

Nemátodos

Pratylenchus sp

Raíces

Nemátodos

Dorylaimus sp

Raíces

Nemátodos

Helicotylenchus sp

Raíces

119

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA Cuadro 6. Severidad de la pudrición del cogollo en Agave tequilana var azul en predios de la zona de los Altos. Predio

Severidad (escala de 1 a 5) 1

2

3

4

5

El Viborero

2

86

10

1

1

Zacamecate

78

20

1

0

1

Rancho Santa María

92

7

1

0

0

El Chivo

96

4

0

0

0

San Ramón

25

46

3

0

26

Bajío seco Centinela

0

85

12

1

2

La Ceja de la Capilla

0

96

3

1

0

Ingreso al Zamorano

58

28

5

1

8

351

372

35

4

38

TOTAL

120

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA Cuadro 7. Especies de maleza de hoja angosta (gramíneas) presentes en zonas productoras de agave (Agave tequilana weber en el estado de Jalisco. Frecuencia

Densidad

No. sitios Especie

presente

absoluta relativa

Absoluta Relativa

2

(%)

(m )

Eragrostis mexicana

19

56

14

11.3

6

Rynchelitium repens

19

56

14

29.0

16

Cynodon dactylon

17

50

12

N.C

-

Digitaria ciliaris

15

44

11

12.3

7

Chloris gayana

15

44

11

35.4

19

Eleusine indica

13

38

9

11.2

6

Cenchrus echinatus

8

24

6

2.2

1

Setaria glauca

7

21

5

4.5

2

Echinochloa colona

7

21

5

1.5

1

Eragrostis pectinacea

4

12

3

2.0

1

Leotochloa filiformis

4

12

3

N.C

-

Brachiaria plantaginea

4

12

3

1

1

Chloris submutica

3

9

2

3.3

2

Chloris radiata

3

9

2

2.0

1

Eragrostis glomerata

1

3

1

71.0

38

Hackelochloa granularis

P

Heteropogon melanocarpus

P

Sorghym halepense

P

Paspalum plicatulum

P

Panicum ciliaris

P

Hilaris cenchroides

P

Digitaria distans

P

Ixophorus unisetus

P

Digitaria filiformis

P

Andropogon hirtifolious

P

P = Solo se reporta su presencia N.C. = No contabilizada en los muestreos

121

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA Cuadro 8. Especies de maleza de hoja ancha (dicotiledóneas) presentes en zonas productoras de agave (Agave tequilana weber en el estado de Jalisco. Frecuencia

Densidad

No. sitios Especie

presente

absoluta relativa

Absoluta Relativa

2

(%)

(m )

Amaranthus hybridus

15

44

10.3

10.0

12

Spermacoce verticilata

11

32

7.5

9.0

10

Phytolacca icosandra

11

32

7.5

N.C.

Crotalaria pumila

7

21

4.8

3.5

4

Melampodium perfoliatum

7

21

4.8

16.0

18

Tithonia tubaeformis

7

21

4.8

N,C.

-

Sida angustifolia

6

18

4.1

9.5

11

Sida rhombifolia

1

3

0.7

3.0

3

Sida spinosa

1

3

0.7

N.C.

-

Bidens pilosa

5

15

3.4

2.0

2

Bidens ostruthioides

1

3

0.7

3.0

3

Bidens lemmonii

P

N.C.

Ipomoea purpurea

-

-

10

29

6.8

2.2

3

Ipomoea longepedunculata

3

9

2.1

1.5

2

Ipomoea coccinea

4

12

2.7

2.3

3

Ipomoea hederofilia

1

3

0.7

N.C.

-

Ipomoea decasperma

1

3

0.7

1.0

1

Anoda cristata

8

24

5.5

1.7

2

Anoda hostata

3

9

2.1

1.0

1

Anoda acerifolia

4

12

2.7

3.0

3

Secchiopsis triquetra

3

9

2.1

N.C.

-

Sicyous angulata

4

12

2.7

1.5

2

Sicyous laciniata

2

6

1.4

N.C.

-

Cyclanthera sp.

3

9

2.1

N.C.

