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• Maria Arias

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BACTERIOLOGIA II BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO QUINTO SEMESTRE

Integrantes: Karen Molina Atuesta, Belkys Vásquez Corone, Natalia Barreto Lesmes

BACILOS GRAM NEGATIVOS NO FERMENTADORES Principales características: - No fermentan la glucosa en el TSI, lo que se manifiesta por una reacción alcalina /alcalina en este medio (en las porciones profunda y tendida). - La mayoría son citocromo-oxidasa positiva. - Algunos no se desarrollan o presentan poco crecimiento en agar MacConkey.

FAMILIA PSEUDOMONADACEAE Pseudomonas y otros bacilos no fermentadores constituyen un complejo conjunto de patógenos oportunistas de plantas, animales y el ser humano. En concreto, más del 75% de las bacterias no fermentativas aisladas a partir de muestras clínicas corresponden a las especies Pseudomonas aeruginosa, Burkholderia cepacia, Stenotrophomonas maltophüia, Acinetobacter baumannii y Acinetobacter lwoffli y Moraxella catarrhalis.

-Pseudomonas sp Las especies pertenecientes al género Pseudomonas (también llamadas pseudomonas) son microorganismos ubicuos que se encuentran en la tierra, en la materia orgánica en descomposición, en la vegetación y en el agua. Las especies de Pseudomonas poseen muchos factores estructurales, enzimas y toxinas que aumentan su virulencia, a la vez que las hacen resistentes a los antibióticos que se usan con una frecuencia mayor. Son fundamentalmente oportunistas (es decir, restringidas a los pacientes con alteraciones de los mecanismos de defensa). Esta característica destaca la importancia de la capacidad del anfitrión para prevenir la colonización y evitar una posterior invasión por las pseudomonas. Se han hecho estudios genéticos y se han agrupado en 5 grupos de RNA:

Fisiología y estructura Estos microorganismos no son fermentadores y utilizan los hidratos de carbono a través del metabolismo respiratorio en el que el oxígeno actúa como aceptor terminal de electrones. Aunque se definen como aerobios estrictos, pueden crecer de forma anaerobia utilizando nitrato o arginina como aceptor terminal de electrones. La presencia de citocromo oxidasa (detectada por medio de una prueba rápida de 5 minutos) en las especies de Pseudomonas se utiliza para distinguirlas de las enterobacterias. Algunas Pseudomonas adquieren un aspecto mucoide como consecuencia de la abundancia de polisacáridos capsulares Patogenia e inmunidad

Epidemiología Pseudomonas tienen unos requerimientos nutricionales mínimos, pueden tolerar un amplio intervalo de temperaturas (4 °C-42 °C) y son resistentes a muchos antibióticos y desinfectantes. De hecho, la recuperación de Pseudomonas a partir del ambiente (p. ej., un lavamanos o el suelo de un hospital) tiene un escaso significado a no ser que existan indicios epidemiológicos de que el lugar contaminado sea un reservorio de la infección. Además, el aislamiento de Pseudomonas en un paciente hospitalizado constituye un motivo de preocupación, pero normalmente no justifica la intervención terapéutica, a no ser que existan indicios de enfermedad.

Enfermedades clínicas Pseudomonas aeruginosa -Infecciones pulmonares: comprenden desde irritación leve de los bronquios (traqueobronquitis) hasta necrosis del parénquima pulmonar (bronconeumonía necrosante) -Infecciones cutáneas primarias: infecciones oportunistas de heridas existentes (p. ej. quemaduras) a infecciones localizadas de los folículos pilosos (p. ej., asociadas a la inmersión en aguas contaminadas como jacuzzis) -Infecciones del aparato urinario: infecciones oportunistas en pacientes con sondas urinarias permanentes y exposición a antibióticos de amplio espectro (selecciona estas bacterias resistentes a antibióticos) Infecciones de oído: comprenden desde una irritación leve del oído extemo («oído de nadador») hasta la destrucción invasiva de los huesos craneanos adyacentes del oído infectado -Infecciones oculares: infecciones oportunistas de córneas expuestas que presentan alguna lesión leve Bacteriemia: diseminación de las bacterias desde el foco de infección primaria (p. ej., pulmonar) hasta otros órganos y tejidos; pueden caracterizarse por la presencia de lesiones cutáneas necróticas (ectima gangrenoso). Complejo Burkholdería cepacia -Infecciones pulmonares: las infecciones más preocupantes se dan en pacientes con enfermedad granulomatosa crónica o fibrosis quística en los que pueden evolucionar a destrucción significativa del tejido pulmonar Complejo de Burkholdería cepacia -Infecciones pulmonares: comprenden desde colonización hasta bronconeumonía primaria en pacientes con fibrosis quística o enfermedad granulomatosa crónica Infecciones oportunistas: infecciones del aparato urinario en pacientes cateterizados; bacterias en pacientes inmunodeprimidos con catéteres intravasculares contaminados Burkholdería pseudomallei -Infecciones pulmonares: comprenden desde colonización asintomática a formación de abscesos Stenotrophomonas maltophilia -Infecciones oportunistas: diversas infecciones (más a menudo, a nivel pulmonar y urinario) en pacientes inmunodeprimidos expuestos previamente a antibioterapia de espectro ampliado

