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PRACTICA N° 7

IDENTIFICACIÓN DE CUERPOS CETÓNICOS EN ORINA

OSCAR ALMENTERO KERGUELEN YESSICA MERCADO CAROLINA ORTIZ SALGADO ALEJANDRA SUAREZ BENEDETTI

JAVIER MARTINEZ GUZMAN QUIMICO

UNIVERSIDAD DE CORDOBA FACULTAD CIENCIAS DE LA SALUD TEC. EN REGENCIA DE FARMACIA FUNDAMENTO DE BIOQUIMICA MONTERIA-CORDOBA 2015

INTRODUCCIÓN

Cuando la glucosa no está fácilmente disponible en el organismo a consecuencia de no existir un aporte simultáneo de glucosa por la alimentación, es estos casos el hígado se empobrece en glucógeno y la glucogenólisis es incapaz de compensar el desgaste periférico de glucosa. Sucede lo mismo en el ayuno prolongado; un mecanismo de adaptación al ayuno es la formación de cuerpos cetónicos sintetizados a partir de los ácidos grasos y producidos únicamente en el hígado; estos se utilizan como fuente de energía En caso de ayuno hay cambios que requieren de la adaptación del organismo y esto trae como consecuencia modificaciones en los patrones metabólicos y por lo tanto en las moléculas utilizadas como combustibles. Durante las primeras etapas del ayuno se realizan cambios hormonales, se deja de liberar insulina y se aumenta la liberación de glucagón, lo que ocasiona un aumento en la Glucogenólisis, estimulación de la Lipólisis, inhibición de la síntesis de triacilglicéridos, aumento de la Beta - oxidación y producción de cuerpos cetónicos (Cetogénesis), si el ayuno es prolongado se presenta un desequilibrio entre el metabolismo de carbohidratos y el de lípidos lo que ocasiona que los niveles de cuerpos cetónicos se eleven en sangre y sean eliminados por orina donde son detectados fácilmente.

OBJETIVOS

Objetivo General 

Identificar cuerpos cetónicos en la orina mediante diferentes pruebas.

Objetivos Específico  

Determinar la presencia de cuerpos cetónicos en orina, mediante pruebas cualitativas para cada uno de ellos. Familiarizarse con algunos protocolos empleados en laboratorios clínicos para el reconocimiento de cuerpos cetónicos

TEORÍA RELACIONADA

Los cuerpos cetónicos son los ácidos acetoacético, la acetona y el ácido βhidróxibutirico. En la cetósis, hallamos un aumento de estas sustancias en la sangre y en la orina. Bajo buenas condiciones de salud, los cuerpos cetónicos se forman en el hígado y son completamente metabolizados, de tal manera que solo cantidades insignificantes aparecen en la orina. Por el contrario, en casos de diabetes, inanición, vómitos con deshidratación y después de la exposición al frío y/o ejercicio vigoroso, los cuerpos cetónicos pueden encontrarse en cantidades apreciables en la orina, lo cual permite su determinación cualitativa. La determinación de acetona (Método de Imbert), se fundamenta en la formación de un ferropentacianuro con el derivado isonitrado de la acetona, la determinación de acido acetoacético (Método de Gerhrdt), se basa en la aparición de una coloración rojo-vinosa con el cloruro férrico y en el Método de Hart, el acido hidróxibutirico es transformado en acetona, la cual se identifica mediante el reactivo de Imbert. Los cuerpos cetónicos desempeñan un papel importante en la homeostasis del organismo. En estados en los que la glucemia es baja (como en el ayuno o en dietas pobres en glúcidos) o en casos donde la glucosa no puede ser utilizada (como en la diabetes), la concentración de ácidos grasos y cuerpos cetónicos en el plasma aumenta. Ambas sustancias sustituyen a la glucosa como combustible favorito para obtener energía por parte de la célula. Conviene recordar que la gluconeogénesis, en animales, utiliza distintos precursores como aminoácidos, lactato, glicerol o ácido pirúvico para conseguir fabricar glucosa, pero que los ácidos grasos no pueden convertirse en azúcares. Así, por ejemplo, células como los eritrocitos o las constituyentes del cerebro obtienen su energía mayoritariamente de la glucosa, ya que sus mitocondrias tienen poca capacidad para oxidar los ácidos grasos y en situaciones de ayuno o casos de diabetes los cuerpos cetónicos constituyen unos magníficos sustratos energéticos sustitutivos de la glucosa. Para determinar estos cuerpos en el organismo se realiza en la orina. Esta prueba se usa para medir el nivel de cetonas en su orina. Normalmente, su cuerpo quema azúcar para obtener energía. Sin embargo, si usted tiene diabetes, es posible que no tenga suficiente insulina para que el azúcar de su torrente

sanguíneo se use como combustible. Cuando sucede esto, su cuerpo quema grasas en lugar de quemar azúcar y produce sustancias denominadas cetonas. Las cetonas terminan en su sangre y su orina. Tener cantidades pequeñas de cetonas en su cuerpo es normal. Sin embargo, tener niveles altos de cetonas podría ocasionar enfermedades graves o la muerte. Las pruebas de detección de cetonas evitan que esto suceda.