-

Microsechium sp.

1

3

0.7

N.C.

-

Solanum rostratum

3

9

2.1

5.0

6

Solanum americanum

1

3

0.7

N.C.

-

Physalis aequata

3

9

2.1

N.C.

-

Physalis sp.

1

3

0.7

N,C.

-

Commelina diffusa

3

9

2.1

1.3

2

122

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA continuación cuadro 8 Frecuencia

Densidad

No. sitios Especie

presente

absoluta relativa

Absoluta Relativa

2

(%)

(m )

Commelina coelestris

2

6

1.4

N.C.

-

Euphorbia adenoptera

8

24

5.5

3.0

3

Euporbia spp.

3

9

2.1

6.0

7

Euphorbia prostrata

1

3

0.7

1.0

1

Mimosa sp.

2

6

1.4

N.C.

Zornia diphylla

P

N.C.

Meleria quinqueflora

P

N.C.

Prosopis juliflora

P

N.C.

Paraphyllium sp.

P

N.C.

Verbesina pedunculosa

P

N.C.

Anelima sp.

P

N.C.

Sonchus oleraceous

P

N.C.

Pennisetum purpureum

P

N.C.

Oxalis painteri

P

N.C.

Oxalis decaphyla

P

N.C.

Verbena ciliata

P

N.C.

Xanthium canadensis

P

N.C.

Solidago velitinium

P

N.C.

Cosmos bipinatus

P

N.C.

Graphalium salicifolium

P

N.C.

Lepidium virginicum

P

N.C.

Salidago velatinum

P

N.C.

Tradescantia crassifolia

P

N.C.

Eupatorium sp.

P

N.C.

Portulaca oleraceae

P

N.C.

Galinsoga parviflora

P

N.C.

Brassica campestris

P

N.C.

Salvia sp.

P

N.C.

P = Solo se reporta su presencia N.C. = No contabilizada en los muestreos

123

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA Cuadro 9. Crecimiento radial del micelio de F. oxysporum a diferentes rangos de pH y temperatura. Temperatura PH

10° C*

Rango

20° C**

Rango

3.0

0.80e***

0.8 – 0.8

0.80 g

0.8 – 0.8

3.5

0.80 e

0.8 – 0.8

0.80 g

0.8 – 0.8

4.0

5.93 d

5.8 – 6.1

3.65 f

3.6 – 3.6

4.5

6.83 c

6.8 – 6.9

6.73 e

6.7 – 7.0

5.0

8.26 a

8.1 – 8.4

7.51 cd

7.4 – 7.6

5.5

7.81 ab

7.0 – 8.2

8.06 abc

7.9 – 8.1

6.0

8.26 a

7.9 – 8.9

7.67 bc

7.6 – 7.7

6.5

8.40 a

8.2 – 8.7

8.15 abc

8.1 – 8.2

7.0

8.36 a

8.1 – 8.9

8.2 ab

7.8 – 8.5

7.5

7.65 abc

7.5 – 7.8

7.78 abc

7.6 – 8.0

8.0

7.91 ab

7.4 – 8.4

7.00 de

6.6 – 7.6

8.5

7.11 bc

7.1 – 7.2

8.43 ab

8.3 – 8.5

*incubación por 13 días. **incubación por 9 días. *** Tukey (p = 0.05)/promedio de tres repeticiones

124

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA Cuadro 10. Resultados de control químico con diferentes dosis de Cu2SO4.5H20 sistémico y no sistémico. Tratamiento

N de plantas

Media

% de infección datos transformados

% de eficacia

1

20

2.45 b

49 b

52.63

2

20

2.50 b

50 b

47.36

3

20

2.40 b

48 b

57.89

4

20

2.90 a

58 a

5.26

5

20

2.95 a

59 a

0

Tukey 0.05 DMS= 0.3829 Tratamientos con la misma letra son estadísticamente iguales.

