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• Yhán Anthony

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PRACTICA N ° 3 TOMA DE MUESTRA, MANEJO Y TRANSPORTE DE MUESTRAS BIOLOGICAS OBJETIVOS: 1. Conocer las distintas indicaciones para la toma adecuada de las muestras en parasitología. 2. Conocer las distintas procedimientos de laboratorio para hacer Diagnostico en parasitología. 3. Conocer las técnicas directas y por concentración para hacer diagnostico en parasitología. INTRODUCCIÓN Regularmente en el área de Parasitología, las muestras más analizadas para demostrar la presencia de parásitos intestinales del hombre son las heces; sin embrago existen otros parásitos cuya presencia se puede evidenciar en muestras biológicas como bilis, jugo duodenal, esputo, secreción, biopsia o frotís perianal, no obstante, estas pruebas se harán tomando en cuenta los antecedentes clínicos específicos del paciente. En el manejo de los productos biológicos es donde va a radicar el éxito o el fracaso de un diagnóstico en enfermedades parasitarias. Es necesario seguir ciertos lineamientos preestablecidos para cada producto. Un portaobjetos desengrasado insuficientemente, dará por resultado un frote sanguíneo defectuoso, con el que difícilmente se haría un diagnóstico adecuado. Una materia fecal recolectada con orina, destruye los embriones de Necator. En suma, las muestras mal recolectadas, inadecuadamente conservadas y con mucho tiempo después de haber sido obtenidas, no servirán para observaciones y estudios posteriores, e inclusive pueden conducir a resultados erróneos o falsos. A continuación, se hará referencia los diversos aspectos con los cuales deberán de proceder las muestras a analizar con fines parasitológicos para obtener resultados reproducibles y de esta manera ayudar eficazmente al médico en el diagnóstico, pronostico y tratamiento del paciente. HECES: Condiciones del paciente: el paciente deberá de evitar tomar medicamentos (antiparasitarios, antibióticos, antidiarreicos, laxantes); no deberá emplear aceites minerales compuestos de bismuto o magnesio, ya que las gotas o cristales procedentes de ellos pueden confundirse con algunos parásitos o enmascarar su presencia.

Recolección. La obtención de la materia fecal se debe hacer por expulsión natural y por medio de una cucharilla rectal o bajalenguas tome directamente de la cavidad anal un volumen entre 3-6 grs tamaño de una nuez, en caso de muestras diarreicas aproximadamente 10 ml. Las muestras serán seriadas en tres días consecutivos, salvo otras indicaciones Manejo. Se deben utilizar frascos limpios de boca ancha, se evitará la contaminación con tierra, agua u orina. El cierre de los frascos debe de ser de manera hermética de manera inmediata para evitar contaminaciones bacterianas. Trasladar de manera inmediata al laboratorio (30 minutos como máximo después de cada deposición); caso contrario se preservará la muestra con formalina al 10%. Los frascos se guardarán en lugares frescos, pues el calor acelera los fenómenos de fermentación y con frío se pueden destruir los quistes y trofozoítos de protozoos; deberán etiquetarse con el nombre de la persona, edad, sexo, fecha, de preferencia, hora de expulsión de las heces. RASPADO PERIANAL Condiciones del paciente: la muestra deberá ser tomada preferentemente por la noche o a primera hora de la mañana antes de que el paciente orine defeque o se bañe (lo ideal es hacerlo antes de que el paciente se levante de cama). Recolección: tras el uso de guantes desechables se procederá a tomar con un objeto con cinta adhesiva. Se toma el baja lenguas cubierto con cinta adhesiva transparente de manera que la superficie engomada quede expuesta hacia afuera. Se coloca al paciente en condición genupectoral donde la región perianal quedara ampliamente expuesta para realizar varias aplicaciones con el baja lenguas con la cinta engomada al alrededor de esta zona, con la finalidad queden engomados en esta zona. Finalmente se pega la muestra de la cinta adhesiva sobre una de las caras del portaobjetos con lo recolectado hacia abajo. Conservación: la muestra deberá de ser trasladado de manera inmediata al laboratorio, caso contrario se puede conservarse a medio ambiente. FLUIDOS Y TEJIDOS: De acuerdo al cuadro clínico y al diagnóstico presuntivo, las formas evolutivas de los parásitos intestinales pueden ser investigadas en: Líquido duodenal. Biopsias de intestino delgado o colon obtenidas mediante endoscopía. Esputo. Filtrado de materia fecal. La obtención

de estas muestras, complementarias a los estudios habituales, requiere la intervención del médico. Se reservan para situaciones clínicas particulares. En el caso de aspirados de líquido duodenal o esputo, estos deben colocarse en un tubo de vidrio o plástico transparente, limpio y seco. La cantidad de la muestra es de 2-5 ml y deberá transportarse de modo inmediato al laboratorio o, en su defecto, refrigerarse a 4 ºC por un tiempo no mayor a las 4 horas. Las biopsias se recogerán en solución fisiológica o en caso de demora al laboratorio mayor a 24 h en formol al 10%. TAREA: 1. Describa en el cuadro las condiciones del traslado de muestras para estudio parasitológico según tipo de muestra y que agentes parasitarios de importancia medica es posible hallar. Tipo de muestra Heces Esputo Secreción biliar Contenido duodenal Frotís perianal

Secreción vaginal

LCR

Sangre

Biopsia de tejidos

Medio preservante Agente parasitario

2.