Diagnóstico de laboratorio Cultivo Debido a que Pseudomonas tienen unos requerimientos nutricionales sencillos, pueden crecer fácilmente en los medios comunes de aislamiento, como el agar sangre y el agar MacConkey. Necesitan una incubación aerobia (a no ser que se disponga de nitrato), por lo que su

crecimiento en el caldo se restringe generalmente a la interfase caldo-aire, en la que la concentración oxigénica es máxima. Identificación La morfología de las colonias (p. ej., tamaño de la colonia, actividad hemolítica, pigmentación, olor, y los resultados de una selección de pruebas bioquímicas rápidas (p. ej., reacción positiva de la oxidasa) bastan para la identificación preliminar de las cepas. Por ejemplo, P. aeruginosa crece rápidamente y forma colonias planas con bordes que se van extendiendo, P-hemólisis, una pigmentación verde relacionada con la síntesis de piocianina azul y fluoresceína amarilla, y un olor dulce característico semejante al de las uvas. Aunque la identificación definitiva de P. aeruginosa es relativamente sencilla, se necesita una amplia batería de pruebas fisiológicas para identificar a otras especies del género Pseudomona. Tratamiento, prevención y control Con frecuencia es necesaria la combinación de antibióticos (p. ej., aminoglucósido y plactámico). La monoterapia es generalmente ineficaz y puede seleccionar cepas resistentes Los esfuerzos para controlar las infecciones que se adquieren en el hospital se deben concentrar en prevenir la contaminación de los equipos médicos estériles y las infecciones nosocomiales El uso innecesario de antibióticos de amplio espectro puede seleccionar microorganismos resistentes, como es el caso de P. aeruginosa. Mecanismo de resistencia de antibiótica de Pseudomonas aeruginosas

PRUEBAS BIOQUÍMICAS

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Las pruebas clásicas para su identificación son el OF, la movilidad y la oxidasa, en donde generalmente son todas oxidasas positivas, a excepción de la S. maltophilia, que son todas oxidasas negativas. → Generalmente son todas móviles a excepción de la P. stutzeri. → Las Pseudomonas son mayormente productoras de pioverdina, exceptuando la P. stutzeri. → Todas utilizan los azúcares menos los Alcaligenes y las C. acidovorans. → La gran mayoría son lactosa negativo, pero también podemos encontrar lactosa positivo. → La gran mayoría son lisina negativo, pero también podemos encontrar lisina positivo. → Tanto la urea como la transformación de nitratos a nitritos es variable. → La gran mayoría son DNasa negativo, siendo el único DNasa positivo la S. maltophilia, por lo que para su identificación se debe realizar la prueba de la DNasa sí o sí. → La gran mayoría son sensibles a la polimixina B, excepto las Burkholderias. Cultivo ➢ Crecen en todos los medios. ➢ Temperatura entre 10-42°C. ➢ Producen diferentes tipos de colonias. ➢ Producen pigmentos: - Piocianinas: azul, verde, rojo y café - Pioverdina: fluorescente. ➢ Tienen un olor dulce (fruta madura). Pigmentos ➢ Capacidad de sintetizar diferentes pigmentos hidrosolubles, es decir, que difunden

en el medio en el que se siembren. ➢ Compuestos fluorescentes pioverdina (P. putida y P fluorescens) ➢ Pioverdina (fluorescente) + Piocianina (pigmento azul) → Color verde brillante característico d P. aeruginosa ➢ También puede producir otros pigmentos a temperaturas menores a 37°C y por la presencia de hierro: - Piorrubina (rojo) - Piomelanina (marrón) ➢ Se ha demostrado que los pigmentos poseen actividad antibacteriana y efecto sobre la integridad del epitelio respiratorio. ➢ Depende de cómo mezcle la Pseudomona el pigmento va a ser el color que produzca. ➢ Cuando la colonia tiene más de un día genera una coloración metalizada. Otras Pseudomonas sp ➢ P. fluorescens y P. putida se encuentran en aguas y suelo. ➢ Pueden ser microbiota de faringe y son patógenos oportunistas.

