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• Leyda Melissa

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Departamento / Área Laboratorio / Bioquímica HBP

BILIRUBIN (TOTAL AND DIRECT) BILIRUBINA (TOTAL) BILIRUBINA (DIRECTA) EQUIPO KROMA PLUS double

Código: POE-BIO-012 Versión: 01 Páginas 1 de 5

1. OBJETO/PROPÓSITO Test enzimático in vitro para la determinación cuantitativa de la BILIRRUBINA TOTAL Y DIRECTA en suero y plasma humanos en los sistemas KROMA PLUS. 2. ALCANCE A todas las áreas del HOSPITAL BÁSICO PLAYAS,C.S. ANIDADO, C.S. ENGABAO. 3. RESPONSABLES 4. DEFINICIONES

5. DESARROLLO DEL PROCEDIMIENTO

Analista operador. La hiperbilirrubinemia (una elevación anormal de la bilirrubina tanto conjugada como no conjugada) en plasma es indicativa de una alteración fisiológica de la bilirrubina. Esta condición está originada por una sobreproducción de bilirrubina o por una alteración de su ciclo metabólico. El aumento de la producción de bilirrubina se origina generalmente por una destrucción rápida de los hematíes como resultado de alteraciones sanguíneas tales como la anemia hemolítica. En recién nacidos el aumento del nivel de bilirrubina puede deberse a una incompatibilidad de grupos sanguíneos (Rh, ABO u otros), sepsis, inmadurez hepática, o a diversos defectos hereditarios ligados a la conjugación de la bilirrubina. La alteración del metabolismo de la bilirrubina está causada por una deficiencia enzimática o por una obstrucción física en el conducto biliar. La hiperbilirrubinemia ocasiona kernicterus (deposición de bilirrubina libre en el cerebro y células nerviosas) o ictericia (pigmentación de membranas, mucosas, esclera y piel, causada por la deposición de pigmento bilirrubínico). Principio del test El ácido sulfanílico diazotado transforma la bilirrubina en azobilirrubina coloreada que se determina fotométricamente. De las dos fracciones de bilirrubina presentes en suero, glucuronato de bilirrubina y bilirrubina libre asociada a albúmina, sólo reacciona directamente la primera, mientras que la bilirrubina libre precisa ser disociada de la proteína por un acelerador para que reaccione. La bilirrubina indirecta se calcula por diferencia entre la bilirrubina total (con acelerador) y la directa (sin acelerador). Los conceptos «directa»e«indirecta» serefieren exclusivamente a las características de reacción en presencia o ausencia de aceleradores o solubilizantes y equivalen sólo de forma aproximada a las dos fracciones de bilirrubina citadas.

Limite detección (Bilirrubina Directa): 0,09mg/dL Limite detección (Bilirrubina Total) :0,03 mg/dL Linealidad: Hasta 20 mg/dL

Sensibilidad(Bilirrubina Directa):0,171 A / mg/dL Sensibilidad (Bilirrubina Total) :0,073 A / mg/dL Correlación(Bilirrubina Total): Este ensayo (y) fue comparado con un método comercial similar (x). Los resultados fueron los siguientes: N = 52 r = 0,96 y = 0,99x + 0,113 Las características analíticas han sido generadas usando un instrumento automático. Los resultados pueden variar según el instrumento utilizado. Obtención y preparación de las muestras Emplear únicamente tubos o recipientes adecuados para recoger y preparar las muestras. Sólo se han analizado y encontrado aptas las muestras aquí mencionadas. Suero. Plasma tratado con heparina de litio Los diferentes tipos de muestra fueron analizados en tubos de recogida de muestras seleccionados, comercialmente disponibles en aquel momento, lo cual significa que no fueron analizados todos los tubos de todos los fabricantes. Los sistemas de recogida de muestras de diversos fabricantes pueden contener diferentes materiales que en ciertos casos pueden llegar a afectar los resultados de los análisis. Si las muestras se procesan en tubos primarios (sistemas de recogida de muestras), seguir las instrucciones del fabricante de los tubos. Centrifugar las muestras que contienen precipitado antes de efectuar el test. Estabilidad: 1 semana a 15-25 °C 1 semana a 2-8 °C 1 año a (-15)-(-25) °C

