• Author / Uploaded
• César Omar Gálvez González

• Categories
• Staphylococcus Aureus
• Temperatura
• Leche
• Agua
• Logaritmo

Citation preview

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

PROTOCOLO ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

1

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

Participaron en la elaboración de este protocolo. César Omar Gálvez González Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura. Coordinador de proyectos analíticos 55 50805200 ext 2022 cgalvez@cofepris. gob.mx

Odilia Hernández Hernández Laboratorio Estatal Salud Pública Veracruz. Jefa del Departamentos de Análisis Sanitarios. 229 9811390 Ext: 117 [email protected]

María Esperanza Rodríguez Parra Laboratorio Estatal Salud Pública Tamaulipas Responsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos 834 312 6633 [email protected]

Anastasio Palacios Marmolejo Laboratorio Estatal de Salud Pública de Aguascalientes 449 9775511 [email protected]

Participaron en la revisión de este protocolo. Liliana Cano Ramírez Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura. Q. Analista 55 50805200 EXT. 2045 [email protected]

Mirella Paredes Salas Laboratorio Estatal de Salud Pública de Aguascalientes 449 9775511 [email protected]

Autorización Imelda Rocío Guzmán Cervantes Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura. Directora Ejecutiva de Control Analítico Teléfono: 01 55 50 80 52 00 ext. 2043 [email protected]

Josefina Gutiérrez Ramírez Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura. Directora Ejecutiva de Innovación. 01 55 50 80 52 00 ext. 2005 [email protected]

2

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

1. OBJETIVO. Que los miembros de la Red Nacional de Laboratorios realicen de modo armonizado la evaluación del desempeño del Apéndice B Normativo. Método de referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus, NOM-210-SSA1-2014 mediante la comprobación de los parámetros de desempeño: Repetibilidad, Reproducibilidad, Recuperación, Sesgo, Selectividad e Incertidumbre. 2. CAMPO DE APLICACIÓN. Este protocolo armonizado es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en el proceso de implementación y autorización inicial del Apéndice B Normativo. Método de referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus, NOM-210-SSA1-2014 para el análisis de los productos de interés. Puede considerarse un documento externo del sistema de gestión de calidad y por lo tanto no requiere ser modificado para hacerlo coincidir con los procedimientos internos. 3. MÉTODO DE ENSAYO. 3.1. Apéndice B Normativo. Método de referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus, NOM210-SSA1-2014, Productos y Servicios. Métodos de prueba microbiológicos. Determinación de microorganismos indicadores. Determinación de microorganismos patógenos. 3.2. En el proyecto de modificación de ésta norma se consideran los siguientes cambios:

3

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014 Dice B.6.4. Invertir las placas e incubar por 44h a 48h a 36ºC ± 1ºC, buscar colonias con morfología colonial típica: colonias negras, circulares, brillantes, convexas, lisas, de diámetro de 1mm a 2mm y muestran una zona opaca, húmedas y con un halo claro (debido a la actividad de la lecitinasa) alrededor de la colonia. NOTA: En algunas ocasiones cepas que han sido aisladas de productos congelados o deshidratados que han sido almacenados por periodos largos de tiempo, frecuentemente desarrollan colonias menos negras con apariencia rugosa y textura seca. Las colonias atípicas son similares en apariencia pero sin halo claro alrededor.

B.6.5 Seleccionar las placas que tengan entre 15 y 150 colonias típicas y atípicas de S. aureus; si no es posible, seleccionar las placas de las diluciones más altas no obstante tengan más de 150 colonias. Seleccionar por muestra 5 colonias típicas para su confirmación o 5 colonias atípicas, para la realización de la tinción de Gram, en el caso de observar bacilos positivos, la colonia se tomará como negativa para S. aureus, por lo contrario si se observan cocos se seguirá con su confirmación.

B.6.6 Cuando las placas tengan menos de 15 colonias típicas se debe agregar la nota de "valor estimado" al reporte de los resultados.

Debe decir B.6.4. Invertir las placas e incubar por 24h ± 2h a 36°C ± 1°C, marcar en la base de la placa la posición de las colonias típicas y atípicas, re-incubar por 24h ± 2h 36°C ± 1°C, marcar en la base de la placa la posición de las nuevas colonias típicas y atípicas 44h a 48h a 36ºC ± 1ºC, buscar colonias con morfología colonial típica: colonias negras, circulares, brillantes, convexas, lisas, de diámetro de 1mm a 2mm y muestran una zona opaca, húmedas y con un halo claro (debido a la actividad de la lecitinasa) alrededor de la colonia. NOTA: En algunas ocasiones cepas que han sido aisladas de productos congelados o deshidratados que han sido almacenados por periodos largos de tiempo, frecuentemente desarrollan colonias menos negras con apariencia rugosa y textura seca. Las colonias atípicas son similares en apariencia pero sin halo claro alrededor. B.6.4.1 Colonias Típicas: colonias negras o grises, circulares, brillantes, convexas, lisas, de diámetro de 1mm a 1.5mm a las 24h de incubación y 1.5 a 2.5 mm después de 48h de incubación, rodeadas por una zona clara que puede ser parcialmente opaca. Después de 24 h, en esa zona clara, se puede observar un halo opalescente en la periferia de las colonias. Colonias Atípicas: Son colonias de las mismas dimensiones de las colonias típicas, pueden ser negras brillantes con o sin un pequeño borde blanco, la zona clara es muy pequeña o no visible, y el halo opalescente no está o es apenas visible. También son colonias atípicas las colonias grises sin zona clara, del mismo tamaño que las colonias típicas. Hay bacterias de géneros distintos al Staphylococcus, que pueden dar la morfología colonial típica o atípica, por lo que la observación microscópica usando una tinción de Gram puede ayudar en la distinción del género. B.6.5 Seleccionar las placas que como máximo 300 colonias con 150 colonias típicas y/o atípicas y las dos diluciones siguientes. Si solo están presentes colonias típicas, seleccionar por placa por un número de colonias típicas “Ac” (generalmente 5), Si solo están presentes colonias atípicas seleccionar un número de colonias atípicas “Anc”, Si hay de ambos tipos de colonias seleccionar colonias tanto típicas “Ac” como atípicas “Acn”. entre 15 y 150 colonias típicas y atípicas de S. aureus; si no es posible, seleccionar las placas de las diluciones más altas no obstante tengan más de 150 colonias. Seleccionar por muestra 5 colonias típicas para su confirmación o 5 colonias atípicas, para la realización de la tinción de Gram, en el caso de observar bacilos positivos, la colonia se tomará como negativa para S. aureus, por lo contrario si se observan cocos se seguirá con su confirmación. B.6.6 Cuando las placas de la dilución más baja tengan menos de 15 colonias típicas y/o atípicas se debe agregar la nota de "valor estimado" al reporte de los resultados..

Justificación Se hace la modificación conforme a la versión vigente de la norma de referencia, antes se indicaba una sola lectura a las 44h, con la modificación se hacen dos lecturas, dado que no hay temperaturas adicionales ni el tiempo total excede al original, no se crean nuevos requisitos ni costos para la implementación del método. La adición del punto B.6.4.1 y la eliminación de la nota es un cambio que mejora la redacción, por lo que no se crean nuevos requisitos, pero se facilita la ejecución del método.