PROCEDIMIENTO

DETERMINACIÓN DE ACETONA: A 5 ml de orina, agregamos 0.5ml de Nitroprusiano de sodio disuelto al 5% en acido acético al 50%, adicionamos 0.5ml de amoniaco por las paredes del tubo, la aparición de un anillo rojo violáceo en l contacto de los líquidos, es indicativo de la presencia de acetona.

DETERMINACIÓN DE ACIDO ACETOACÉTICO. A 5 ml de orina le adicionamos unas gotas de cloruro férrico, en presencia de acido acetoacético se produce una coloración rojo-vinosa.

DETERMINACIÓN DE ACIDO β-HIDROXIBUTÍRICO En una capsula de porcelana se mezclaron 10ml de agua y 10 ml de orina, se acidifica con unas 5 gotas de acido acético y se caliento en una estufa hasta reducir el volumen a la mitad. Con este calentamiento se eliminan la acetona y el acido acetoacético, al contenido de la capsula se le agregaron 10ml de agua y se transfiere en partes iguales a dos tubos de ensayo, uno de estos tubos servirá como control, al otro se le adiciona 1ml de peróxido de hidrogeno al 10% y se calienta en baño de María por 5 min, se dejo enfriar y finalmente se practica la prueba de Imbert a ambos tubos.

MATERIALES Y REACTIVOS             

2 tubos de ensayo 1 gradilla 2 pipetas 1 beaker de 250ml 1 capsula de porcelana 1 pinza para crisol 1 pinza para tubos de ensayo Agua destilada Orina de diabético (traer) Acido acético glacial Amoniaco Cloruro férrico al 10% Peróxido de hidrogeno al 10% Nitroprusiano de sodio al 5% en CH3COOH al 50%

ANALISIS DE RESULTADO

DETERMINACION DE ACETONA: En primera instancia se procedió a depositar en un tubo de ensayo una muestra de 5 ml de orina la cual fue mezclada con 0,5 ml de nitroprusiato de sodio al 5% en ácido acético al 50%; mezcla que una vez finalizada, mostro un cambio en su coloración, esta se tornó en un tono un poco más amarilla que en su estado inicial, tampoco se presentó ningún tipo de precipitado ni turbidez en el medio, de igual forma la muestra se mantuvo todo el tiempo en su estado líquido aun después de un tiempo considerable.

Se observaron los cambios y se procedió a realizar la siguiente parte de esta prueba.

Para esta parte; por sobre las paredes del tubo se le agregaron 0,5 ml de amoniaco y se pudo observar que la muestra se tornó un poco más transparente perdiendo un poco su tono amarillo presentado en el paso anterior, esta vez se pudo observar que la muestra se mostró con un tono un poco más transparente en su parte superior, no se observó ningún tipo de precipitado ni turbidez en el medio y de igual forma conservo todo el tiempo su estado líquido.

Según los resultados observados en esta prueba, se puede determinar que, debido a la ausencia del tono rojo violáceo en el medio después de cada mezcla, no hay presencia de acetonas en esta mezcla. DETERMINACION DE ACIDO ACETOACETICO:

Para esta prueba hemos disuelto 5 ml de orina, muestra a la cual se le han agregado gotas de cloruro férrico en presencia de ácido acetoacetico, se agito levemente y se pudo observar un cambio de coloración en la muestra, ésta se tornó en un tono blanco, algo espeso, mientras que no se observó ningún tipo de precipitado ni turbidez en el medio, se conservó todo el tiempo en estado líquido. Según los resultados obtenidos, se puede concluir que esta prueba es negativa para la presencia de ácido acetoacetico en el medio, debido a que este no se mostró en ningún momento en un tono rojo-vinoso.

DETERMINACION DE ACIDO β-HIDROXIBUTIRICO: Paso 1: para la determinación de ácido βhidroxibutirico hemos disuelto 10 ml de agua y 10 ml de orina y se le han adicionado 5 gotas de ácido acético, hasta este punto hemos observado una coloración amarilla en el medio aun después de haberla puesto a calentar en una estufa, no se presentó ningún tipo de precipitado ni turbidez en el medio y se mantuvo todo el tiempo en estado líquido.