125

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA Anexo 1. Calificación de daño por marchitez bacteriana del agave, Zacoalco de Torres Jal. 30 de junio de 1999. U de G 2000. Tratamiento

Cal. Rep. 1

Cal. Rep. 2

Cal. Rep. 3

Cal. Rep. 4

1-1

2

2

2

2

1-2

3

3

2

2

1-3

2

3

3

2

1-4

3

3

2

2

1-5

3

3

2

3

2-1

3

3

3

3

2-2

3

3

2

3

2-3

3

2

3

3

2-4

2

2

2

2

2-5

2

2

2

2

3-1

2

2

3

3

3-2

2

2

3

3

3-3

3

2

3

2

3-4

2

2

3

2

3-5

2

3

2

2

4-1

2

3

3

3

4-2

3

3

3

3

4-3

3

3

3

3

4-4

3

2

3

3

4-5

3

3

3

3

5-1

3

3

3

3

5-2

3

3

3

3

5-3

3

3

3

3

5-4

2

3

3

3

5-5

3

3

3

3

ANALISIS DE VARIANZA Fuente de variación

GL

Tratamientos Repeticiones CV= 16.48262

126

SC

CM

F

P-F

4

5.54000000

1.38500000

7.31

0.0001**

3

0.08000000

0.02666667

0.14

0.9353 ns

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA Anexo 2. Eficacia Abbott para la calificación final (30 de junio de 1999). U de G 2000. Ca - Ta x 100 Ca Ca = infección en el testigo (individuos con daño que cambiaron de categoría). Ta = infección en el tratamiento (individuos con daño que cambiaron de categoría). Tratamiento

Ca - Ta x 100

% de eficacia

Ca 1

19- 9 x 100

52.63

19 2

19-10 x 100

47.36

19 3

19 - 8 x 100

57.89

19 4

19-18 x 100

5.26

19 5

19-19 x 100 19

0

127

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA

128

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA ENFERMEDADES DEL AGAVE TEQUILERO

Introducción El cultivo de agave (Agave tequilana Weber var. azul) ocupa una superficie de más de 50,000 has en el estado de Jalisco, distribuidas principalmente en 3 zonas: altos, sur y centro (Valenzuela, 1994), así mismo en los últimos años se ha incrementado la superficie plantada, especialmente en otros Estados del país tal como Nayarit, Guanajuato y Michoacán. Sin embargo en los últimos años, el cultivo de agave se ha visto afectado por una serie de problemas fitosanitarios, destacando entre estos, aquellos causados por fitopatógenos, mismas que tienen una fácil diseminación a estas áreas. Por otra parte es poca la información existente con respecto a esta problemática en agave (Valenzuela, 1994). En la actualidad se han generado algunas investigaciones en torno a ello, pero aún en forma esporádica, (Luna, 1998). Varios autores mencionan ciertos antecedentes del género Agave, en torno a las enfermedades entre ellos Lezama (1952), señala algunas de las plagas que afectan al cultivo de agave. Pérez (1980) y Villalvazo (1986), reportan que

dos de las enfermedades fungosas más importantes que atacan tanto al agave pulquero en la mesa central de México así como el Agave tequilana L. Weber, en la región de Tequila, Jalisco, son la mancha negra (Asterina mexicana) y la antracnosis (Colletotrichum agaves). Otras enfermedades en Agave tequilana lo son; el tizón de las pencas causado por Alternaria sp y Stangonospora gigantea, la pudrición roja de las pencas es causada por Chalariopsis sp, pudrición de raíz es causada por los hongos Armillaria mellosa y Fusarium sp. (Granados 1993). Algunos de los principales patógenos asociados a agave que se han identificado son: la bacteria del género Erwinia sp, así como los hongos; Fusarium sp. (Valenzuela, 1994). La pudrición del tallo en Agave tequilana Weber es causada por Fusarium oxysporum, (Luna, 1996). Entre los fitopatógenos más importantes de este cultivo sin duda alguna destacan aquellos asociados a la marchitez del agave, este síntoma se ha asociado a fitopatógenos tales como Erwinia sp y Fusarium sp, o bien por la acción de ambos fitopatógenos (Martínez, 1994 y Velez et al, 1996).