Se hace la modificación conforme a la versión vigente de la norma de referencia, nota es un cambio que mejora la redacción, por lo que no se crean nuevos requisitos, pero se facilita la ejecución del método.

La aclaración de la dilución, evita ambigüedades o confusiones en la aplicación del método. Al ser una precisión, no se generan costos adicionales.

4

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014 Dice B.6.8.1 Prueba de coagulasa. Seleccionar y sembrar cada colonia típica en tubos con 0.5mL de BHI y en tubos con AST. Utilizar simultáneamente un control positivo de S. aureus y un control negativo de S. epidermidis. Incubar a 35°C ± 1ºC en baño de agua, durante 20h a 24h. Mantener los cultivos en AST a no más de 27°C ± 1ºC para pruebas posteriores. Agregar a 0.1mL del cultivo anterior a 0.3mL de plasma de conejo con EDTA (a menos que el fabricante indique otras cantidades). Incubar a 37°C ± 1ºC en baño de agua y observar periódicamente a intervalos de 1h durante las primeras 4h a 6h; si no hay formación de coágulo, observar hasta las 24h. Considerar la prueba positiva cuando el coágulo se forma completamente y es firme al invertir el tubo. En otro caso se deberán realizar las pruebas auxiliares, descritas en el punto B.6.9. B.7.2 Si al menos el 80% de las colonias típicas seleccionadas fueron coagulasa positiva y/o termonucleasa positiva tomar el número total de las colonias contadas como presuntivas de S. aureus.

Debe decir B.6.8.1 Prueba de coagulasa. Seleccionar y sembrar cada colonia seleccionada típica en tubos con 0.5mL de BHI y en tubos con AST. Utilizar simultáneamente un control positivo de S. aureus y un control negativo de S. epidermidis. Incubar a 35°C ó 37°C ± 1ºC en baño de agua, durante 20h a 24h. Mantener los cultivos en AST a no más de 27°C ± 1ºC para pruebas posteriores. Agregar a 0.1mL del cultivo anterior a 0.3mL de plasma de conejo con EDTA (a menos que el fabricante indique otras cantidades). Incubar a 35 o 37°C ± 1ºC en baño de agua y observar periódicamente a intervalos de 1h durante las primeras 4h a 6h; si no hay formación de coágulo, observar hasta las 24h. Considerar la prueba positiva cuando el coágulo se forma completamente y es firme al invertir el tubo. En otro caso se deberán realizar las pruebas auxiliares, descritas en el punto B.6.9.

Justificación Cambio de redacción, para que tenga relación con la redacción de los párrafos anteriores. Se aclara que el baño de aguas e puede usar a 35°C ó 37°C

B.7.2 Si al menos el 80% de las colonias típicas seleccionadas fueron coagulasa positiva y/o termonucleasa positiva tomar el número total de las colonias contadas como presuntivas de S. aureus. Cálculo del número “a” de S. aureus confirmado por placa. B.7.2.1 Calcule el número de colonias confirmadas de S. aureus por placa “a” utilizando la siguiente fórmula

Se hace la modificación conforme a la versión vigente de la norma de referencia, y se incluye el subíndice B.7.2.1 mejorando la redacción del punto.

a=

bc b nc x Cc+ xCnc Ac Anc

Ac es el número de colonias típicas seleccionadas a confirmar Anc es el número de colonias atípicas seleccionadas a confirmar bc es el número de colonias típicas confirmadas bnc es el número de colonias atípicas confirmadas Cc es el número de colonias típicas contadas en la placa Cnc es el número de colonias atípicas contadas en la placa Redondear los resultados a un número entero.

5

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014 Dice B.7.3 En otros casos, calcular el número de colonias presuntivas de S. aureus a partir del porcentaje obtenido de colonias coagulasa y/o termonucleasa positivas confirmadas.

Debe decir B.7.3 En otros casos, calcular el número de colonias presuntivas de S. aureus a partir del porcentaje obtenido de colonias coagulasa y/o termonucleasa positivas confirmadas. Cálculo del número N de S. aureus confirmado por muestra B.7.3.1 Para las placas con menos de 300 colonias de las cuales existan menos de 150 colonias típicas y/o atípicas en dos diluciones consecutivas, calcular el número de S. aureus por placa como se indica en B.7.2 y calcular el número N como una medida ponderada de las dos diluciones sucesivas, usando la siguiente ecuación:

N=

B.7.4 Promediar los resultados de los duplicados.

Justificación Se hace la modificación conforme a la versión vigente de la norma de referencia, y se incluye el subíndice B.7.3.1 mejorando la redacción del punto.

∑a

V ( n1+ 0.1n 2 ) d

Σa es la suma de las cuentas encontradas en las placas V es el número de mL en cada placa, en mL n1 es el número de placas seleccionado en la primera dilución n2 es el número de placas seleccionadas en la segunda dilución d es el factor de dilución seleccionado en la primer dilución Redondear los resultados utilizando dos cifras significativas. B.7.4 Promediar los resultados de los duplicados Reportar los resultados como el número de S. aureus por mL o g de producto

Se adapta a la actualización del método y en coherencia a los puntos anteriores.

6

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014 Dice B.7.5 Cuando en dos diluciones consecutivas se obtienen cuentas entre 15 y 150 colonias (típicas o atípicas) calcular el número de S. aureus para cada dilución como se especifica en los puntos anteriores, calcular la cuenta de S. aureus considerando el factor de dilución, calcular el logaritmo en base diez de cada dilución y realizar la resta de éstos, si la diferencia entre los logaritmos de las dos diluciones es menor a 0.3, reportar el promedio de las dos diluciones. Si por el contrario la diferencia entre los logaritmos es mayor a 0.3; reportar el valor más bajo.

Debe decir B.7.5 Cuando en dos diluciones consecutivas se obtienen cuentas entre 15 y 150 colonias (típicas o atípicas) calcular el número de S. aureus para cada dilución como se especifica en los puntos anteriores, calcular la cuenta de S. aureus considerando el factor de dilución, calcular el logaritmo en base diez de cada dilución y realizar la resta de éstos, si la diferencia entre los logaritmos de las dos diluciones es menor a 0.3, reportar el promedio de las dos diluciones. Si por el contrario la diferencia entre los logaritmos es mayor a 0.3; reportar el valor más bajo.Estimación de las cuentas bajas B.7.5.1 Si las dos placas de la muestra directa o de la primera dilución contiene menos de 15 colonias, reportar los resultados como sigue: a) Para los productos líquidos, estime el número de S. aureus por mililitro.

Ne=

Justificación Se hace la modificación conforme a la versión vigente de la norma de referencia, y se incluye el subíndice B.7.5.1 mejorando la redacción del punto.

