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• Yhán Anthony

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PRÁCTICAS DE MICROBIOLOGÍA CLÍNICA (CURSO 2012–2013)

Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013)

Miércoles

PRÁCTICAS A REALIZAR

ANÁLISIS CUALITATIVO MUCOSA FARÍNGEA

X-1

Observación de halos de hemólisis en las placas de Agar Sangre nº 1 y nº 2

X-2

Tinción de Gram de presuntos cocos Gram + crecidos en: placa de Agar Sangre nº 2

X-3

Observación de la placa de Agar Salino Manitol y tinción de Gram de colonias aisladas

X-4

Siembra en Agar Sangre de cocos Gram + en sectores (placa nº 3)

Prácticas de Microbiología Clínica (Curso 2012-2013)

Miércoles

ANÁLISIS CUALITATIVO DE FARINGE IDENTIFICACIÓN DE COCOS GRAM POSITIVOS SOBRE LA PLACA DE AGAR SANGRE Nº 2 METODOLOGÍA Se parte de la placa de agar sangre nº 2 (se puede utilizar también la de Agar Salino Manitol). Después de 48 horas de incubación, debe haber colonias aisladas con un crecimiento adecuado. a) Colocando la placa frontalmente a la luz, se observará la existencia de halos de hemólisis (α y β). b) Podrán existir colonias de cocos Gram positivos que no sean hemolíticas. c) Se considerará la relación tamaño de la colonia / tamaño del halo de hemólisis. d) Se realizará una tinción de Gram a cada tipo diferente de colonias aisladas.

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Miércoles

OBSERVACIÓN DE HALOS DE HEMÓLISIS FUNDAMENTO Los microorganismos hemolíticos liberan enzimas (hemolisinas) al medio que destruyen los glóbulos rojos apareciendo halos de hemólisis. METODOLOGÍA Se trabajará con colonias aisladas y bien crecidas a las 48 horas. Observación de la hemólisis α-hemólisis β-hemólisis γ-hemólisis: no hay hemólisis

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Miércoles

CARACTERÍSTICAS DE BETA Y ALFA HEMÓLISIS Beta hemólisis

Lisis completa de los glóbulos rojos Halo transparente alrededor de la colonia

Alfa hemólisis

Lisis parcial de los glóbulos rojos Se abren poros en la membrana Salida de hemoglobina al medio Oxidación del grupo hemo Formación de biliverdina (color verdoso) Halo verdoso alrededor de la colonia

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Miércoles

α

β

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Miércoles

β

α

γ

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Miércoles

IDENTIFICACIÓN PRESUNTIVA DE COLONIAS EN AGAR SANGRE

COCOS GRAM POSITIVOS Colonia grande/Halo hemólisis pequeño Æ Staphylococcus Colonia pequeña/Halo hemólisis grande Æ Streptococcus CATALASA

HEMÓLISIS

AGRUPACIÓN MICROSCÓPICA

S. aureus

+

β

Racimos

S. epidermidis

+

NO

Racimos

S. saprophyticus

+

NO

Racimos

Streptococcus pyogenes

-

β

Cadenas

BACTERIA

S. pneumoniae

-

α

Aisladas Parejas Cadenitas

S. agalactiae

-

β

Cadenas

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Miércoles

OBSERVACIÓN DE MICROBIOTA DE FARINGE Colonia

Morfología celular

Podría ser

Grande Amarillenta- incolora Beta-hemolítica

Células esféricas Racimos irregulares

Staphylococcus aureus

Pequeña Blanca-grisácea No hemolítica

Células esféricas Racimos irregulares

Staphylococcus epidermidis

Grande Blanca-amarillenta Anaranjada No hemolítica

Células esféricas Racimos irregulares

Staphylococcus saprophyticus

Pequeña Grisácea-traslúcida Beta-hemolítica

Células esféricas Células ovoides Aisladas-parejas Cadenas

Streptococcus pyogenes

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Miércoles

OBSERVACIÓN DE MICROBIOTA DE FARINGE

Colonia

Morfología celular

Podría ser

Pequeña Grisácea-traslúcida Alfa-hemolítica

Células esféricas Células ovoides Aisladas-parejas Cadenas

Streptococcus pneumoniae

Pequeña Gris Alfa-hemolítica No hemolítica

Células esféricas Células ovoides Aisladas-parejas Cadenas

Grupo Viridans Streptococcus mutans S. Salivarius S. Bovis S. mitis

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ANÁLISIS CUALITATIVO DE LA MUCOSA FARÍNGEA Observación de la placa de Agar Salino Manitol

Miércoles

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Microorganismos

Miércoles

Fermentación manitol

Colonia

Staphylococcus aureus

SI

Halo amarillo

S. epidermidis

NO

Incolora

S. urealyticus

SI

Halo amarillo

S. xylosus

SI

Halo amarillo

S. lentus

SI

Halo amarillo

S. simulans

SI

Halo amarillo

Variable

Halo amarillo o incoloro

SI

Halo amarillo

Variable

Halo amarillo o incoloro

E. avium

SI

Halo amarillo

E. durans

Variable

Halo amarillo o incoloro

S. saprophyticus Enterococcus faecalis E. faecium

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Miércoles

TINCIÓN DE GRAM DE COLONIAS AISLADAS (BÚSQUEDA DE COCOS GRAM POSITIVOS)

Se realizará tinción de Gram de: 1. Colonias aisladas de la placa de Agar Sangre nº 2 (preferentemente) 2. Colonias aisladas de la placa de AgarSalino Manitol

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Miércoles

Tinción de Gram 1. Extensión. 2. Desecación. 3. Fijación. 4. Colorante: Cristal violeta, 2 minutos. 5. Lavar con agua. 6. Mordiente: Lugol, 2 minutos. 7. Lavar abundantemente con agua. 8. Decoloración: Alcohol etílico 96%, 20 segundos. 9. Lavar abundantemente con agua. 10. Colorante de contraste: Safranina, 3-4 minutos. 11. Lavar abundantemente con agua. 12. Dejar secar a temperatura ambiente. 13. Observar al microscopio con objetivo de inmersión (100X).

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Gram positiva

Miércoles

Gram negativa Extender y fijar la preparación

Cristal violeta

Lugol

Etanol

Safranina

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Miércoles

Staphylococcus

Levaduras

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Miércoles

Enterococcus faecalis

Corynebacterium

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Miércoles

Neisseria

Fusobacterium Streptococcus

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Miércoles

ANÁLISIS CUALITATIVO DE FARINGE SIEMBRA POR SECTORES DE LA PLACA DE AGAR SANGRE Nº 3 METODOLOGÍA a) Se sembrarán aquellas colonias identificadas como cocos Gram positivos. La siembra se hará por sectores en una placa de agar sangre que llamaremos nº 3. b) Cada alumno deberá sembrar, al menos, dos sectores de cocos Gram positivos.