129

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA

130

CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA ENFERMEDADES

ASOCIADAS

AL CULTIVO DE AGAVE

Los principales fitopatógenos que se han identificado en diferentes partes de la planta incluyen: Marchitez o encarrujamiento del agave (Fusarium oxysporum), pudrición del cogollo (Erwinia sp), anillo rojo (Erwinia sp), mancha foliar (Botryodiplodia sp), mancha anular (Didymosphaeria sp), mancha foliar

negra (Rhizoctonia solani), adicionalmente otras enfermedades tales como nematodos de los géneros Helicotylenchus, tambien se han encontrado virus asociados al cultivo de agave (Cuadro 1). A continuación se describen algunas de las principales enfermedades en este cultivo.

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CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA Cuadro 1. Fitopatógenos asociados al cultivo de Agave tequilana Weber var. azul Fitopatógeno

Parte afectada

Nombre común

Nombre científico

Anillo rojo

Erwinia sp

Hojas

Marchitez bacteriana

Erwinia sp

Hojas y piña

Pudrición de raíz

Fusarium oxysporum

Raíces y piña

Pudrición de raíz

Phytophthora sp

Raíces

Mancha Anular

Didymosphaeria sp

(Asterina mexicana)

Hojas

Mancha foliar

Botryodiplodia sp

Hojas

Mancha negra foliar

Rhizoctonia solani

Hojas

Viruela

Pleospora sp

Hojas

Virus

Virus no identificado

Hojas

Nemátodos

Pratylenchus sp

Raíces

Nemátodos

Dorylaimus sp

Raíces

Nemátodos

Helicotylenchus sp

Raíces

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CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA MARCHITEZ

O ENCARRUJAMIENTO DEL AGAVE

Hasta hace algunos años esta enfermedad se observaba frecuentemente en plantas de más de 3 años de edad, en la actualidad es común encontrarlas al siguiente año de plantadas e incluso en el mismo ciclo de plantadas casi al final del periodo de lluvias, mostrando con ello que la presencia de dicho patógeno se ha favorecido con el uso de plantas provenientes de plantas enfermas. Síntomas: Los síntomas producidos por esta enfermedad incluyen una decoloración de las hojas que contrasta con el azul típico de las plantas sanas, también provoca que las hojas se marchiten enrollándose hacia el centro de las mismas (encarrujamiento o acigarramiento), a medida que la enfermedad avanza se intensifica el encarrujamiento de las hojas, el patógeno causa una destrucción de las raíces y provoca una lesión rojiza en la piña, tanto el daño a raíces como a la piña causa una apariencia polvosa del los tejidos, y esta avanza hacia la piña (muerte ascendente), provocando un desprendimiento fácil de la planta. El patógeno: El hongo responsable de esta enfermedad es Fusarium oxysporum. Este patógeno produce tres tipos de esporas asexuales; macroconidios,

microconidios y clamidosporas. El hongo forma una masa algodonosa de micelio que puede ser de color blanco al inicio de su crecimiento y posteriormente adquiere ciertas tonalidades violáceas. Las macroconidias generalmente tienen 5 septos, tienen la célula basal atenuada y la célula basal en forma de pie, las clamidosporas se pueden formar solas o en cadena y generalmente intercaladas son de forma esféricas y con pared celular gruesa esto le permite sobrevivir por un período largo en el suelo (más de 15 años) en ausencia de plantas hospederas, estas son las estructuras de sobrevivencia . Epifitiología: Algunos de los factores que favorecen el desarrollo de este patógeno en una gran número de cultivos son pH temperatura y nivel de humedad en el suelo, presencia de otros organismos que dañen las raíces (ej. Nemátodos, insectos, etc), la fertilización (especialmente la nitrogenada), entre otros. En condiciones de laboratorio el crecimiento del micelio del hongo se favorece en un pH ácido (promedio de 5.5) y aunque puede crecer en diversas temperaturas, se desarrolla mejor en cerca de 20 a 25oC.

