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• Medicina

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UNIVERSIDAD PARTICULAR DE CHICLAYO

A PRUEBA DE RPR (Reagina Plasmática Rápida)

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ALUMNA:

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DOCENTES:

Cinthia Gonzales Domínguez

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CURSO:

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CICLO:

Dra. Celinda Usquiano Marquez Dr. Edinson Morales Chavez Lic. Blga. Sonia Fiestas Purizaca Microbiología y Parasitología

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Nº DE MESA:

I.

Nº15.

VI

INTRODUCCIÓN 2

La sífilis es una enfermedad de transmisión sexual (ETS), producida por un espiroqueta, el Treponema pallidum un bacilo gramnegativo, muy delgado, móvil y de apariencia espiralada. El tamaño aproximado de la bacteria es de 10 μ por 0,2 μ; es por ello que no puede observarse con el condensador habitual del microscopio y debe recurrirse a la observación con condensador de fondo oscuro. Además, pueden utilizarse coloraciones como la inmunofluorescencia o la impregnación argéntica para poder visualizarlo. Para el diagnóstico de la sífilis, tradicionalmente, se cuenta con tres grupos de pruebas. Por examen directo mediante microscopía en campo oscuro y por fluorescencia directa, mediante serología y por cultivo en células epiteliales de conejo. Por serología se tienen dos tipos de pruebas, las pruebas no treponémicas como VDRL y RPR (Rapid plasma reagin) y las pruebas treponémicas como FTAABS (Fluorescent treponemal antibody absorption) o como MHA-TP (Microhemaglutinación para T pallidum) Las nuevas pruebas diagnósticas para la sífilis, incluyen enzimo inmunoensayo (ELISA), Western bloty Reacción en cadena a la polimerasa (PCR). Los criterios utilizados para el diagnóstico son: el área geográfica, las manifestaciones clínicas, la observación al microscopio de campo oscuro y las reacciones serológicas. Las pruebas serológicas que se utilizan son: Pruebas diagnósticas para sífilis: a. Microscopía con campo oscuro: se realiza con un microscopio con condensador de campo oscuro directamente de las lesiones (chancro o roséolas) observándose los treponemas móviles brillantes sobre un fondo negro. b. Serología: El diagnóstico de sífilis en la mayoría de los pacientes se realiza mediante pruebas serológicas de las cuales existen dos tipos principales: inespecíficas (pruebas no treponémicas) y las pruebas treponémicas (específicas). c. Pruebas no treponémicas: permiten detectar los anticuerpos inespecíficos IgG e IgM (anti-cuerpos tipo reagina), desarrollado a partir de los lípidos contra las células dañadas durante la fase temprana de la enfermedad. Ambas pruebas de floculación permiten cuantificar en el suero del paciente los anticuerpos dirigidos contra el antígeno cardiolipina, derivada de la carne de corazón. Las dos pruebas a. Pruebas No Treponémicas  Estas pruebas son usadas como procedimiento de screening.  Pueden ser cualitativas o cuantitativas.  Estas pueden dar reacciones cruzadas entre las enfermedades producidas por las diferentes especies de Treponema. A) La prueba más usada es el V.D.R.L. (Venéreal Disease Research Laboratory), que es la más sensible, pero la menos específica. B) Otra prueba es el RPR (Rapid Plasma Reagin), que es más sensible, pero menos específica que el VDRL. b. Pruebas Treponémicas  Comúnmente usadas para el diagnóstico definitivo de sífilis, descartando un VDRL falso positivo.  Entre estas se conocen: A) TPI: (Treponema pallidum Inmovilization), es la prueba estándar, pero compleja y laboriosa. B) FTA-ABS: (Fluorescent Treponema Antibody Absotion) C) Microhemaglutinación: Da resultados comparables al FTA-ABS, excepto en el estadio primario. II.

COMPETENCIAS: Al finalizar la presente práctica el alumno de medicina será capaz de:

Desarrollar una prueba macroscópica de floculación no treponémico utilizada para la detección rápida de reaginas (anticuerpos circulantes en suero) contra Treponema pallidum. III.

IV.

MATERIAL DE LABORATORIO:  MATERIALES DE LA PRÁCTICA 8  Suspensión antígeno RPR: micropartícluas de carbón.  Suero problema  Suero control positivo y negativo  Tarjetas de reacción  Baguetas y pipetas serológicas.

suspensión

carbolipina

conteniendo

FUNDAMENTOS Prueba cualitativa en microplaca (fondo plano)  Equilibrar los reactivos y muestras a temperatura ambiente  Mediante una pipeta automática depositar 50 μL de cada muestra en un pocillo distinto de la microplaca. Emplear una punta nueva para cada muestra y desecharla tras su empleo. En dos pocillos adicionales, depositar 1 gota de cada uno de los sueros control.  Dosificar 1 gota de antígeno en cada pocillo de la microplaca que contienen las muestras a ensayar.  Depositar la tarjeta en el agitador rotatorio horizontal, previamente ajustado a 200 ± 50 r.p.m., durante 20 minutos.  Observar con la ayuda de una lámpara de alta intensidad, sobre una superficie blanca, la aparición de cualquier signo de aglutinación dentro del minuto siguiente a la retirada de la microplaca del agitador Lectura  Reactivo: presencia de aglutinación visible en forma de grumos negros sobre el fondo claro que indica presencia de "reaginas" en la muestra.  No reactivo: aspecto gris homogéneo que indica ausencia de "reaginas" en la muestra. Las reacciones positivas se titulan usando solución salina 0.9% FUNDAMENTO 

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El antígeno RPR-carbon es un preparado no treponémico especialmente diseñado para la detección y semi-cuantificación por loculación macroscópica en porta o microplaca de reaginas plasmáticas, un grupo de anticuerpos dirigidos contra componentes tisulares producidos por los pacientes infectados por T. pallidum. La determinación rápida de las reaginas plasmáticas, presentes en el suero de individuos infectados con Treponema pallidum, se efectúa ensayando el antígeno –una asociación de lípidos complejos (caqrdiolipina, lecitina y colesterol) absorbidas sobre partículas de carbón frente a las muestras problema. La presencia o ausencia de una aglutinación visible es indicativa de la presencia o ausencia e reaginas plasmáticas en las muestras ensayadas favorecidas por las partículas de carbón

RESULTADOS DE PRUEBA CUALITATIVA

METODO CUANTITATIVO

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Poner 1 gota de cada dilución en la placa Añadir a cada una de esas muestras una gota de antígeno. Observar la formación de grumos y reportar hasta el título donde reaccione Se reporta reactivo hasta el título donde hay reacción

RESULTADOS DE PRUEBA CUANTITATIVA

Lectura Como en la Prueba cualitativa. El título de la muestra corresponde a la máxima dilución que presenta reactividad. La dilución siguiente debe ser negativa El título estará dado por la inversa de la última dilución que se observe reactiva.

CONCLUSIONES 

Desarrollamos una prueba macroscópica de floculación no treponémico utilizada para la detección rápida de reaginas (anticuerpos circulantes en suero) contra Treponema pallidum.

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICA:  

Medic. Reagina Plasmática Rápida (en línea). Fecha de acceso: 27 de Marzo del 2015. Disponible en: http://www.tuotromedico.com/temas/ LA PRUEBA DE RPR.htm Lab.TestsOnline. LA PRUEBA DE RPR (en línea). Fecha de acceso: 27 de Marzo del 2015. Disponible en: http://www.labtestsonline.es/tests/RPR.html?tab=3