∑a

V X2

Ne es el número estimado de colonias confirmadas de S. aureus Σa es el número de colonias confirmadas en las dos placas V es el volumen inoculado en las placas b) Para otros productos, estime le número de S. aureus por gramo

Ne=

∑a V x 2x d

Ne es el número estimado de colonias confirmadas de S. aureus Σa es el número de colonias confirmadas en las dos placas V es el volumen inoculado en las placas D es el factor de dilución en la primera dilución

7

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014 Dice B.7.7 Ejemplo para el cálculo de S. aureus. Por ejemplo, el 0.1mL del inóculo de la dilución 10-2 de la muestra da como resultado 65 y 85 colonias típicas por placa. Ninguna colonia atípica fue identificada en las placas. Todas las 5 colonias seleccionadas de la placa conteniendo 65 colonias fueron coagulasa y termonucleasa positiva por lo que las 65 colonias fueron consideradas como S. aureus. 3 de las 5 colonias seleccionadas de la placa que contiene 85 colonias fueron coagulasa y termonucleasa positiva por lo que el 60%, es decir, 51 colonias son consideradas como S. aureus. La cuenta promedio tomando en cuenta solo las positivas es: 65+51/2 = 58 S. aureus. Redondeando a dos cifras significativas  60 58 por el inverso del factor de dilución (1/10-2) es 5800 UFC. Si se considera que el inóculo fue de 0.1mL habrá que multiplicar por 10 para obtener 58000 UFC/mL o g según la naturaleza de la muestra. También puede aplicarse la siguiente formula:

Debe decir B.7.7 Ejemplo para el cálculo de S. aureus. Se inoculó Por ejemplo, el 0.1mL de cada dilución inóculo de En la dilución 10-2 de la muestra da como resultado se encuentran 65 y 85 colonias típicas por placa respectivamente y ninguna colonia atípica en ambas placas. En la siguiente dilución 10-3 se encontraron 3 y 7 colonias típicas en cada placa respectivamente y ninguna atípica en ambas placas. Se realizaron los siguientes cálculos De las 65 colonias, se seleccionaron 5 colonias, y las 5 fueron confirmadas como S. aureus. Dando a=65 De las 85 colonias, se seleccionaron 5 colonias, y solo 3 fueron confirmadas como S. aureus. Dando a=51 De las 3 colonias, se probaron las 3 y las 3 fueron confirmadas como S. aureus. Dando a=3 De las 7 colonias, se probaron 5 y las mismas fueron confirmadas como S. aureus. Dando a=7 Entonces N=(65+51+3+7)/ 0.1 (2+ 0.1 (2)) 10-2 N= 126 /0.22 X 10-2 N=57 272 El resultado después del redondeo quedaría como: 5.7 x 10 4 UFC/g Ninguna colonia atípica fue identificada en las placas. Todas las 5 colonias seleccionadas de la placa conteniendo 65 colonias fueron coagulasa y termonucleasa positiva por lo que las 65 colonias fueron consideradas como S. aureus. 3 de las 5 colonias seleccionadas de la placa que contiene 85 colonias fueron coagulasa y termonucleasa positiva por lo que el 60%, es decir, 51 colonias son consideradas como S. aureus. La cuenta promedio tomando en cuenta solo las positivas es: 65+51/2 = 58 S. aureus. Redondeando a dos cifras significativas  60 58 por el inverso del factor de dilución (1/10-2) es 5800 UFC. Si se considera que el inóculo fue de 0.1mL habrá que multiplicar por 10 para obtener 58000 UFC/mL o g según la naturaleza de la muestra. También puede aplicarse la siguiente formula:

Justificación Se hace la modificación conforme a la versión vigente de la norma de referencia, la observación se hace para mejorar redacción

8

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014 Dice Debe decir B.9.9 Caldo Rojo de Fenol (para B.9.9 Caldo Rojo de Fenol (para fermentación de fermentación de carbohidratos). carbohidratos). B.9.9.1 Fórmula Seguir las instrucciones de preparación conforme se Tripticasa o proteona peptona No. 3 10g describe en C.9.8. sustituyendo ramnosa y xilosa por NaCl 5g manitol o glucosa según se requiera Extracto de carne (opcional). 1g B.9.9.1 Fórmula Rojo de fenol (7.2mL de solución de rojo de 0.018g Tripticasa o proteosa proteona peptona No. 3 10g fenol al 0.25%) NaCl 5g Agua destilada 1L Extracto de carne (opcional). 1g pH 7.4 ± 0.2. Rojo de fenol (7.2mL de solución de rojo de fenol al 0.018g Carbohidrato* 0.25%) B.9.9.2 Preparación: Disolver los ingredientes Agua destilada 1L sin el carbohidrato, en 800mL de agua pH 7.4 ± 0.2. destilada con calentamiento y agitación Carbohidrato* ocasional. Distribuir en volúmenes de 2mL en B.9.9.2 Preparación: Disolver los ingredientes sin el tubos de 13mm x 100mm con campana de carbohidrato, en 800mL de agua destilada con calentamiento Durham. Esterilizar a 121ºC por 15 min y dejar y agitación ocasional. Distribuir en volúmenes de 2mL en enfriar. Disolver 20g del carbohidrato en tubos de 13mm x 100mm con campana de Durham. 200mL de agua destilada y esterilizar por filtro Esterilizar a 121ºC por 15 min y dejar enfriar. Disolver 20g del de membrana, adicionar asépticamente 0.5mL carbohidrato en 200mL de agua destilada y esterilizar por del filtrado a cada tubo con medio esterilizado filtro de membrana, adicionar asépticamente 0.5mL del y enfriado a menos de 45ºC, agitar filtrado a cada tubo con medio esterilizado y enfriado a suavemente para mezclar. menos de 45ºC, agitar suavemente para mezclar.

Justificación Al eliminar este medio y permitir el uso de otro medio base permite aprovechar un solo medio base para dos metodologías, reflejándose en reducción de costos y procesamiento.

3.3. Diagrama de flujo. ■ Revisar punto B.8 Ayuda visual de la norma de referencia.

9

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

■

El diagrama de flujo es una representación gráfica del método, en todo momento se debe tener acceso al método de prueba original.

4. EQUIPOS E INSTRUMENTOS 4.1. Los equipos listados a continuación son los críticos requeridos por el método. En el informe de evaluación

de desempeño deberá completarse la “Tabla equipos de instrumentos empleados” Nombre

Características

Estado deseado

Balanza Granataria

Sensibilidad de 0.1 g

Calibración vigente y verificada el día de uso.

Marco de pesas

Clase F1 o E2 10 ó 20 g; y 100 g ó 200 g ó 500 g

Calibrado

Baño de agua

Temperatura controlada a 35°C ± 1°C ó 37°C ± 1°C.

Calificada1 35°C ó 37°C ± 1°C, por 24 h mínimo. Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día. División mínima de 0.5°C. Adecuadamente inmerso.2

Incubadora

Temperatura controlada a 36°C ± 1°C

Calificada 36°C ± 1°C, por 24 h mínimo. Con termómetro calibrado o verificado para realizar la lectura de la temperatura de la cámara por lo menos dos veces al día. División mínima de 0.5°C. Adecuadamente inmerso.

Homogeneizador o licuadora

Funcionando

Mantenimiento Vigente.

