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• MaryKanashiro

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I.

Introducción

Los carbohidratos incluyen los azucares y sustancias relacionadas, simples y complejas, naturales y sintéticas, y constituyen el tipo de compuestos más ampliamente distribuido en la naturaleza. El nombre de carbohidrato es muy antiguo y debe su origen a la observación de que muchos compuestos de esta clase, incluyendo los tres más abundantes

glucosa,sacarosaycelulosa.

La oxidación de los azucares fue concebida inicialmente como una herramienta para determinación estructural. Esta función ha sido parcialmente superada, aunque no en su totalidad, por las técnicas espectroscópicas.

La espectrofotometría de absorción

ultravioleta-visible fue uno de los primeros métodos físicos que se aplicó al análisis cuantitativo y a la determinación de estructuras, sin embargo, la escasa formación cualitativa que proporciona la espectrofotometría UV-Vis impide la resolución simultánea, de manera sencilla, de mezclas de componentes con espectros solapados.

II.

Marco teórico

Determinación de la glucosa por métodos espectroscópicos Los métodos espectroscópicos de análisis se basan en la medida de la radiación electromagnética emitida o absorbida por la materia. Los métodos de emisión utilizan la radiación emitida cuando un soluto es excitado por energía térmica, eléctrica o energía radiante. Los métodos de absorción, por el contrario, están basados en la diminución de la potencia (o atenuación) de la radiación – electromagnética como consecuencia de la absorción que se produce en su interacción con el soluto. Los métodos espectroscópicos se consideran como una de las mejores y más atizadas técnicas instrumentales a disposición del científico, para la adquisición de información tanto cuantitativa como cualitativa. Los métodos espectroscópicos se clasifican según la región del espectro electromagnético que esté implicada; siendo las más importantes las regiones de rayos x; ultravioleta, visible, infrarroja, microondas y radiofrecuencia.

Método químico: La o-toluidina se condensa inicialmente con el grupo aldehído de la glucosa para formar una mezcla en equilibrio de la glucosamina y la base de schiff correspondiente. Las reacciones que tienen lugar después de la condensación original producen una mezcla de cromógenos verdes con una longitud de onda analítica a 630nm.

III. parte experimental

Objetivos:

 

Determinar el método químico: o-toluidina a través de la espectroscopia. Determinar la curva de calibración absorbancia vs concentración de glucosa para los complejos glucosa-reactivo de antrona.

Materiales:

Tubos de ensayos

beaker

tripode

Reactivos Rejilla de metal  Ácido sulfúrico

  

Pinzas de madera

Tiourea Antrona Glucosa

Procedimiento 1. Preparar una muestra problema

Mechero bunsen

2. Llevar a una fiola con 25 ml de muestra patron adicionando 75 ml de agua destilada

3. Luego adicionar 2ml de antrona- sulfúrico y llevar a baño maria

IV.

Resultados: Las absorbancias de cada tubo de ensayo son: Primer tubo de ensayo: 3.03 Segundo tubo de ensayo: 3.17 Tercer tubo de ensayo: 3.31 Cuarto tubo de ensayo: 2.77

Quinto tubo de ensayo: 3.16  Se muestra la curva de calibración de las soluciones del complejo.  El coeficiente de absorción se obtiene a partir de la pendiente de la recta de ajuste por mínimo cuadrado.  Al calibrar el equipo la absorbancia nos dio 1 pero debió ser 0

V.

Conclusiones  Se determinó el coeficiente de absorción para complejo glucosaantrona a 620nm  A diferencia de la espectroscopia convencional, en la cual se requiere construir una curva de calibración, en un método foto acústico se requiere una solución estándar.  Los valores obtenidos son casi precisos, mostrando la conveniencia del método espectroscópico, en la cuantificación de glucosa por el método de antrona.

Interpretación:  Luego de enfriar se procedió a llevar a la oscuridad para evitar la desnaturalización por la luz.

VI.

Cuestionario

1.- DESCRIBA LOS MÉTODOS QUE SE UTILIZAN PARA DETERMINAR LA CONCENTRACIÓN DE AZUCARES EN LIQUIDO BIOLÓGICO Ej.: muestra sanguínea Método cualitativo: tiras colorimétricas La glucosa puede ensayarse cualitativamente con el uso de tiras colorimétricas. Este test usa glucosa oxidasa que cataliza la oxidación de d-glucosa a ácido gluconico con formación de h2o2. En presencia de la enzima oxidasa el h2o2 generado, oxida un cromógeno (orto-dianicidina) produciendo cambio de color, que indica la presencia de

glucosa. Este método es específico para la glucosa y la detecta cuando su concentración esta sobre rango normal. Método cuantitativo 

Método químico: o-toluidina

La o-toluidina se condensa inicialmente con el grupo aldehído de la glucosa para formar una mezcla en equilibrio de la glucosilamina y la base de schiff correspondiente las reacciones que tienen lugar después de la condensación original producen una mezcla de cromógenos verdes con una longitud de onda analítica a 63nm 

Método enzimático: trinder-100 (sigma)

El método enzimático se basa en la especificidad de la enzima glucosa oxidasa (god) por la b-d-glucosa. La enzima cataliza la oxidación de la glucosa por oxigeno molecular dando el d-gluconato y peróxido de hidrogeno (h2o2, agua oxigenada). Para detectar y cuantificar esta oxidación se ocupa una reacción acoplada.

2.- GRAFICAR LOS RESULTADOS OBTENIDOS EN LA PRÁCTICA DE DETERMINACIÓN DE LA GLUCOSA POR MÉTODOS ESPECTROSCÓPICOS.

VII.

Bibliografía

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Disponibleen:https://www.medicionespectrscopicosdelcoeficientedeabsorcion,a, 620nm,paracomplejosglucosa-reactivodeantrona. Acceso. 24 de enero 2016.

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Disponible en: https://www.metodoespectroscopicoyfotoacustico. Acceso. 24 de enero 2016.

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Disponible en: https://www.metodosparamuestradeglucosabiologicaenelorganismo. Acceso. 24 de enero 2016.