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CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA 5 c r e c i m i e n t o r a d i a l (cm)

4.5 4 3.5 3 2.5 2 1.5 1 0.5 0 3

3.5

4

4.5

5

5.5

6

6.5

7

7.5

8

8.5

pH

Figura 4. Crecimiento radial del micelio in vitro de Fusarium oxysporum aislado de agave a diferentes temparaturas y pH, 72 horas después de la siembra: 10°C

15 oC

20 oC

Control.- Las estrategias de manejo incluyen el uso de desinfección de hijuelos con una solución de TCMTB, Benomil, o tiabendazole. Estos fungicidas deben aplicarse como tratamiento a los mismos por inmersión al menos por 2 a 3 minutos. Así mismo el uso de cepas antagonistas y promotoras de crecimiento como Bacillus subtilis son esencialmente útiles para retrasar el proceso infectivo, entre las practicas

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25oC

30o C

de manejo de suelo es recomendable no fertilizar con fuentes que acidifiquen el suelo (ej. Sulfato de amonio). Por otra parte el uso de fungicidas al suelo puede ser una practica útil si estos son aplicados al inicio del periodo de lluvias y repetidas las aplicaciones al menos en un promedio de 2 ocasiones en este periodo (agosto y octubre), esto puede prevenir las infecciones del año siguiente.

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TEQUILA PUDRICIÓN DEL COGOLLO (ERWINIA CAROTOVORA)

Esta enfermedad es sin duda alguna junto con la marchitez del agave, los factores fitopatológicos más importante en la producción del cultivo. Síntomas: Los síntomas típicos de la pudrición del cogollo son lesiones necróticas y acuosas en las hojas que en la mayoría de los casos inician en la espina apical o en las espinas laterales, estas lesiones avanzan hacia el centro de la hoja y en el centro del cogollo causan una pudrición descendente que llega hasta la piña y puede provocar la muerte de la planta. En campo, se ha encontrado que la presencia de Erwinia sp. (pudrición de cogollo) se asocia en la mayoría de las ocasiones con un inicio a nivel de la base de las espinas, ya sean laterales o apicales, predominando en estas últimas, sobre todo en las hojas centrales de la planta, de donde posteriormente avanza la enfermedad hacia la piña. El Patógeno: A la fecha se han aislado diferentes especies de bacterias asociadas a la pudrición del cogollo, entre ellas la más común es Erwinia carotovora misma que se ha diagnosticado en dicho síndrome (Velez, et al,

1996). E. carotovora pertenece a la.. familia de las enterobacteriáceas. La bacteria es un bacilo corto de 1 a 3 micras y tiene flagelos peritricos, son anaerobios facultativos y causan una gran número de pudriciones acuosas. Generalmente las colonias son pequeñas y hundidas en el medio de cultivo CVP (Cristal violeta pectato). Epifitiología. El avance de Erwinia depende de la humedad que se forme en las hojas internas del cogollo, esto aparentemente se debe a la película de humedad que se forma sobre las hojas, la cual desplaza los niveles de oxígeno favoreciendo el desarrollo de la bacteria. Lo anterior se ha demostrado para la maceración de tejido de tubérculos de papa provocado por E. carotovora, encontrándose que esta es menor en condiciones de oxígeno adecuado (Maher y Kelman 1983), considerándose que es más severa cuando existen condiciones bajas de oxígeno (Lund y Wyatt, 1972). Así mismo, se ha determinado que la severidad de esta enfermedad se incrementa en predios infestados de maleza. Ya que, la ventilación se ve disminuida, lo cual provoca un incremento de la humedad

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TEQUILA en las hojas del agave. La película de humedad en el tejido puede causar una reducción en el nivel oxígeno a cero en 2.5 hr a 21oC (Burton y Wigginton, 1970). Se conoce además que para la maceración del tejido por Erwinia que causan pudriciones blandas, intervienen enzimas pectolíticas entre estas se encuentran las pectato liasas, poligalacturonasas y pectin liasas (Kotoujansky, 1987), mismas que pueden verse involucradas en la maceración del tejido de agave.

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Control: Para el manejo de esta enfermedad se puede realizar una poda sanitaria dirigida, cortando 5 cm por debajo de la lesión seguida de una aplicación de algún bactericida, entre ellos Sulfato de cobre pentahidratado ó antibióticos del tipo gentamicina o estreptomicina, por otro lado el antibiótico experimental “ac. Oxolinico” mostró resultados prometedores sobre el control de esta enfermedad, las aplicaciones deberán realizarse cercano a la época de lluvias (junio y julio) y después de las mismas (noviembre).