5. MATERIALES

1 Se entiende que la calificación de los equipos para incubación consiste en un procedimiento interno o externo por el cual se demuestre, a través del monitoreo en diferentes puntos que la temperatura de la cámara durante un periodo determinado mantiene una homogeneidad térmica, asegurando las condiciones de incubación de la prueba. 2 Para la medición de la temperatura también se puede utilizar un termógrafo o termocupla trazable

10

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

5.1. El material de trabajo debe ser estéril, cuando no se indique otra cosa, el material esterilizado por calor

seco o calor húmedo se considera estéril hasta por un mes siempre que se mantenga la integridad del empaque; todo el material debe ser adecuadamente identificado, señalando la fecha de esterilización de material y la fecha de uso. Se deben anexar evidencias al informe. 5.2. Cuando se use material estéril éste deberá ser evaluado por lote antes de su uso o documentar la esterilidad mediante certificado de calidad, una vez abierto el empaque los materiales no deben ser usados después de tres días. Se deben anexar evidencias al informe. 5.3. El material de vidrio re-usado deberá demostrar que fue lavado adecuadamente, mediante registros de supervisión y demostrar la ausencia de residuos de detergente. Se deben anexar evidencias al informe. 5.4. Los siguientes materiales son de carácter enunciativo, el laboratorio deberá reportar los utilizados y sus características en el informe. ● Bolsas estériles para homogeneizador peristáltico o vasos de licuadora de vidrio o aluminio. ● Cajas Petri de vidrio o desechable, diámetro de 90mm a 100mm. ● Cucharas, tenedores y cuchillos estériles para el manejo de la muestra ● Frascos de 500 mL con tapa de rosca esterilizables ● Gradillas para tubo de ensaye esterilizables ● Mecheros Bunsen o Fisher. ● Perillas o propipetas. ● Pipetas estériles de vidrio graduadas con diferentes capacidades: 10 y 5 mL con divisiones de 0.5 mL y 1 mL y con división mínima de 0.1 mL. ● Micropipetas 100 a 1000 μL calibradas y/o verificadas. ● Matraces Erlenmeyer con tapón de rosca de 250 mL. ● Tubos de ensaye de 18 por 150 mm con tapón de rosca. ● Puntas para micropipetas estériles y desechables. 6. REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO (MEDIOS DE CULTIVO, REACTIVOS Y MATERIAL BIOLÓGICO

DE REFERENCIA). La preparación de los medios de cultivo se debe realizar conforme a las instrucciones del fabricante. En el informe, se deberán incluir evidencias de la preparación de los medios y su control de calidad. 6.1. ■ ■ ■ ■ ■ ■

MEDIOS DE CULTIVO y REACTIVOS Agar Baird Parker; BHI; Solución reguladora de fosfatos; Agua peptonada; Solución Salina 0.85%; Agar Azul de Toluidina-ADN; 11

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

■ ■ ■ ■ ■ 6.2. ■ ■

Plasma de Conejo con EDTA; Agua peptonada amortiguada; Peróxido de hidrógeno al 3%; Reactivos para la tinción de Gram; Caldo para la fermentación de carbohidratos. CEPAS S. aureus ATCC 6538 ó 25923; Para la prueba de selectividad se pueden escoger cepas que sean interferentes en la determinación como S. epidermidis ATCC 12228 o Listeria monocytogenes ATCC19115.

7. MUESTRAS 7.1. Para la autorización inicial cada laboratorio deberá realizar la evaluación del desempeño del método con al

menos una matriz del grupo de alimentos prioritario para el laboratorio. 7.2. El laboratorio deberá contar con un programa para realizar la evaluación de desempeño en una matriz por

cada grupo de alimentos. 7.3. En el informe de validación se deberá reportar los criterios para la selección de la matriz inicial considerando lo siguiente: Grupo de alimentos

Tipos de producto

Tipo de producto recibido en el laboratorio.

Matriz representativa mayormente recibida en el laboratorio.

Prioridad para el laboratorio. 3

Productos Cárnicos

Crudo Procesados térmicamente Congelados Fermentados Curado Pate

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Pescado y Productos de la pesca

Crudos Congelados

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Frutas y Vegetales

Crudos

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Leche y lácteos

Crudos Congelados fermentados

Reportar en el informe

3 Reportar numéricamente indicando 1 para el más prioritario. 12

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

Queso artesanal

Agua

Agua potable Agua embotellada Agua de pozo Hielo

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Otros Productos

Para ser llenado por cada laboratorio

Reportar en el informe

Reportar en el informe

Reportar en el informe

7.4. La selección de las muestras debe realizarse con base en las prioridades del laboratorio considerando; la

frecuencia de recepción y los programas prioritarios. 7.5. Para la ejecución de este protocolo es necesario contar con una muestra con cuentas altas de S. aureus, pudiendo ser esta naturalmente contaminada o fortificada.

7.6. Para la selección de las muestras se deberá contar con aproximadamente 1.5 kg o L de muestra y

almacenar en condiciones adecuadas, dependiendo de la matriz. Además se debe tener trazabilidad de la muestra por ejemplo: marca, número de lote, fecha de caducidad, para productos como frutas, vegetales, agua de la llave, se deben contener información de los datos de muestreo o lugar de la compra, fecha de la compra, etc. 8. DESARROLLO EXPERIMENTAL

Considerando que el método de S. aureus tiene tres etapas; aislamiento y selección de colonias sospechosas (típicas y atípicas), la confirmación de estas colonias, y el cálculo. Resulta necesario evaluar la capacidad de cada laboratorio para poder distinguir y seleccionar las colonias sospechosas, que serán después incluidas en el cálculo de estimación de UFC de S. aureus, lo cual será evaluado por la medición de la selectividad. 8.1. Ajuste del inóculo del microorganismo de interés. ■ Previo al ensayo de evaluación se debe identificar la dilución adecuada de los microorganismos para

preparar la suspensión de trabajo, en las concentraciones que se indican más adelante. ■ El protocolo de preparación del inóculo puede ser elegido a conveniencia del laboratorio, éste debe describirse en el informe. ■ Para la preparación del inóculo puede consultarse la “Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para el Análisis de Alimentos” (CCAYAC-CR-018). ■ Inocular aproximadamente 1,200,000 UFC en la primera dilución (250mL), para obtener una cuenta aproximada de 480 UFC en la primera serie de placas, 48 UFC en la segunda y 5 UFC en la tercera. 8.2. Ajuste del inóculo de los microorganismos para la prueba de selectividad.

13

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

■

Preparar un inóculo de < 25,000 UFC del microorganismo de interés y >250,000 UFC del microorganismo interferente. Tabla 1 Preparación de muestras Repetibilidad, Reproducibilidad, Recuperación, Selectividad, Sesgo e Incertidumbre. Parámetro

Analistas

Muestra

Diluciones decimales

Número de réplicas

Microorganismo

Verificación de la muestra

Al menos un analista

25 g o 25mL

3

3

Sin microorganismo

Repetibilidad Recuperación Sesgo

Un analista

10

Staphylococcus aureus

1,200,000 UFC aproximadamente

10 por analista o cada tiempo.