Indique la importancia del manejo de las muestras biológicas en parasitología _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________

3.

CONCLUSIONES: _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________ _________________________________________________________________________________

PRACTICA N° 4 PROCEDIMIENTOS DEL LABORATORIO PARA EL DIAGNOSTICO PARASITOLOGICO OBJETIVOS: 1. 1Analizar y describir los procedimientos frecuentes en laboratorio usados en el diagnóstico de parasitosis 2. Aprender a realizar la técnica para la preparación de un coproparasitario MARCO TEÓRICO: El análisis de una muestra para estudio parasitológico incluye: EXAMEN MACROSCÓPICO (FÍSICO) HECES: La inspección de las heces es importante, ya que puede conducir a un diagnostico de infeccion parasitaria, ictericia obstructiva, diarrea, malabsorción, obstrucción rectosigmoidea, disentería o colitis ulcerosa, o pérdida de sangre en el conducto gastrointestinal. Debe anotarse: Consistencia (especificando si son pastosas, blandas, semilíquidas ó líquidas ó duras) . presencia sangre o moco, y, la presencia de restos alimenticio Color: Normalmente las heces son de color pardo de diferente intensidad, este color se debe a la presencia de urobilina, varía de acuerdo a la ingestión de alimentos y medicamentos. Olor: Las sustancias aromáticas provenientes de la desaminación y descarboxilación del triptófano por las bacterias son las que le dan a la materia fecal el olor característico. Aspecto: Hay diferentes aspectos como son: Diarreico, cremoso, mucoide, granuloso, pastosa, caprino. Practica: EXAMEN MACROSCÓPICO EN HECES Materiales: - Aplicadores de madera. - Muestra de heces. - Guantes. - Suero fisiológico - Coladera de plástico o malla

Procedimientos: Observe las características organolépticas de la muestra a analizar y describa: Consistencia : _____________________________ Color : _____________________________ Olor : _____________________________ Moco : _____________________________ Sangre : _____________________________ - Agregue suero fisiológico a la muestra (en cantidad suficiente) para homogenizarla. - Finalmente, las heces deberán ser cuidadosamente pasadas a través de un tamiz con la finalidad de hallar helmintos y diga si hallo o no un helminto. Grafique _____________________________________________________________

EXAMEN MICROSCOPICO Examen directo en solución salina fisiológica y en solución de lugol Este método permite buscar en muestra de heces frescas las formas evolutivas y móviles de los parásitos. El propósito de la solución salina fisiológica es reconocer trofozoítos de protozoos y otros estadios de diagnóstico de helmintos y protozoos y elementos que aparecen en situaciones anormales. El mejor método para detectar trofozoítos en una amebiasis invasora por Entamoeba histolítyca. En solución de lugol colorear en forma temporal trofozoítos y quistes de protozoos. Inmovilizar larvas. Practica: EXAMEN MICROSCOPICO EN HECES Materiales y rectivos: -Placa portaobjetos -Placa cubreobjetos -Microscopio -Guantes -Aplicador de madera -Solución salina isotonica -Solución de lugol -Muestra de heces Procedimiento: 1- En un portaobjeto se colocan, separadamente, una gota de solución salina y otra de lugol. 2- Con el aplicador de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solución salina. 3- Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos. 4- Se coloca el cubreobjetos. 5- Se efectúa la misma operación en la gota del lugol y se observa. 6- Observar la lámina al microscopio con objetivos de 10 x y 40x. el recorrido es en sentido direccional (de arriba a abajo o de izquierda a derecha)

Resultados de la observación Microscópica. Nombre del parasito: ____________________________________________________ Estadio desarrollado: ____________________________________________________ A que órgano (s) o sitio (s) invade o parasita____________________ _____________________________________________________________________________ Describa las características y/o criterios morfológicos: _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________

