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Universidad Nacional Autónoma de México. Facultad de Estudios Superiores Zaragoza.

Química Farmacéutica Biológica. LABORATORIO DE BIOQUÍMICA CELULAR DE LOS TEJIDOS II. Grupo: 1551. Equipo: 7.

INTEGRANTES

FIRMA

Benítez García Gabriela Sugey. Estrella Arguijo Ana Victoria. Reyes Cortés Héctor Jonathan.

Informe de la práctica:

CATABOLISMO DE LA HEMOGLOBINA.

Fecha de entrega: jueves 6 de octubre de 2016.

CATABOLISMO DE LA HEMOGLOBINA 

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OBJETIVO: 1. Analizar el metabolismo de la bilirrubina. 2. Cuantificar la bilirrubina total y la bilirrubina directa. 3. Relacionar la importancia de cada uno de los pigmentos en el estudio de la función hepática. RESUMEN:

Se extrajo una muestra de sangre en un tubo con tapa roja (sin anticoagulante). Se llevó a la centrífuga durante 5 minutos a 3000xRPM y se trabajó con el plasma sanguíneo. Se utilizaron tres tubos de ensaye, marcados con; B (blanco), D (directa) y T (total). Después de cinco minutos, se leyeron las muestras de los tubos de bilirrubina total y directa. Las absorbancias obtenidas se multiplicaron por un factor y se discutieron los valores obtenidos comprándolos con los valores de referencia. 

INTRODUCCIÓN:

El hígado es el segundo órgano más grande del cuerpo humano después de la piel, y es el mayor órgano interno. La verdosa vesícula biliar y sus vías están exactamente debajo del lado derecho del hígado. Las tareas del hígado son numerosas: -

-

Convierte el azúcar glucosa en glicógeno y la almacena hasta que el organismo la necesita. También almacena vitaminas, hierro y minerales, hasta que el cuerpo los necesite. Las células hepáticas producen proteínas y lípidos o sustancias grasas que son los triglicéridos, el colesterol y las lipoproteínas. El hígado produce ácidos biliares que descomponen la grasa de los alimentos. Estos ácidos biliares se necesitan para que el organismo absorba las vitaminas A, D y E, todas las cuales se encuentran en la grasa. Elimina químicos, alcohol, toxinas y medicamentos del torrente sanguíneo y los envía a los riñones como urea para ser excretados como orina o a los intestinos para ser eliminados como defecación.

La hemoglobina es una proteína de la sangre de color rojo, que transporta el oxígeno y el CO2a los tejidos, participa en la regulación de pH de la sangre. Posee un grupo hemo. DEGRADACION DE LA HEMOGLOBINA. Ocurre cuando el eritrocito alcanza su tiempo límite de vida (120 días), la membrana celular, se vuelve débil y se rompe por lo cual toda la hemoglobina que es liberada es fagocitada por algunos de los macrófagos tisulares, como el de la medula ósea, el bazo y el hígado. Se separa la molécula globina y la molécula hemo, la molécula globina se transforma en aminoácidos que posteriormente seránreutilizados para la producción de proteínas y el grupo hemo, es oxidado por la hemooxigenasa, abriéndose el anillo tetra pirrólico y se genera una molécula lineal con cuatro anillos pirrólicos