Reactivos - Soluciones de trabajo RT Acido sulfanílico 29 mmol/L, ácido clorhídrico 0,24 mol/L, Duposol® 3% (p/v). RD Acido sulfanílico 29 mmol/L, ácido clorhídrico 0,24 mol/L RN Nitrito sódico 11,6 mmol/L. Kit auxiliar: CAL Calibrador de Bilirrubina.REF.1912005 Bilirrubina liofilizada en matriz proteica. El valor de concentración es trazable al Material de Referencia Certificado 916a. La concentración de Bilirrubina T y D indicada en la etiqueta es específica del lote. Los valores se han obtenido con reactivos LINEAR en un Cobas Mira. Material suministrado Consultar la sección “Reactivos - Soluciones de trabajo”. Material requerido (no suministrado) Consulte la sección “Información de pedido”. Equipo usual de laboratorio. Ejecución del test Para un funcionamiento óptimo del test, observar las instrucciones de la presente metódica referentes al analizador empleado. Consultar el manual del operador del analizador en cuanto a las instrucciones específicas de ensayo. Aplicación para suero y plasma Definición del test en el analizador KROMA PLUS Tipo de medición colorimétrico Tiempo de reacción/ Puntos de medición 10/15-22 (STAT 5/15-22) Longitud de onda (sub/princ) 700/570 nm Dirección de reacción Incremento Unidades U/L (μkat/L) Pipeteo de reactivo Diluyente (H2O) R1 80 μL 20 μL R2 48 μL – Volúmenes de muestra Muestra Dilución de muestra Muestra Diluyente (NaCl) Normal 2 μL – – Disminuido 2 μL 15 ul 135 ul Aumentado 4 μL – –

Medidas de precaución y advertencias Para el uso diagnóstico in vitro. Observar las medidas de precaución usuales para la manipulación de reactivos. Ficha de datos de seguridad a la disposición del usuario profesional que la solicite. Eliminar los residuos según las normas locales vigentes.

Preparación de los reactivos Reactivos de trabajo. Mezclar 1 mL RN + 4 mL RT(Total) ó 1 mL RN+ 4 mL RD(Directa). Estable durante 8 días a 2-8ºC. Calibrador. Reconstituir el vial añadiendo exactamente 1,0 mL de agua destilada. Mezclar y dejar reposar 5-0 minutos. Estabilidad de la bilirrubina protegida de la luz es de: 8 horas 16-25ºC, 2 días 2-8ºC y 28 días –20ºC, congelada una vez. Conservación y estabilidad Conservar a la temperatura indicada en la etiqueta. Todos los componentes del kit son estables hasta la fecha de caducidad indicada en la etiqueta. Mantener los frascos cerrados, protegidos de la luz y evitar la contaminación durante su uso. Descartar si se observan signos de deterioro: Presencia de partículas y turbidez. Absorbancia del Blanco (A) a 540 nm>0,050 encubeta de 1 cm. El reactivo RN si desarrolla una coloración amarilla. Instrucciones. 1. Iniciación del sistema 2. Proceso de calentamiento del sistema . 3. Mantenimiento diario. 4. Programación de lista de trabajo (muestras, estandares, controles) 5. Chequeo de los reactivos presentes. 6. Colocar los tubos o copas de muestra. 7. Leer códigos de barra por medio del sistema liss. 8. Mostrar lista de trabajo. 9. Guardar lista de trabajo. 10. Confirmación de la sección de trabajo (modo aleatorio o por lote). 11. Ejecución de la sesión de trabajo. 12. Fin de la sesión de trabajo. 13. Ver todos los resultados. 14. Guardar todos los resultados. Cálculo A Muestra - A Blanco muestra XC Cal=mg/dL bilirrubina total / directa ACal

Muestras con concentraciones superiores a 20 mg/dL deben diluirse 1:2 con solución salina y repetir el ensayo. Multiplicar los resultados por 2. Para expresar los resultados en unidades SI aplicar: mg/dL x 17,1 = μmol/L

Interferencias Lipemia (intralipid