Grafique lo observado

EXAMEN DIRECTO CON COLORANTES VITALES Este método nos permite diferenciar correctamente los diferentes protozoos basándose en las características morfológicas de cada uno de ellos observando sus núcleos, endosomas, etc.; mediante la utilización de colorantes vitales (azul de metileno, rojo congo, eosina, verde malaquita, safranina). Practica: EXAMEN DIRECTO CON COLORANTES VITALES Materiales y rectivos: -Placa portaobjetos -Placa cubreobjetos -Microscopio -Guantes -aplicadors de madera -azul de metileno -Muestra de heces Procedimiento: 1- En un portaobjeto se colocan, una gota de azul de metileno. 2- Con el aplicador de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se realiza una suspensión homogénea del colorante. 3- Se coloca el cubreobjetos. Dejar actuar el colorante por 3 minutos. 4- Observar la lámina al microscopio con objetivos de 10 x y 40x, el recorrido es en sentido direccional (de arriba a abajo o de izquierda a derecha). Resultados de la observación Microscópica. Nombre del parasito: _____________________________________________________ Estadio desarrollado: ______________________________________________________ Describa las características de lo observado ______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________ _______________________________________________________________________________

Grafique lo observado

EXAMEN CON TECNICAS DE CONCENTRACION DE LOS ELEMENTOS PARASITARIOS. Estas técnicas tienen como objetivo aumentar la sensibilidad del estudio parasitológico dado que, con frecuencia, las muestras fecales contienen escaso número de quistes o huevos de parásitos. La selección de una o más técnicas dependerán de que especie y fase de su ciclo evolutivo es necesario diagnosticar. Existen métodos por: Por centrifugación: 7- Método de Ritchie, método que permite detectar huevos, quiste o protozoarios. 8- Técnica de Burrows, para diagnóstico de huevos de helmintos, quistes y en especial trofozoítos de protozoarios. 9- Método Teleman modificado: equivale a la técnica con formol éter o de Ritchie. Por flotación: 10- Flotación con sulfato de Zinc, útil para recuperar quiste y ooquistes de protozoos y huevos de helmintos, con excepción de los operculados y alta densidad como el A. lumbricoides. 11- Flotación en azúcar: técnica para recuperar ooquistes de Cryptosporidium.

Practica: EXAMEN CON TECNICAS DE CONCENTRACION DE LOS ELEMENTOS Método de concentración por Ritchie: Se basa en la concentración de los quistes y huevos por sedimentación mediante centrifugación, con ayuda de formol y Éter para separar y visualizar los elementos parasitarios. Una de las ventajas que tiene este método es concentrar y no deformar las formas parasitarias, permite el transporte y el almacenamiento de la materia fecal procesada antes de ser examinada, se usa cuando se necesita una técnica para evaluación de tratamiento y determinación de frecuencia. Materiales y equipo: - Centrifuga - Tubos deensayo conicos de 15 ml - Gasa corta en cuadros de 15 cm por lado - Embudos de polietileno - Vasos de precipitado de 50 ml - Aplicadores demadera - Pipetas pasteur con bulbo - Portaobjetos - Cubreobjetos - Solucion salina isotonica - Solucion de formaldehido al 10 % - Eter etilico y/o gasolina - Microscopio Procedimiento: 1. Con el aplicador de madera coloque en un vasito 1 g de heces y adicione 10-12 ml de solución salina. Homogenice. 2. Filtre la suspensión a través de la gasa colocada en el embudo recogiendo el filtrado en el tubo cónico. 3. Centrifugue 1 min a 2000 r.p.m. 4. Elimine el sobrenadante y re suspenda en solución salina. 5. Repita el paso anterior, dos o tres veces, re suspendiendo el sedimento en solución salina y homogenizando con un aplicador, para obtener un sedimento más limpio. 6. Agregue al sedimento 10 ml de formol al 10% , mezcle y deje en reposo de 10 min. 7. Añada 5 ml de éter y agite vigorosamente 30 segundos. 8. Centrifugue 2 min a 1500 r.p.m.

9.

10. 11. 12.

Después de centrifugar, se observan 4 capas en orden descendente. A) éter y lípidos en la superficie B) un tapón de restos fecales C) formaldehido D) sedimento en el fondo del tubo conteniendo elementos parasitarios. Se introduce una pipeta Pasteur, se extrae una gota sedimento y se coloca en un portaobjetos. Se le adiciona unas gotitas de lugol y se homogeniza y se cubre con el cubreobjetos Se observa la preparación con objetivos de 10 x y 40 x.

Resultados de la observación Microscópica. En caso de encontrar algún parásito describa: a) Nombre del parásito ______________________________________________________ b) Estadio desarrollado _____________________________________________________ c) A que órgano (s) sitio (s) invade o parásita ____________________________ d) Menciona que tipo de técnica se llevó acabo___________________________ e) Ilustre lo observado durante la práctica y haga dibujo detallado del parasito observado.

CUESTIONARIO 12- ¿Cuál es la diferencia en utilizar el lugol y la solución salina para un estudio copro parasitológico directo? _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ ________________________________________________________________ 13- ¿Porque es importante utilizar los métodos de concentración para un estudio de copro parasitológico directo? _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ 14- ¿Cuál es la diferencia entre un método de diagnóstico directo e indirecto en parasitología? Mencione 5 tipos de métodos indirectos. _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ 15- CONCLUSIONES: _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________ _____________________________________________________________________________