denominado biliverdina, el hierro se oxida de (Fe2+ a Fe3+) que se une a la transferrina para poder ser transportado a la médula ósea, donde formará parte de las reservas de hierro del organismo (ferritina). La biliverdina con ayuda de la enzima biliverdina reductasa se reduce para formar bilirrubina. La bilirrubina viaja unida a la albúmina sérica (proteína transportadora) desde el torrente sanguíneo hasta llegar al hígado, donde se separa y es secretada por la bilis (por eso el color amarillo-verdoso de la bilis). La bilis es denominada como el líquido amarillo verdoso de sabor amargo proveniente del hígado la cual puede ser producida por el hígado de muchos vertebrados y puede contener sales biliares, hormonas, proteínas y colesterol que forman el 3% del contenido y en cambio el agua es la que forma un 97% del contenido en la bilis. La transformación de los anillos pirrólicos del grupo hemo en bilirrubina implica una serie de transformaciones bioquímicas absolutamente esenciales para su excreción. Aproximadamente el 80% de la bilirrubina proviene de la destrucción diaria de los glóbulos rojos, el otro 20% proviene de una eritropoyesis inefectiva de la médula ósea. Una vez sintetizada, la bilirrubina debe ser excretada, proceso que involucra varios pasos. 1) Transporte de la bilirrubina: La bilirrubina, denominada también bilirrubina no conjugada o indirecta, circula en el plasma unida a la albúmina. Normalmente en estas condiciones no atraviesa la barrera hematoencefálica. Puede aparecer bilirrubina no conjugada libre (no unida a la albúmina) en condiciones en que la cantidad de bilirrubina supera la capacidad de unión de la albúmina. 2) Captación de la bilirrubina por las células del parénquima hepático:La bilirrubina circulante es captada por receptores específicos del polo sinusoidal del hepatocito. El hepatocito toma la bilirrubina y la une a proteínas (ligandinas) para ser transportada al retículo endoplasmático. 3) Conjugación de la bilirrubina en el retículo endoplasmático liso: La conjugación es el proceso en el cual se aumenta la solubilidad en agua o polaridad de la bilirrubina. Principalmente (80%) se conjuga con ácido glucurónico formándose monoglucorónido de bilirrubina por acción de la enzima UDP- glucuronil transferasa. En baja proporción se forma sulfato de bilirrubina (20%). Se obtiene así la llamada bilirrubina conjugada o directa que se caracteriza por ser soluble en agua y no difundir a través de las membranas celulares. Bajo condiciones fisiológicas toda la bilirrubina secretada en la bilis se encuentra conjugada. 4) Excreción y re-absorción de la bilirrubina: La bilirrubina directa tomada por los lisosomas y el aparato de Golgi es sacada activamente hacia los canalículos biliares, de los canalículos a la vesícula biliar y luego al intestino delgado. Por acción de las bacterias intestinales, se transforma en urobilinógeno y se elimina por heces como estercobilinógeno. La bilirrubina conjugada que llega al duodeno es en parte reabsorbida en la mucosa intestinal. Por circulación enterohepática, la mayor parte (90%) vuelve al hígado y reinicia el circuito hacia al intestino. El 10% se excreta por orina ya que llega al riñón por la circulación general y filtra a través del glomérulo renal. 

MATERIAL: - Tuvo para extracción sanguínea con tapón rojo. (Sin anticoagulante) - Sistema de extracción sanguínea. - Ligadura - Algodón

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Pipetas graduadas de 1mL (0.1 en 0.1) Pipeta graduada de 5mL. Una gradilla. Una parrilla de calentamiento. Un vaso de precipitados de 250mL. Un soporte universal. Unas pinzas de doble presión. Un termómetro.

REACTIVOS: -

Alcohol Hipoclorito de sodio Kit de reactivos para bilirrubinas: 1. Reactivo A. 2. Reactivo B. 3. Diazoreactivo.

EQUIPO: 

Espectrofotómetro.

METODOLOGÍA.

Se realizó una toma de muestra sanguínea utilizando un tubo para extracción sanguínea tapón color rojo. Una vez obtenida la muestra sanguínea el tubo se centrifugo a 3500 durante 5 minutos. Posteriormente se trabajo únicamente con el suero. - TECNICA PARA SUERO. En tres tubos de ensayo previamente marcados cada uno como: B (Blanco), D (Directa) y T(Total) se colocaron los reactivos conforme se indica en la siguiente tabla.

Tubo Muestra (suero) Agua destilada Reactivo A Reactivo B Diazoreactivo

B 0.2mL 2.5mL --0.2mL ---

D 0.2mL 2.5mL ----0.2mL

T 0.2mL --2.5mL --0.2mL

Una vez terminada la adición de cada una de las sustancias, correspondientemente a cada tubo. Se prosiguió a mezclar de inmediato cada tubo por inversión y se mantuvieron en incubación 5 minutos (a baño maría). Pasando los 5 minutos se leyó las absorbancias del blanco, directa y total en el espectrofotómetro a 530nm, se ajustó a cero con agua destilada. 

RESULTADOS.

Cuadro de resultados grupal.

Equipo 1 2 3 4 5 6 7 8

Bilirrubina Total mg/dL 0.599 0.8181 0.10908 0.06363 0.4545 0.17271 0.3363 0.6726

Bilirrubina Conjugada mg/dL 0.31 0.0545 0.01818 0.009 0.08181 0.06363 0.199 0.3908

Bilirrubina no Conjugada mg/dL 0.28 0.7635 0.0909 0.05463 0.37269 0.10908 0.1373 0.2818

Valores de referencia:

Bilirrubina Total

Bilirrubina Conjugada

Bilirrubina no Conjugada

0.3-1 mg/dL

0.1-0.25mg/dL

0.2-0.8mg/dL

Resultados del equipo:



Equipo 7

Fecha de análisis: jueves 29 de octubre del 2016. Nombre del paciente:Gabriela Sugey Benítez García. Sexo: Femenino. Edad: 21 años.