Paso 2:con estos resultados obtenidos hemos procedido a agregarle 10 ml de agua y se ha transferido esta muestra en dos tubos de ensayos en partes iguales, los cuales se han marcado TUBO A y TUBO CONTROL; en donde al tubo A se le ha agregado 1 ml de peróxido de hidrogeno al 10% mientras que el tubo CONTROL no se le ha agregado nada; ambos se han calentado en baño de maría por 5 min, se dejaron enfriar para así proceder a realizársele la prueba de Imbert. Una vez finalizada esta prueba se pudo observar que ambos presentaron una coloración amarilla en el fondo del tubo, llegando hasta la parte media de la muestra, ya en la parte superior se mostró un tono un poco más transparente, el

medio se mantuvo todo el tiempo en estado líquido y no se presentó ningún tipo de precipitado ni turbidez en la muestra.

PREGUNTAS COMPLEMENTARIAS

1. Qué otro tipo de sustancias pueden determinarse en la orina por un metabolismo anormal de lípidos. Cristales, albumina, acetona, pigmentos y sales          

Acido 5-hidroxindoloacetico Glucosa Electrolitos urinarios Urea Fenilacetona 17- corticosteroides Oxalato Acido acetoacético Acido B- hidróxibutirico Nitroprusiano de sodio.

2. Qué es la cetósis y la Cetonuria. Cetosis: es un estado del organismo que se produce cuando este no tiene suficientes hidratos de carbono para obtener energía y comienza a utilizar las grasas para obtener energía. El proceso fue descubierto por el doctor Stephen Moody en 1969. En estado de cetosis, el cuerpo quema la grasa y, al convertirla en energía para funcionar, el hígado y los riñones generan unas sustancias llamadascuerpos cetónicos. Estos cuerpos cetónicos son expulsados en la orina y el aliento. El resultado suele ser una pérdida de peso al consumir el cuerpo las reservas de grasa más rápidamente. Algunos síntomas de la cetosis pueden ser:  Presencia de cetonas en la orina, aumentando el olor de esta.  Halitosis, al eliminar los cuerpos cetónicos por el aliento.  Dolor de cabeza y/o mareo, debido a la escasez de glucosa para que el cerebro la utilice.  Deshidratación La cetosis se puede producir al padecer enfermedades como la diabetes mellitus tipo 1, consumo excesivo de alcohol o dietas bajas en hidratos de carbono. Aunque pueda tener el beneficio de la pérdida de grasa en personas con sobrepeso este proceso puede ser peligroso y causar problemas de salud si se prolonga en el tiempo. En cualquier caso es altamente recomendable consultar con un médico si cree que puede entrar en este estado.

Cetonuria: está generalmente asociada a la cetoacidosis diabética o al ayuno prolongado. NO es igual a la cetoacidosis (que es una cantidad de cetonas tan grande que vuelve la sangre acídica). Refleja una alteración en el metabolismo de los hidratos de carbono (CHO) como fuentes de energía y una movilización de los depósitos lipídicos (ácidos grasos libres) que el hígado transforma en cuerpos cetónicos para su posterior utilización como fuente alternativa de energía. Cuando las células corporales no pueden disponer de glucosa como fuente de energía, emplean las grasas. Como consecuencia de la combustión de estas, se obtienen los cuerpos cetónicos. En el mercado existen tiras reactivas que son útiles para monitorear los niveles de cuerpos cetónicos en la orina a través la lectura visual de colores. Ayudan al paciente diabético a controlar mejor su condición y a obtener información sobre el metabolismo de los hidratos de carbono y de los lípidos, educándose al respecto. Causas de cetonuria: 

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Metabólicas Diabetes mellitus mal controlada (es decir, la hiperglucemia diabética mal manejada) (generalmente DM1) Glucosuria renal (ocasional) Enfermedades por almacenamiento del glucógeno Factores dietéticos Ayuno prolongado y la desnutrición Dietas con excesivo contenido en grasas Aumento de los requerimientos metabólicos Hipertiroidismo Fiebre Embarazo y lactancia

CONCLUSIÓN

BIBLIOGRAFÍA 

http://es.slideshare.net/ingridjohanasierramejia/practica-cuerposcetnicos-9

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http://www.avancesveterinaria.uchile.cl/index.php/ACV/article/viewFile/ 4797/10979 http://www.aliciacrocco.com.ar/2014/03/cetosis-presencia-de-cuerposcetonicos-o-cetonas/ http://escuela.med.puc.cl/paginas/publicaciones/manualped/AnalOrina .html http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/003585.htm