• Author / Uploaded
• Hector

Citation preview

INSTITUTO POLITECNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BILOGICAS LABORATORIO DE BIOQUIMICA PRACTICA. Separación de fosfolípidos por cromatografía en capa fina

OBJETIVOS  Aplicar la técnica de cromatografía en capa fina para la separación de los fosfolípidos de la yema de huevo.  Discutir las ventajas de la técnica de separación respecto a la cromatografía en papel. RESULTADOS

Imagen 1; Resultado de la cormatografía.

Imagen 2; Resultados teóricos.

TABLA 1. Resultados de los Rf´s obtenidos en las placas NINHIDRINA MOLIBDATO PATA CODORNIZ PATA CODORNIZ Lisofosfatidil Colina Esfingomielina 0.5076 Fosfatidil 0.2307 0.3384 serina Fosfatidil colina Fosfatidil 0.0923 0.1846 0.1538 Etanol-Amina Lipidos 0.0307 0.0307 0.1076 0.0615 Neutros

BISMUTO PATA CODORNIZ -

YODO PATA CODORNIZ 0.7384 -

-

0.3076

0.1692

0.6153 0.3076

0.1846

0.1076

0.1076

0.1076

-

-

-

-

CALCULOS DEL LOS Rf´s Rf= Distancia de la muestra desde el origen Distancia del solvente muestra desde el origen (6.5cm)

DISCUSION Logramos identificar los tipos de fosfolípidos presentes la yema de huevo de diversas aves tales como codorniz, pata, guajolota y gallina; para lograr obtenerlos se realizó una cromatografía en capa fina, esta es una técnica que utiliza una placa de sílica (fase estacionaria polar, comúnmente se utiliza sílica gel adherida a una superficie sólida) inmersa verticalmente en una fase móvil. Este proceso nos permitió diferenciar los tipos de fosfolípidos de acuerdo con la polaridad de cada uno de estos; Relativamente los lípidos no polares (como lípidos neutros, ácidos grasos y colesterol) migran a posiciones únicas en la mitad superior del cromatograma, mientras que los lípidos relativamente polares como los fosfolípidos y esfingolípidos están separados en la mitad inferior del cromatograma. Realizamos 4 cromatografías de la misma muestra de huevo porque solo de esta forma identificamos mayor variedad de fosfolípidos presentes en la yema dándose a conocer mediante la aplicación de diferentes tipos de reveladores. La prueba de molibdato presenta el mayor número de interpretaciones debido a que es una prueba general para fosfolípidos y se visualiza con manchas de color azul; podríamos decir que solo para este experimento nos bastaría aplicar solamente el revelador molibdato porque cubre todas las expectativas; sin embargo, la fosfatidil serina y la fosfatidil colina no se llegan a separar por completo, por lo que se tendrían que realizar otras pruebas para evitar confusiones. Otro punto importante a aclarar es que la mancha que representa a lípidos neutros como el colesterol no presenta el color azul característico de la prueba sino se expresa una tonalidad pálida y amarillenta. La prueba de ninhidrina es específica para fosfolípidos que presenten grupos amino y es positivo con manchas de color violeta solo para fosfatidil-serina y fosfatidil-etanol-amina. En cuanto a la prueba de Yodo, nos permitió visualizar de color café los lípidos con dobles enlaces dando positivo para lípidos neutros ( en este caso el colesterol), fosfatidiletanolamina y lecitina. La esfingomielina posee solamente un doble enlace en la primera cadena hidrocarbonada pero dio negativo para el huevo de pata, probablemente sería por la cantidad de muestra que no es suficiente para ponerlo de manifiesto, además de que sus cadenas con más largas con respecto a los demás. Finalmente, se trabajó con el revelador Bismuto, que nos permite observar fosfolípidos que presenten colina en su estructura con machas anaranjadas, y encontramos a la isolecitina y lecitina como lo esperábamos.

CONCLUSIÓN Se comparó la estructura de algunos fosfolípidos presentes en la yema de huevo y se diferenciaron entre sí por medio de diferentes reveladores. La separación de los fosfolípidos por cromatografía en capa fina y la posterior adición de los diferentes reactivos (molibdato, bismuto, yodo y ninhidrina) demuestran la composición de cada uno de los fosfolípidos que integran la yema de un huevo de guajolota, pata, gallina y codorniz (en nuestro caso solo pata y codorníz). La técnica de cromatografía en capa fina es eficiente para separar fosfolípidos, solo que los resultados no se mantienen coloridos por tanto tiempo pues se comienzan a despintar al pasar el tiempo, por lo que se debe trabajar con rapidez y para las aplicaciones se debe de tener una suma precaución de no maltratar la sílica y no hacer la aplicación extendida, pero los resultados se obtienen mucho más rápido y tienen un contraste más fuerte a diferencia de una cromatografía en papel, la cual requiere cuidados pero sus resultados son más un poco tenues y requiere de bastante tiempo para que puedan observarse. BIBLIOGRAFÍA:  Graham Solomons, T.W. Química Orgánica. Limusa Wiley, pp 1260 a 1271. (2007) Recuperado el 9 de noviembre de 2017.  Herrera C.H. “Química de Alimentos: Manual de Laboratorio”, Ed. Universidad de Costa Rica, Costa Rica pp.23-24 (2003) Recuperado el 9 de noviembre de 2017.