Absorbancia a 530nm para Bilirrubina Total

0.037

Absorbancia a 530nm para Bilirrubina Conjugada

0.022

Bilirrubina Total

Bilirrubina Conjugada

Bilirrubina No Conjugada

0.3363mg/dL

0.199mg/dL

0.1373mg/dL

CÁLCULOS DE LA CONCENTRACIÓN. 9.08𝑚𝑔 𝐵𝑖𝑙𝑖𝑟𝑟𝑢𝑏𝑖𝑛𝑎 𝑇𝑜𝑡𝑎𝑙 = (0.037) ( ) = 0.3363 𝑚𝑔/𝑑𝐿 𝑑𝐿

𝐵𝑖𝑙𝑖𝑟𝑟𝑢𝑏𝑖𝑛𝑎 𝐶𝑜𝑛𝑗𝑢𝑔𝑎𝑑𝑎 = (0.022) (

9.08𝑚𝑔 ) = 0.199 𝑚𝑔/𝑑𝐿 𝑑𝐿

𝐵𝑇 = 𝐵𝐶 + 𝐵𝑁𝐶 𝐵𝑁𝐶 = 𝐵𝑇 − 𝐵𝐶

𝐵𝑖𝑙𝑖𝑟𝑟𝑢𝑏𝑖𝑛𝑎 𝑁𝑜 𝐶𝑜𝑛𝑗𝑢𝑔𝑎𝑑𝑎 = (0.3363



𝑚𝑔 0.199𝑚𝑔 )− ( ) = 0.1373 𝑚𝑔/𝑑𝐿 𝑑𝐿 𝑑𝐿

ANÁLISIS DE RESULTADOS.

Un análisis de bilirrubina en la sangre permite obtener un recuento preciso de los tres niveles de bilirrubina en la sangre: bilirrubina conjugada, no conjugada y total. Los resultados obtenidos sobre la concentración de Bilirrubina Total es de 0.3363mg/dL, los valores normales de bilirrubina directa se sitúan entre 0.3 a 1 mg/dL, resultado el cual se encuentra dentro del rango normal de referencia, al igual que para bilirrubina conjugada, se obtuvo un valor de 0.199mg/dL y los valores normales de bilirrubina conjugada van de 0.1 a 0.25mg/dL, lo cual también se encuentra dentro del rango en base a los valores de referencia.

Se debe tener en cuenta que valores por encima de 2.5 mg/dL., puede dar origen a ictericia, que consiste en la coloración amarillenta tanto de la piel como de la esclerótica del ojo.El aumento de la bilirrubina sérica puede ocurrir por sobreproducción, disminución de captación hepática, disminución en la conjugación y disminución en la excreción de la bilis (intra o extrahepática). En estos valores puede haber ciertas diferencias por la técnica o por criterios de normalidad propios de laboratorios concretos, a veces en el rango de valores y otras veces por las unidades a las que se hace referencia, el factor de dilución, así como tomar en cuenta si la muestra es de suero, plasma o líquido amniótico. 

CONCLUSIONES.

Analizamos el metabolismo de la bilirrubina para evaluar problemas o alteraciones del hígado y vesícula biliar. La paciente no muestra anomalías en la degradación de hemoglobina. Los valores de bilirrubina total y directa se encontraron dentro de los valores de referencia. Se puede denotar, que se está llevando una buena degradación de hemoglobina. Los buenos resultados indican un buen manejo y control de tiempo sobre la muestra, al momento de medir la absorbancia.  CUESTIONARIO. 1) ¿Qué diferencia hay entre la bilirrubina conjugada y no conjugada? -Cuando la bilirrubina se une a la glucosa se la denomina bilirrubina directa o bilirrubina conjugada, mientras que a la bilirrubina sin glucosa se la conoce como bilirrubina indirecta o bilirrubina no conjugada. La bilirrubina de la sangre en conjunto se conoce como bilirrubina total. La bilirrubina es poco soluble en agua, por lo que circula unida a albúmina en el plasma Bilirrubina no conjugada (Indirecta). La bilirrubina es un compuesto potencialmente tóxico. En el hígado la bilirrubina es conjugada con ácido glucurónico. Este paso origina la llamada Bilirrubina conjugada (Directa), que es soluble, no tóxica y que se excreta fácilmente a través de la bilis. 2) Elabore una tabla en la que incluya la clasificación de las ictericias, las causas y cómo se encuentran las bilirrubinas en la sangre y en la orina. Tipo de ictericia

Definición

Ictericia pre-hepática.

Ictericia hepática.