Xanthomonas Es un género de proteobacterias, muchas de las cuales causan enfermedades de las plantas, son responsable de enfermedades en plantas ornamentales de alto valor económico. Al mismo tiempo, el género Xanthomonas constituye un grupo de bacterias extremadamente interesante desde un punto de vista microbiológico por presentar una alta especificidad por el huésped,

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de tal manera que cepas pertenecientes a una misma especie pueden infectar de forma exclusiva huéspedes diferentes. -Stenotrophomonas maltophilia Se incluyó después en el género Xanthomonas y a continuación se asignó al género Stenotrophomona. es conocida la importancia clínica de este patógeno oportunista. Es responsable de infecciones en pacientes debilitados con alteraciones de los mecanismos de defensa. También, y debido a que S. maltophilia es resistente a los antibióticos |3lactámicos y aminoglucósidos que se usan con una mayor frecuencia, los pacientes que reciben una antibioterapia prolongada tienen un riesgo especial de adquirir infecciones por este microorganismo. El espectro de infecciones nosocomiales por S. maltophilia incluye la bacteriemia, la neumonía, la meningitis, la infección de heridas, y las IAU. Hay indicios de que las epidemias hospitalarias relacionadas con este microorganismo contaminaban las soluciones desinfectantes, los equipos de terapia respiratoria y monitorización y las máquinas de hielo. El tratamiento antimicrobiano es complicado puesto que el microorganismo es resistente a los fármacos que se emplear, con una frecuencia mayor. La combinación trimetoprim sulfametoxazol es el agente más activo frente a esta especie; también es buena la actividad de cloranfenicol y de ceftazidima. Prueba Bioquímica

Burkholdería B. cepacia conforma un grupo de nueve especies, llamado complejo B. cepacia, por su similitud. Este complejo tiene la facultad de colonizar diversas superficies ambientales húmedas, se relaciona con gran frecuencia a infecciones nosocomiales como las infecciones de aparato respiratorio en pacientes con fibrosis quística o enfermedad granulomatosa crónica, infecciones genitourinarias y gastrointestinales en pacientes que poseen sondas, y septicemia en pacientes con catéteres intravasculares contaminados e infecciones oportunistas. Este complejo posee virulencia en infecciones pulmonares, en otras infecciones no es común que cause muerte. Son sensibles a trimetroprim/sulfametoxazol. El anterior complejo junto con B. pseudomallei son patógenos humanos muy importantes. Es un saprófito localizado en tierra, agua y vegetación, es causante de infecciones

oportunistas, la infección causada por estos microorganismos (melioidosis) puede ocurrir en individuos sano como una inf. supurativa aguda o como inf. pulmonar crónica. En algunos pacientes se produce enfermedad cutánea supurativa localizada junto con linfadenitis regional, fiebre y malestar general esta enfermedad puede avanzar hasta septicemia devastadora. Otra forma de infección es la enfermedad pulmonar. Este microorganismo es utilizado como arma biológica, por lo que limita a laboratorios autorizados. Es muy infeccioso B. gladioli y B. mallei rara vez se relacionan con patologías humanas. Pruebas Bioquímicas

FAMILIA ALCALIGENACEAE La clasificación de especies del género Achromobacter y Alcaligenes es cambiante y confusa. Comprenden especies de bacilos gramnegativos oxidasa positivos. Tienen flagelos peritricos y son móviles, lo que los distingue de las pseudomonas. Alcalinizan el medio de citrato y el medio de oxidación y fermentación que contiene glucosa y son ureasa negativos. Pueden ser parte de la flora bacteriana humana normal y se han aislado en respiradores, nebulizadores y sistemas de diálisis renal. A veces se aíslan de orina, sangre, líquido cefalorraquídeo, heridas y abscesos. Géneros: A. faecalis -Bacteria Gram negativa. -Motilidad flagelar -No es nitrato-reductora -Es oxidasa-positiva -Catalasa-positiva -Citrato-positiva -Aerobio estricto -El crecimiento óptimo de esta bacteria se sitúa sobre los 37 °C. -Microorganismo Patógeno, aunque también se le puede encontrar como parásito oportunista. Factores de predisposición