Staphylococcus aureus

1,200,000 UFC aproximadamente

25 g ó 25 mL por réplica

Tamaño de Inóculo

Sin inóculo

3 diluciones Reproducibilidad

Al menos 2 analistas, o 2 tiempos diferentes

25 g ó 25 mL por réplica

Staphylococcus aureus

Selectividad

8.3. ■ ■ ■ ■ ■

Un analista

25 g ó 25 mL por réplica

1

10 por analista

S. epidermidis ATCC 12228 o Listeria monocytogenes ATCC 19115

< 25,000 UFC

> 250,000 UFC

Repetibilidad Medir 10 alícuotas de 25 g o 25 mL de la matriz seleccionada en 225 mL de agua peptonada amortiguada. Inocular cada alícuota con aproximadamente 1,200,000 UFC. Verificar el inóculo utilizando la técnica de vaciado en placa, empleando para el cálculo 6 cajas. Proceder como lo establece el método de prueba correspondiente basado en el Apéndice B Normativo. NOM-210-SSA1-2014.4 Registrar los resultados en el formato del informe.

8.4. Reproducibilidad ■ Un segundo analista simultáneamente con el que realiza repetibilidad ó el mismo en un tiempo diferente, ■

deberá ejecutar lo descrito en repetibilidad. Registrar los resultados en el formato del informe. 4 Para los cálculos se deberán considerar las modificaciones a la norma. 14

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

8.5. Recuperación ■ Obtener el logaritmo de los resultados obtenidos de las cuentas de S. aureus en la repetibilidad, y calcular la media de los logaritmos de éstas. ■ Dividir la media del logaritmo de los resultados obtenidos de las cuentas de S. aureus (Vo) entre el logaritmo de las UFC inoculadas (Ve), y multiplicarlo por 100 para calcular el porcentaje de recuperación según se indica en el apartado 10.4. 8.6. Sesgo ■ Obtener el sesgo sacando el valor absoluto de la diferencia entre la media del logaritmo de los resultados obtenidos de las cuentas de S. aureus (Vo) menos el logaritmo de las UFC inoculadas (Ve). 8.7. Selectividad ■ Preparar una dilución de la muestra midiendo 10 alícuotas de 25 g o 25 mL de muestra en 225 mL de de

agua peptonada amortiguada, inocular < 25,000 UFC del microorganismo de interés y >250,000 UFC del microorganismo interferente, a partir de esta, inocular por extensión en placa dos placas de ABP y continuar con el método de prueba correspondiente basado en el Apéndice B normativo NOM-210-SSA12014. Simultáneamente verificar ambos inóculos utilizando la técnica de vaciado en placa, empleando para ello 6 placas con cada cepa. Proceder como lo establece el método de prueba correspondiente basado en el Apéndice B Normativo. NOM-210-SSA1-2014.4 Registrar los resultados en el formato del informe.

■ ■

9. Resultados 9.1. Registrar resultados en el informe de desempeño.

9.2. Para el cálculo de los resultados se podrá usar el formato CCAYAC-F-731 10. Análisis estadístico 10.1. Repetibilidad ■ Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo.

■

El valor de r se calcula como: DSR=

r=2.8

√

s ´x

DSR2 n 15

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

Dónde: s=desviación estándar r= repetibilidad DSR=Desviación estándar relativa n = número de réplicas

´x = Promedio 10.2. Reproducibilidad ■ Calcular la reproducibilidad utilizando los resultados obtenidos de las 10 réplicas de la prueba de

■ ■

repetibilidad de un analista, más los resultados de un segundo analista, o el mismo analista en un segundo tiempo. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo. El valor de R se calcula como:

√

DSR21 + DSR 22 R=2.8 n Dónde: R= Reproducibilidad (por analista) DSR1=Desviación estándar relativa del analista 1 DSR2=Desviación estándar relativa del analista 2 n= Total de réplicas considerando los dos analistas

10.3. Recuperación ■ Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo. ■ El valor de % de recuperación se calcula como:

% Recuperación= Media del logaritmo de las cuentas x100 Logaritmo de las UFC inoculadas 10.4. Sesgo ■ El sesgo es la diferencia absoluta entre el valor conocido como verdadero y el valor obtenido ■

experimentalmente. Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo. El sesgo se calcula como: Sesgo= [Ve-Vo] Dónde Ve= valor esperado 16

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

Vo= valor obtenido 10.5. Selectividad

■

Al menos en el 80% de los resultados se obtienen confirmación de S. aureus. No. de resultados confirmados como S . aureus S= × 100 No . de resul tados esperados Considerando que se requieren 10 réplicas por analista y al menos 1 analista el número total de resultados esperados debería ser 10.

10.6. Estimación de la incertidumbre ■ Identificar y mencionar las posibles fuentes de incertidumbre.

■ ■

Colocar las lecturas obtenidas en el formato del informe, la hoja realizará automáticamente el cálculo. La incertidumbre expandida U tal como se define por GUM, se deriva de la incertidumbre estándar combinada uc(y), con un factor de cobertura k elegido en esta especificación técnica como un valor de 2 (que aproximadamente corresponde a un nivel de confianza del 95%.

U = 2 sR

Dónde: U= Incertidumbre expandida. YiA = Son los datos transformados a logaritmo, en log10 (ufc/g) ó log10 (ufc/ml) del analista A YiB = Son los datos transformados a logaritmo, en log10 (ufc/g) ó log 10 (ufc/ml) del analista B n = 20 11. CRITERIOS DE ACEPTACIÓN Parámetro Repetibilidad

Criterio de aceptación 10 Réplicas un analista. Nivel de fortificación: valor medio Resultado r < 3

17

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

Parámetro

Criterio de aceptación

Reproducibilidad

10 Réplicas por cada analista, 2 analistas. Nivel de fortificación: valor medio Resultado R < 3

Recuperación

10 Réplicas, un analista. Nivel de fortificación valor medio Resultado entre 90 y 110% log

Sesgo

10 réplicas un analista. Nivel de fortificación: valor medio La diferencia absoluta de lo recuperado y lo inoculado es 100 UFC por placa del microorganismo interferente. Resultado: confirmación del microorganismo de interés en > 80 % de las muestras.

Incertidumbre

Especificar el mensurando Listar las fuentes de incertidumbre Realizar los cálculos de la incertidumbre expandida.

Referencia: Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para análisis de alimentos. CCAYAC-CR-018.

18

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

INFORME PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus APÉNDICE B NORMATIVO, NOM-210SSA1-2014

19

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

Participaron en la elaboración de este informe María Esperanza Rodríguez Parra Laboratorio Estatal Salud Pública Tamaulipas Responsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos 834 312 6633 [email protected]

Odilia Hernández Hernández Laboratorio Estatal Salud Pública Veracruz. Jefa del Departamentos de Análisis Sanitarios. 229 9811390 Ext: 117 [email protected]

Paul Castro Laboratorio Estatal de Salud Pública de Baja California Sur. Aseguramiento de Calidad [email protected]

Karina Guerrero Colina Laboratorio Estatal Salud Pública Veracruz. Q. Analista de Análisis Microbiológicos 229 9811390 Ext: 117 [email protected]

César Omar Gálvez González Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura. Coordinador de la Oficina de Proyectos Analíticos. 5550805200 ext. 2022 [email protected]

Mirella Paredes Salas Laboratorio Estatal de Salud Pública de Aguascalientes 449 9775511 [email protected]

Participaron en la revisión de este informe. Odilia Hernández Hernández Laboratorio Estatal de Salud Pública de Veracruz Jefe de Departamento de Análisis Sanitarios (229) 9811390 Ext.117 [email protected]

IBQ Claudia Lorena Garcia Green Laboratorio Estatal de Salud Pública de Baja California Sur.