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TEQUILA MANCHA

FOLIAR

(BOTRYODIPLODIA

SP)

Esta enfermedad es incipiente y sus daños y distribución no son muy frecuentes, aunque indudablemente el incremento de esta enfermedad puede propiciarse si no se maneja adecuadamente. Síntomas: Esta enfermedad inicia como una mancha amarillenta generalmente circular a ovoide, la cual posteriormente se torna necrótica manteniendo un halo amarillento alrededor de la lesión si las condiciones son favorables estas manchas se unen formando entonces una necrosis de la hoja, las cuales generalmente se presentan en las hojas más viejas, sin embargo se puede presentar en hojas jóvenes. El patógeno: El patógeno responsable de esta enfermedad es Botryodiplodia sp el hongo produce picnidios, mismos que se forman sobre las manchas necróticas, generalmente en el centro de la misma, estos picnidios se pueden apreciar a simple vista como una serie de puntitos de color de ne-

gro sobre dichas manchas, este patógeno presenta conidios bicelulares de color café claro a café oscuro en picnidios en estromáticos. Epifitiologia: Esta enfermedad básicamente se ha encontrado en los municipios de Magdalena y Acatlán de Juárez, coincidiendo con áreas un poco más cálidas, con respecto a la zona de Los Altos. Por otro lado este patógeno puede ser un serio problema ya que las manchas llegan a unirse necrosando gran parte del tejido (básicamente hojas). La mancha foliar se ve favorecida por temperaturas entre 20 a 25° C. Control: Respecto al control de esta enfermedad, puede sugerirse el uso de fungicidas de contacto como mancozeb ( manzate) durante el período de lluvias, ya que parece que la humedad esta ligada a la presencia de dicho patógeno, se deberá iniciar también con podas sanitarias, eliminando aquellas hojas que presenten los síntomas de la misma.

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CONSEJO REGULADOR DEL

TEQUILA

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TEQUILA MANCHA

ANULAR

(DIDYMOSPHARERIA

SP)

El impacto de esta enfermedad no esta bien determnada, sin embargo, la presencia de éste sobre el cultivo reduce el área fotosintética al dañar las hojas. Síntomas: Esta enfermedad se presenta como una serie de pequeños puntos círculos de color claro al inicio de los síntomas, los cuales a medida que maduran las estructuras se tornan de un color rojo-negrusco hasta que prácticamente pueden quedar estructuras duras de color negro, en estas áreas se reduce la capacidad fotosintética de la planta y puede llegar a retrasar el crecimiento normal de la planta. En la región de Los Altos se encuentra ampliamente distribuida la enfermedad en plantas de más de cuatro años de edad, y es comúnmente conocida como mancha anular, y la presencia de este patógeno se puede encontrar en cualquier época del año, principalmente en las hojas externas de la planta, así mismo, también se ha observado en hojas jóvenes de las plantas en la región de Acatlán de Juárez.

El patógeno: Este hongo presenta ascas bitunicadas con ascosporas bicelulares y peritecios en estromas, pertenecen al grupo de los ascomycetos. Epifitiología: Aunque no se han determinado las condiciones a las cuales se favorece su presencia, parece estar ligado a temperaturas no muy altas osciladas entre 20 – 22 ˚C promedio, motivo por lo que su distribución es más frecuente en la zona de los Altos, aún cuando ha sido observada en otras zonas. Control: El control de ésta enfermedad radica principalmente en eliminar las fuentes de inóculo, que básicamente consisten en plantas mostrencas y residuos de las hojas jimadas o bien agaves de otras especies afectadas. Puede tambien aplicarse algún fungicida de contacto entre los que destacan, Mancozeb y clorotalonil o bien fungicidas sistémicos del grupo de los triazoles, que muestran eficacia contra los ascomycetos.