Elementos húmedos (nebulizadores, respiradores y líquidos para lavado) Patologías -Otitis aguda -Infección de las vías urinarias Bacteriemia Pruebas de identificación -Pruebas bioquímicas (OF), prueba de observación de necesidad de O2, citocromo oxidasa, reducción de nitrato y sulfato. Alcaligenes xylosoxidans -Bacilo gramnegativo. -Aeróbico. -Reservorio (animales y puede estar presente en la flora humana normal, especialmente en la piel y el tracto gastrointestinal). -Se distingue fácilmente por la acidificación de Glucosa y Xilosa (OF) Factores de predisposición -Inmunosupresiones (pulmonar). -Objetos extraños (catéter venoso central) Patologías de relevancia -Inmunosupresiones (pulmonar). -Objetos extraños (catéter venoso central) Técnicas de identificación -Pruebas bioquímicas (OF) -Microscopia. Pruebas bioquímicas

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FAMILIA MORAXELLACEAE Bacilos cortos, Gram negativos inmóviles, aerobios, catalasa positiva, oxidasa positivos y sensibles a la penicilina. Géneros de mayor importancia clínica:

Acinetobacter Son cocobacilos anchos gram negativos oxidasa-negativos que se desarrollan como aerobios estrictos. Crecen como saprofitos ubicuos en la naturaleza y en el entorno hospitalario. Sobreviven en las superficies húmedas, como los equipos de terapia respiratoria, y en las superficies secas como la piel del ser humano (esta última característica es rara en los bacilos gramnegativos). Estas bacterias forman también parte de la microfiora bucofaríngea normal de un pequeño número de individuos sanos, y pueden crecer hasta alcanzar un número elevado durante la hospitalización. Enfermedades Las acinetobacterias son patógenos oportunistas que pueden producir infecciones de los aparatos respiratorio y urinario, y de las heridas; también pueden causar septicemia. Infecciones pulmonares: patógeno oportunista en pacientes que reciben tratamiento respiratorio

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Factores de predisposición Los sujetos con riesgo de contraer una infección por estas bacterias son los que reciben antibióticos de amplio espectro, los que se encuentran en fase postoperatoria quirúrgica, o los sometidos a ventilación mecánica. El tratamiento de las infecciones por Acinetobacter es problemático, porque estos microorganismos, especialmente A. baumannii, son a menudo resistentes a los antibióticos. El tratamiento específico debe orientarse por las pruebas de sensibilidad in vitro, pero el tratamiento empírico frente a las infecciones graves sería un b-lactámico (p. ej., ceftacidima, imipenem) y un aminoglucósido

Moraxella El género Moraxella se ha reorganizado en función de los resultados del análisis de los ácidos nucleicos. Aunque la clasificación de las especies pertenecientes a este género continúa cambiando, M. catarrhalis constituye el patógeno más importante. M. catarrhalis es un diplococo gram negativo oxidasa-positivo aerobio estricto. Enfermedades Este microorganismo representa una causa frecuente de bronquitis y de bronconeumonía (en ancianos y en pacientes con enfermedades pulmonares crónicas), sinusitis y otitis. Estas dos últimas infecciones ocurren fundamentalmente en personas previamente sanas. La mayoría de las cepas producen |3-lactamasas, y son resistentes a penicilina; sin embargo, presentan una sensibilidad uniforme a la mayor parte de los restantes grupos de antibióticos, como las cefalosporinas, eritromicina, tetraciclina, trimetoprim/sulfametoxazol, y la combinación de las penicilinas con un inhibidor de la Mactamasa (p. ej., ácido clavulánico). Hay otras dos especies de Moraxella que colonizan al ser humano y que suelen reactivarse con cierta frecuencia: Moraxella osloensis y Moraxella nonliquefaciens. Ambas especies se encuentran en la superficie de la piel y en las membranas mucosas de la boca y del tracto genitourinario. Estas especies raras veces causan infecciones oportunistas

Factores de predisposición -Edad. -Presencia de equipos invasivos (tubo endotraqueal, sonda gástrica y catéteres), largo tiempo de permanencia en el ambiente hospitalario. -Terapias prolongadas con corticosteroides. -Ventilación mecánica y terapia antimicrobiana probablemente altera la microbiota habitual y trae como consecuencia la selección de microorganismos resistentes como A. baumanniI.

-El factor de riesgo individual más significativo es la administración previa de antimicrobianos, aproximadamente, el 80% de los pacientes lo han recibido previo al desarrollo de infecciones graves por Acinetobacter sp Prueba bioquímica