Ictericia post-hepática

Se presenta cuando demasiados glóbulos rojos están muriendo o cuando el reemplazo de los glóbulos rojos viejos por otros nuevos se desequilibra, la bilirrubina se produce en cantidades excesivas y el hígado no puede funcionar con la mayor eficacia. Como resultado, la bilirrubina permanece en el torrente sanguíneo y provoca la ictericia. La ictericia pre-hepática a menudo es causada por trastornos genéticos como la anemia de células falciformes, enfermedades parasitarias como la malaria, o la ingesta de ciertos medicamentos. También se conoce como ictericia hemolítica. Las células del hígado se deterioran o el hígado está experimentando una inflamación que afecta la forma en que funciona. El hígado entonces no puede procesar la bilirrubina, que aumenta en número y los resultados en la ictericia. Entre los tipos de ictericia, la hepática es más probable que sea causada por la hepatitis, junto con ingesta excesiva de alcohol y ciertos medicamentos. En algunos casos, la ictericia hepática también puede ser un resultado de la cirrosis, en la que el hígado tiene una cicatrización interna que puede inhibir su función. Se debe a la obstrucción del colédoco (colestasis), ya sea por un cálculo a nivel de la vesícula biliar o incluso por la compresión originada por un cáncer de cabeza de páncreas. La bilirrubina se procesa realmente adecuadamente por el hígado y se convierte en soluble, pero no puede viajar a través de los intestinos debido a un bloqueo. Como resultado, la bilirrubina persiste en el hígado y no puede ser excretado. Los bloqueos se suelen atribuir a los cálculos biliares, a veces para los quistes o tumores localizados en el hígado y también con el embarazo. Este tipo de ictericia puede determinar específicamente a través de análisis de sangre y la obtención de orina y de heces muestras del paciente. Por ejemplo, un paciente con ictericia pre-hepática tendrá resultados sanguíneos anormales y heces de color oscuro, los altos niveles de las enzimas hepáticas se encuentran en pacientes con ictericia hepática, mientras que una ictericia post-hepática se caracteriza por la orina oscura. También se conoce como ictericia obstructiva.

Ictericia neonatal.

Cuando los bebés nacen, sus hígados no se utilizan para romper un subproducto de los glóbulos rojos, llamado bilirrubina. Puede tomar algunas semanas o incluso unos pocos meses para que el hígado sea lo suficientemente maduro como para descomponer la bilirrubina correctamente, pero mientras tanto, la bilirrubina libre crea coloración amarillenta de la piel y, a menudo el blanco de los ojos. A menudo es más evidente en un primer momento, y puede ocurrir en cualquier momento desde justo después del nacimiento hasta aproximadamente una semana después de que el bebé ha nacido. También puede observar el color amarillento si se presiona hacia abajo sobre la piel de los bebés durante unos segundos. Si la piel sigue siendo amarilla, por ejemplo, en la frente o en la nariz del bebé, puede tener ictericia.

3) ¿Qué es la acolia y a qué se debe? -Ocurre cuando hay una obstrucción completa de la vía biliar o una falla de la excreción hepática muy marcada de la bilirrubina, ésta no llega al intestino y no produce la pigmentación color café de las deposiciones normales, se da la presencia de deposiciones blanquecinas. 4) Explique brevemente qué es el kernicterus. -El término "kernicterus" se refiere a la tinción amarilla causada por la bilirrubina. Esto se observa en partes del cerebro en una autopsia. Esta afección normalmente se desarrolla en la primera semana de vida, pero puede observarse hasta la tercera semana. Algunos recién nacidos con enfermedad hemolítica del Rh están en alto riesgo de presentar ictericia grave que puede conducir a esta afección. En raras ocasiones, la EB se puede desarrollar en bebés aparentemente saludables. 5) ¿Cuál es el tratamiento de la ictericia neonatal y por qué? Fototerapia (tratamiento mediante el uso de luz). El término “fototerapia” significa “tratamiento mediante el uso de luz”. Un médico o una enfermera desvestirán al bebé, le protegerán los ojos y lo expondrán a una luz especial. La piel y la sangre de su bebé absorben las ondas luminosas. La luz convierte la bilirrubina a su forma soluble en agua y de este modo el cuerpo puede eliminarla con mayor facilidad. Existe también un producto llamado “BiliBlanket”. Es otra manera de tratar la ictericia del bebé mediante la luz. La manta (blanket) es una almohadilla plana con una cubierta, que se coloca alrededor del bebé. Está conectada a una máquina especial por medio de una larga manguera gris. Esta máquina hace que la almohadilla emita luz.

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BIBLIOGRAFÍA.

 Informe de PKID sobre la hepatitis pediátrica. El hígado. Evaluación de la silenciosa evolución de la enfermedad hepática. Consultado el: 04 de octubre del 2016. Disponible en: http://www.pkids.org/files/pdf/Spa_phrliv.pdf  Ictericias. Pdf. Metabolismo de la bilirrubina. Consultado el 04 de octubre del 2016. Disponible en: http://fhu.unse.edu.ar/carreras/obs/anatomo/metabili.pdf  Healthline. Análisis de bilirrubina en la sangre. Consultado el 05 de octubre del 2016. Disponible en: http://es.healthline.com/health/analisis-de-bilirrubina-en-la-sangre#Riesgos5  Tuotromedico.com. Bilirrubina. Consultado el: 05 de octubre del 2016. Disponible en: http://www.tuotromedico.com/temas/bilirrubina.htm