Maria Esperanza Rodriguez Parra Laboratorio Estatal Salud Pública Tamaulipas Responsable de Laboratorio de Microbiología de Aguas y Alimentos 834 312 6633 [email protected]

Geovani Ramírez Hernández Gerencia de la Red nacional de laboratorios. 50805200 ext. 2016 [email protected]

Liliana Areli Cano Ramirez Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura Coordinadora de Microbiología Sanitaria. 50805200 ext. 2043 [email protected]

Autorización Imelda Rocio Guzman Directora Ejecutiva de Control Analítico. Comisionada de Control Analítico y Ampliación de Cobertura. Teléfono: 01 55 50 80 52 00 ext 2043 [email protected]

Josefina Gutiérrez Ramírez Comisión de Control Analítico y Ampliación de Cobertura. Directora Ejecutiva de Innovación. 01 55 50 80 52 00 ext 2005 [email protected]

20

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

1.

OBJETIVO Reportar los resultados de Repetibilidad, Reproducibilidad, Recuperación, Sesgo, Selectividad e Incertidumbre, obtenidos en el desarrollo del protocolo armonizado para la evaluación del desempeño del Método de referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus, Apéndice B Normativo. NOM-210SSA1-2014 en la matriz(ces) utilizado el método interno .

2.

CAMPO DE APLICACIÓN Este informe es de aplicación a la Red Nacional de Laboratorios en la implementación y evaluación del desempeño del Apéndice B Normativo, Método de referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus NOM-210-SSA1-2014.

3.

EQUIPOS E INSTRUMENTOS Equipo

Descripción:

Estado deseado5

Evidencia del estado.6

Identificación, Marca, Modelo Balanza Granataria

Haga clic aquí para escribir texto.

Verificado el día de uso y Calibrado7



Marco de pesas

Haga clic aquí para escribir texto.

Calibrado 7

Incubadora 36°C ± 1°C

Haga clic aquí para escribir texto.

Calificada

Instrumento de medición de temperatura

Haga clic aquí para escribir texto.

Calibrado o verificado

Baño de agua 35°C ó 37°C ± 1°C

Haga clic aquí para escribir texto.

Calificado

5 Seguir los criterios de aplicación descritos en http://www.cofepris.gob.mx/TyS/Paginas/TercerosAutorizados.aspx 6Hacer referencia al registro, número de informe de calibración/calificación. Anexar copia de las evidencias al presente informe. 7 Se recomienda implementar el uso del CCAYAC-CR-13.

21

FECHA DE PUBLICACIÓN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016 PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

Equipo

Descripción:

Estado deseado

Evidencia del estado.

Identificación, Marca, Modelo Instrumento de medición de temperatura

Haga clic aquí para escribir texto.

Calibrado o verificado

Homogeneizador peristáltico, licuadora

Haga clic aquí para escribir texto.

Mantenimiento Vigente

.

Reportó

Supervisó

Firma

4.

Firma

Nombre

Haga clic aquí para escribir texto.

Nombre

Fecha

Haga clic aquí para escribir una fecha.

Fecha

MATERIALES Material

Descripción

Clave de Procedimiento

Material de vidrio

Material estéril

desechable

Evidencia8

8 Cuando se use material esterilizado en el laboratorio, se deberá anexar evidencias de la prueba de esterilidad realizada al material.

22

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

Reportó Firma Nombre Fecha 5.

Supervisó

Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

Firma Nombre Fecha

Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

REACTIVOS Y MEDIOS DE CULTIVO Reactivo o medio de cultivo

Marca

Lote y caducidad

Resultados de desempeño y fecha de evaluación.9

Lote de preparación. Fecha de vida útil del medio preparado.

Agar Baird Parker

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

BHI

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Solución reguladora de fosfatos o agua peptonada amortiguada

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Solución salina 0.85%

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

AST

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Agar azul de toluidinaADN

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Plasma de conejo con EDTA

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

9 Enviar evidencia de la preparación y de la evaluación del desempeño los medios utilizados en este informe.

23

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

Reactivo o medio de cultivo

Marca

Lote y caducidad

Resultados de desempeño y fecha de evaluación.

Peróxido de hidrógeno al 3%

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Kit para tinción de Gram

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Caldo rojo fenol (glucosa y manitol)

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Reportó

Supervisó

Firma Nombre Fecha

6.

Firma Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

Nombre Fecha

Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

CEPAS Cepas utilizadas

ATCC u origen de la Certificado u hoja de identidad y aseguramiento de calidad cepa.

Staphylococcus aureus

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Staphylococcus epidermidis o Listeria monocytogenes

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Reportó Firma Nombre Fecha

7.

Lote de preparación. Fecha de vida útil del medio preparado.

Supervisó Firma

Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

Nombre Fecha

Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

MUESTRAS 24

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

7.1.

Criterio de selección de la muestra En la tabla se indica en una escala de 1 al 5 la prioridad para el laboratorio, donde uno es el más importante y 5 el menos importante. Criterio de selección de la muestra

Tipos de producto

Tipo de producto recibido en el laboratorio.

Matriz representativa, mayormente recibida en el laboratorio

Productos Cárnicos

Crudo Procesados térmicamente Congelados Fermentados Curado Pate

Reportar en el informe

Ejemplo Carne molida congelada

Ejemplo 4

Crudos Congelados

Reportar en el informe Ejemplo Pescado refrigerado Crudos Congelado

Reportar en el informe

Ejemplo 2

Pescado y Productos de la pesca

Prioridad para el laboratorio

Ejemplo Cárnico crudo Cárnico congelado

Ejemplo Tilapia

Frutas y Vegetales

Crudos Mínimamente procesados

Reportar en el informe Ejemplo fruta cruda No recibe

Reportar en el informe Ejemplo No recibe

Ejemplo 3

Leche y lácteos

Fresco Crudos Queso artesanal

Reportar en el informe Ejemplo Queso Fresco

Reportar en el informe Ejemplo Queso fresco

Ejemplo 1

Otros Productos

Para ser llenado por cada laboratorio

Ejemplo No aplica

Reportar en el informe Ejemplo No aplica

Ejemplo 5

Muestra Seleccionada Haga clic aquí para escribir texto.

Cantidad de Muestra Haga clic aquí para escribir texto.

25

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

Descripción de la muestra (cuando aplique: marca, lote, fecha de caducidad, condiciones de preservación): Haga clic aquí para escribir texto. Reportó

Supervisó

Firma Nombre Fecha

8. 8.1. 8.1.1.

Firma Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

Nombre Fecha

Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

DESARROLLO EXPERIMENTAL. Preparación del Inóculo. (Ver punto 8.1 del protocolo) Descripción de la preparación del inóculo: Escriba en esta sección el protocolo empleado, por ejemplo: Se inoculó una asada de Staphylococcus aureus en 10 mL de Caldo Infusión Cerebro Corazón, se incubó a 36 o C +/- 1o C por 22 a 24 h. A partir del cultivo se realizaron una serie de diluciones con solución salina 0.85% hasta llegar a la dilución 10 -9. Se colocó 1 mL por duplicado en cajas petri de la dilución 10 -7 a 10-9 y se adiciona agar métodos estándar, se incubó a 36 o C +1o C por 22 a 24 h. Se realizó el conteo en cada dilución y se realizó el registro de los resultados de la concentración del microorganismo en cada dilución. Se seleccionó la dilución con cuentas aproximadamente de 12 X 10 5UFC. Las diluciones se mantuvieron en refrigeración y no son utilizadas por más 26 h. Ver resultados en 9.1 Verificación de la muestra. 8.2.1. Descripción de la verificación de la muestra.