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TEQUILA

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TEQUILA MANCHA FOLIAR NEGRA (RHIZOCTONIA SOLANI)

El hongo R. solani K. es quizá uno de los hongos más importantes en la agricultura debido al gran número de hospederos que éste ataca. Sin embargo esta enfermedad es poco común en las plantaciones de agave y su daño es apenas incipiente. Síntomas: Esta enfermedad se caracteriza por la presencia de una mancha foliar de color negro que avanza a lo largo de toda la hoja, generalmente a medida que avanza el patógeno es factible observar una especie de anulaciones sobre las hojas y en las áreas más dañadas pueden observarse unos pequeños puntos de color negrusco por ambos lados de las hojas, aunque son más frecuentes sobre el haz de la hoja. Esta enfermedad se presenta inicialmente en las hojas externas de planta y la base de las mismas y de ahí avanza hacia las hojas internas del cogollo y generalmente la mancha es más pequeña en las hojas internas. El patógeno: Las características típicas de este patógeno son: a) ramificación en ángulo recto cerca del septo distal de las células jóvenes en las hifas vegetativas, b) formación de un septo cerca del punto de origen de la ramifi-

cación, c) constricción de la ramificación de la hifa en el punto de origen, d) presencia de un septo doliporo, e) ausencia de conexiones en forma de grapa, f) ausencia de conidias, presenta células monilioides, g) tejido escleroidial no diferenciado en corteza y médula, y h) ausencia de rizomorfos (Ogoshi, 1987). El patógeno forma pequeños microesclerocios de células moniliodes las cuales corresponden al hongo Rhizoctonia solani. Variabilidad genética de R. solani K: Se ha demostrado que R. solani posee una amplia variabilidad genética, lo cual motivó a Schultz en 1937 (citado por Ogoshi, 1987) a desarrollar un esquema de agrupación basado en la fusión de las hifas de los aislamientos, reportando 5 grupos: I (hortensis), II (brassicae), III (typica), IV (cichorii endiviae) y V (fuchsiae). Más recientemente Parmeter et al (1969) desarrollaron un esquema de agrupación de R. solani en grupos de anastomosis, determinando la presencia de 4 grupos los cuales nombró; AG1, AG-2, AG-3, y AG-4, esto dio inicio al desarrollo del concepto de «grupos de anastomosis «, en los siguientes 15 años

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TEQUILA (Anderson, 1982). La anastomosis de las hifas es una manifestación de incompatibilidad somática o vegetativa entre los aislamientos (Anderson, 1982) y la reacción de anastomosis puede ir desde la fusión de las paredes y membranas hasta no llevarse a cabo dicha fusión (Carling y Sumner, 1992). En el caso de agave parece que el grupo de anastomosis asociado es el AG-1. Epifitiología: Este patógeno se ha observado con cierta frecuencia en las áreas del sur de Jalisco en plantas de distintas edades, y los microesclerocios se pueden localizar sobre las venas de las hojas. Las condiciones para esta enfermedad son más bien de condiciones con cierto nivel de humedad relativa,

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lo cual puede indicar la presencia del mismo en la época de lluvias. R. solani K se disemina con la lluvia, riego, agua inundada, herramientas y cualquier medio que lleve suelo contaminado (Agrios, 1988). La temperatura favorable para el hongo oscila entre 15 a 25oC en la mayoría de los grupos de anastomosis. Control: El control de la enfermedad radica en el saneamiento de las plantas enfermas, así como en la vigilancia de los niveles de inóculo, puede emplearse fungicidas altamente específicos para este hongo tal como; thifluzamide o flutolanil, los cuales se deberán aplicar cerca de la época de lluvias.

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TEQUILA LITERATURA

CITADA

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TEQUILA

Universidad de Guadalajara Centro Universitario de Ciencias Biológicas y Agropecuarias División de Ciencias Agronómicas

Departamento de Producción Agrícola Reporte final: Proyecto: “Epidemiología y manejo integrado de problemas fitosanitarios en Agave tequilana Weber var. azul”

Participantes: Gil Virgen Calleros Jose Luis Martínez Ramírez Ramón Rodríguez Ruvalcaba Fco. Javier Bernal Marcelino Vázquez García Enrique Pimienta Barrios

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