8.3. Repetibilidad > 8.4. Reproducibilidad >

27

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

8.5. Selectividad >

28

FECHA DE PUBLICACIÓN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016 PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.

Resultados. Preparación del Inóculo. Registro > 9.1.

Fecha de preparación: Fecha de lectura:

>

Diluciones

Cuenta de colonias

145

UFC/

150

160

12

18

15

4

1

3

Tamaño de inóculo deseado Cálculo: > Reportó Nombre y Nombre Firma Firma Fecha Fecha

Supervisó y

29

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.2.

Resultados de Verificación de la muestra: 9.2.1. Fecha de preparación de

la

Cantidad pesada por muestra: réplica 1 réplica 2 réplica 3

Balanza

Número de diluciones realizadas réplica 1 réplica 2 réplica 3

Diluyente

mL de muestra inoculados por placa

Medio de cultivo

muestra:

Incubación: Temperatura Tiempo Incubadora Termómetro Reportó Nombre Firma Fecha

y

Supervisó Nombre Firma Fecha

y

30

FECHA DE PUBLICACIÓN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016 PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.2.2 Primera lectura Fecha:

Placa 1

Réplica 3

Réplica 2

Réplica 1

Dilución

Nombre Y firma Fecha

Placa 2





d=





Colonias típicas contadas en la placa

cc





cc





Colonias atípicas contadas en la placa

cnc





cnc





Colonias típicas contadas en la placa

cc





cc





Colonias atípicas contadas en la placa

cnc





cnc





Colonias típicas contadas en la placa

cc





cc





Colonias atípicas contadas en la placa

cnc





cnc





Analista Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

Nombre firma Fecha

y

Supervisor Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

31

FECHA DE PUBLICACIÓN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016 PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.2.3 Segunda lectura Fecha:

Placa 1

Réplica 3

Réplica 2

Réplica 1

Dilución

Nombre Y firma Fecha

Placa 2





d=





Colonias típicas contadas en la placa

cc





cc





Colonias atípicas contadas en la placa

cnc





cnc





Colonias típicas contadas en la placa

cc





cc





Colonias atípicas contadas en la placa

cnc





cnc





Colonias típicas contadas en la placa

cc





cc





Colonias atípicas contadas en la placa

cnc





cnc





Analista Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

Nombre firma Fecha

y

Supervisor Haga clic aquí para escribir texto. Haga clic aquí para escribir una fecha.

32

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.2.4 Confirmación10, 11 BHI Lote de preparación AST Lote de preparación Coagulasa Lote Fecha de hidratación Azul de Toluidina Lote de preparación Haga clic aquí para escribir texto. Bioquímicas Lote ó Manitol lote Glucosa lote Catalasa Lote Baño de agua Temperatura Termómetro Incubadora Temperatura Termómetro Muestra

Cepa

Resultado coagulasa

Tiempo de incubación para coagulasa

Resultado Termonucleasa

Control Positivo

S. aureus >

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Control Negativo

S. epidermidis

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir texto.

9.2.4.1 Para el registro de resultados de confirmación utilice el formato anexo 13.1 “Registro de resultados de confirmación” o los formatos internos del laboratorio y anexe al informe la cantidad de formatos necesarios. Analista Nombre Firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto. y Haga clic aquí para escribir una fecha.

Supervisor Nombre y firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir una fecha.

10 De las siguientes tabla solo utilice las celdas necesarias, cancela las celdas que no use siguiendo las buenas prácticas de documentación 11 Las pruebas auxiliares pueden hacerse para apoyar la determinación de coagulasa y termonucleasa.

33

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.2.4.2 Para la interpretación de los resultados y cálculos utilice el CCAYAC-F-731 anexe a este informe. 9.2.5 Resumen de resultados. Réplica

Resultado

1 2 3

Reportó Nombre firma Fecha

Valor esperado

Haga clic aquí escribir texto.

para

Haga clic aquí escribir texto.

para

Haga clic aquí escribir texto.

para

Cumple

☐Muestras no contaminadas: < 100 UFC/g o Fecha de la verificación:

>

Microorganismo: mL inoculados a la muestra: UFC esperado (teórico) > UFC/mL. 9.3.1.3 Verificación del inóculo. mL inoculados por placa para la cuenta en placa: Método de recuento: Vaciado en placa ☐, Extensión en superficie ☐ Medio de cultivo Lote de preparación: Incubación: Temperatura Tiempo Incubadora Termómetro Dilución en la que se cuentan < 300 UFC Resultados: Réplica

1

2

3

4

5

6

UFC en la placa 1









UFC en la placa 2









Promedio por réplica.









Promedio de las 6 réplicas

Haga clic aquí para escribir texto.

Valor esperado por g o mL de muestra

Haga clic aquí para escribir texto.

Reportó Nombre firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto. y Haga clic aquí para escribir una fecha.

Supervisó Nombre y firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir una fecha.

36

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.3.1.4 Registro de incubación Temperatura Tiempo Incubadora Termómetro Fecha de incubación: > Reportó Nombre firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto. y Haga clic aquí para escribir una fecha.

Supervisó Nombre y firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir una fecha.

9.3.1.5 Registro de lectura: Utilizando el formato anexo 13.2 “Registros de cuentas” registre el número de colonias de cada réplica. 9.3.1.6 Confirmación Registre los resultados de confirmación en el formato anexo 13.1 “registro de resultados de confirmación”. 9.3.1.7 Cálculos Realice el cálculo de UFC por g o mL de muestra utilice el formato CCAYAC-F-731. 9.3.1.8 Resuma los resultados en el punto 9.3.3.

37

FECHA DE PUBLICACIÓN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016 PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.3.2. Analista 2 Nombre del Analista: Fecha de inicio de la Prueba > 9.3.2.1. Registro de preparación de la muestra. Fecha de preparación de la muestra:

>

Identificación de la Balanza Haga clic aquí para escribir texto. Número de diluciones realizadas por muestra Diluyente mL de muestra inoculados por placa Medio de cultivo: Por cada muestra registre la cantidad pesada realmente. Réplica

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Cantidad real pesada (g)













Reportó Nombre firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto. y Haga clic aquí para escribir una fecha.

Supervisó Nombre y firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir una fecha.

38

FECHA DE PUBLICACIÓN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016 PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.3.2.2. Registro de inoculación de la muestra y verificación del inóculo. Fecha de la preparación del inóculo: Fecha de la verificación: Microorganismo: mL inoculados a la muestra: UFC esperado (teórico) > UFC/mL. 9.3.2.3 Verificación del inóculo. mL inoculados por placa para la cuenta en placa: Método de recuento : Vaciado en placa ☐ , Extensión en superficie ☐, Medio de cultivo

Identificación de la Balanza Número de diluciones realizadas por muestra Diluyente mL de muestra inoculados por placa Medio de cultivo: Por cada muestra registre la cantidad pesada realmente. Réplica

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

Cantida d real pesada (g)













Reportó Nombre firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto. y Haga clic aquí para escribir una fecha.

Supervisó Nombre y firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir una fecha.

9.4.2.

42

FECHA DE PUBLICACIÓN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016 PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.4.2

Registro de inoculación de la muestra y verificación de los inóculos.

Fecha de la preparación del inóculo: Fecha de la verificación:

>

Fecha de la preparación del inóculo:

>

Fecha de la verificación:

>

>

Microorganismo de interés: mL inoculados a la muestra: UFC esperado (teórico) > UFC

Microorganismo Interferente: mL inoculados a la muestra: UFC esperado (teórico) 100 >> UFC.

Verificación del inóculo. mL inoculados por placa para la cuenta en placa: Método de recuento : Vaciado en placa ☐, Extensión en superficie ☐ Medio de cultivo Lote de preparación: Incubación: Temperatura Tiempo Incubadora Termómetro

Verificación del inóculo. mL inoculados por placa para la cuenta en placa: Método de recuento : Vaciado en placa ☐, Extensión en superficie ☐ Medio de cultivo Lote de preparación: Incubación: Temperatura Tiempo Incubadora Termómetro

Resultados:

Resultados:

Réplica

1

2

3

4

5

6

Réplica

1

2

3

4

5

6

Dilución en la que se cuentan < 300 UFC









Dilución en la que se cuentan < 300 UFC









UFC en la placa 1









UFC en la placa 1









UFC en la placa 2









UFC en la placa 2









Promedio por réplica









Promedio por réplica









Promedio

Promedio

Valor esperado por g o mL de muestra

Reportó Nombre firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto. y Haga clic aquí para escribir una fecha.

Valor esperado por g o mL de muestra

Supervisó Nombre y firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir una fecha.

43

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

44

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.4.2.1. Registro de incubación Temperatura Tiempo Incubadora Termómetro Reportó Nombre firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto. y Haga clic aquí para escribir una fecha.

Supervisó Nombre y firma Fecha

Haga clic aquí para escribir texto.

Haga clic aquí para escribir una fecha.

9.4.2.2 Lectura Utilizando el formato anexo 13.2 “registros de cuentas” registre el número de colonias de cada réplica. 9.4.2.3 Confirmación Utilizando el formato anexo 13.1 “registro de resultados de confirmación” anote los resultados de la confirmación. 9.4.2.4 Cálculos Realice el cálculo de UFC por g o mL de muestra utilice el formato CCAYAC-F-731

45

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.4.3 Resumen de resultados de selectividad. Réplica

Cuenta de S. aureus UFC/g o mL

Log(UFC)

Valor esperado



1



2



3



4



5



6



7



8



9



10



Promedio

% de recuperación

46

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.5.

Cálculo de incertidumbre.

Describa los cálculos

47

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

9.6.

Comparación de los resultados obtenidos con los criterios

de aceptación. Parámetro Repetibilidad

Reproducibilidad

Resultados obtenidos

Criterio de aceptación

Dictamen

Analista 1 Haga clic aquí para escribir texto. Analista 2 Haga clic aquí para escribir texto.

r 80 % de las muestras. Las recuperaciones deberían estar dentro del 80%, del valor esperado. 48

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

Parámetro Incertidumbre expandida

Resultados obtenidos Haga clic aquí para escribir texto.

Criterio de aceptación No aplica

Dictamen No aplica

10. Discusión de los resultados Por ejemplo: Los resultados del análisis estadístico realizado, demuestran que al aplicar el método se obtienen resultados confiables y reproducibles y por tanto se puede utilizar para el análisis de los productos descritos en este informe. La presencia de microorganismos interferentes no afecta sustancialmente la recuperación del microorganismo de interés.

49

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

FECHA DE PUBLICACIÓN: Noviembre 2016

PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

11. CONCLUSIÓN ☐Al cumplirse todos los criterios de validez se concluye que el Método de Referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus Apéndice B Normativo. NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la clave y nombre del documento que describe el método del laboratorio), al ser aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud Pública de XXXXXXX es adecuado para el análisis del grupo de alimentos (matriz específica).

☐Al NO cumplirse los criterios de validez (indicar cuales no se han cumplido) se concluye que el Método

de Referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus Apéndice B

Normativo.Apéndice Normativo. NOM-210-SSA1-2014 (Colocar la clave y nombre del documento que describe el método del laboratorio), al ser aplicado por el Laboratorio Estatal de Salud Pública de XXXXXXX NO es adecuado para el análisis del grupo de alimentos cárnicos o para la matriz específica.

12. BIBLIOGRAFÍA 12.1 Norma Oficial Mexicana NOM-210-SSA1-2014, PRODUCTOS Y SERVICIOS. MÉTODOS DE PRUEBA MICROBIOLÓGICOS. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS INDICADORES. DETERMINACIÓN DE MICROORGANISMOS PATÓGENOS. APÉNDICE B NORMATIVO. Método de

Referencia para la estimación de la cuenta de S. aureus. 12.2 Guía para la Evaluación del Desempeño de Métodos de Prueba Microbiológicos para análisis de alimentos. CCAYAC-CR-18/2 2016. 13. ANEXOS 13.1 Registros de resultados de confirmación. 13.2 Registros de cuentas. Anexe copia de las evidencias referidas en el protocolo e informe.

50

FECHA DE PUBLICACIÓN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016 PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

13.1 “Registro de resultados de confirmación” Prueba :__________________ Replica ___________________ Dilución ____________> Placa:______________ Colonias Típicas 1

2

Colonias Atípicas 3

4

5

1

2

3

4

5

Resultado coagulasa13 Tiempo de incubación Resultado Termonucleasa14 Gram15 Bioquímica Catalasa/ Manitol/ Glucosa16 Interpretación17

13 (+) = Positivo ó (-) = negativo 14 (+) = Positivo ó (-) = negativo 15 (+) = Gram Positivo ó (-) = Gram negativo 16 Si se usan bioquímicas colocar (+) = si confirma S. aureus ó (-) = para otro microorganismo, para catalasa/manitol/glucosa colocar (+) = Positivo ó (-) = negativo, por ejemplo S. aureus sería +/+/+ 17 (+) = si confirma S. aureus ó (-)= para otro microorganismo

51

FECHA DE PUBLICACIÓN:

RED NACIONAL DE LABORATORIOS DE SALUD PUBLICA

Noviembre 2016 PROTOCOLO E INFORME ARMONIZADO PARA LA EVALUACIÓN DEL DESEMPEÑO DEL MÉTODO DE REFERENCIA PARA LA ESTIMACIÓN DE LA CUENTA DE S. aureus. APÉNDICE NORMATIVO B, NOM-210-SSA1-2014

13.2 Registros de cuentas Analista: _________________________ Fecha de incubación: ________________ Fecha de primer lectura: ____________________ Fecha de segunda lectura: ____________________ Replica __________ Dilución d= Total de colonias 24h típicas contadas en la

cc



Placa 2



24h cnc

48h

la placa Colonias típicas seleccionadas a

Placa 1

48h

placa Total de colonias atípicas contadas en

Ac

confirmar Colonias atípicas seleccionadas a

Anc

confirmar

52