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• Jose Luis Patiño Zárate

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1. MARCO TEORICO Nombre científico: Piper nigrum Nombre común: pimentero, pimienta negra, árbol de la pimienta. Familia: Piperaceae Origen: es de la originaria de Colombia La pimienta es un producto que pertenece al grupo de las especies que son plantas que poseen propiedades aromáticas, medicinales y culinarias. La pimienta ha sido cultivada desde la antigüedad, originalmente en la India. Este fruto lo puedes conseguir siempre ya que no tiene un época especial al año, La pimienta negra es una de las cosas que más se comercian en el mundo, esta especie tiene muchos beneficios para nuestra salud.1 Beneficios de la pimienta negra Pérdida de peso La pimienta negra tiene una corteza la cual es muy buena para eliminar las células grasas, entonces si la consumís frecuentemente lograras mantener un muy buen peso corporal. 1 Estómago Una de las propiedades de la pimienta negra es que aumenta las secreciones de nuestro estomago, esto ayuda a nuestra digestión, ya que al digerir bien los alimentos evitas cólicos, constipados y hasta diarreas, también esta especie nos ayuda a prevenir los gases intestinales, si consume pimienta negra también vas a favorecer a la orina y a tu transpiración. 1 Piel Ayuda a sanar el vitíligo, la cual es una enfermedad que causa despigmentación en algunas partes de nuestra piel. Ya que según los estudios dicen que la piperina que tiene este tipo de pimienta, incrementa la producción de pigmentos en nuestra piel. 1 Catarros y gripes Otra de las propiedades de la pimienta negra es que se puede agregar en algunos tónicos, para hacer frente a gripes y a catarros, ya que calma la sinusitis y las congestiones nasales. 1 Propiedades antibacterianas La pimienta negra también posee propiedades antibacterianas, y esto es muy bueno para enfrentar infecciones, como así también picaduras de insectos, etc. Al consumir frecuentemente la pimienta hacer que limpies las arterias de tu cuerpo. 1 Antioxidante Posee antioxidantes que se encargan de reparar y prevenir daños que fueron causados por los radicales libres, esto hace que prevenga el cáncer, algunos problemas en el hígado y enfermedades cardiovasculares.1 Biodisponibilidad Otro de los beneficios de la pimienta es que se encarga de transmitir, los beneficios que poseen otras hierbas a diferentes partes de nuestro cuerpo. 1

Otros usos También se usan mucho para combatir problemas respiratorios, tales así como el asma, la tos aguda, etc. También es buena contra las caries también calma los dolores de muela, hace un tiempo también era usado para curar algunos problemas en los ojos. La pimienta negra además de ser buena para condimentar los alimentos es muy buena para fortalecer nuestro organismo para hacer frente a ciertas amenazas o trastornos, así que nosotros te recomendamos que siempre acudas a ella en cualquier tipo de enfermedad y la incorpores en tu dieta.1 2. MATERIALES Y METODOS 1. METODOS DE EXTRACCION DE SUSTANCIAS NATURALES -

Recipiente de vidrio o acero inoxidable con tapa. Papel de filtración mediana. Recipiente de color ámbar. Balanza técnica. Droga. Menstruo seleccionado.

2. METODOS FISICO QUIMICOS APLICADOS AL ANALISIS DE EXTRACTOS Y TINTURAS

Materiales y reactivos (Determinación de la densidad relativa).  Picnómetro de al menos 10 mL de capacidad.  Balanza analítica vD 0,1 mg LSP 200g.  Materiales y reactivos (Determinación del índice de refracción).  Refractómetro de Abbe.  Varilla de vidrio.  Solución mezcla de alcohol etílico-éter dietílico (1:1) para la limpieza del equipo.  Materiales y reactivos (Determinación del pH de extractos y tinturas).  Medidor del pH con electrodo de vidrio combinado.  Solución reguladora de pH, para rango de 0-7, preparada de la siguiente forma: 2,5g de bitartrato de potasio para 250 mL de agua (pH=3,5).  Materiales y reactivos (Determinación de los sólidos totales).  Capsula de porcelana, platino o cristal.  Baño de agua.  Balanza analítica de LSP 220 g y vD 0.1 mg.  Desecadora conteniendo silica gel.  Estufa con temperatura controlada (105 ± 2°).  Pipeta aforada de 5 mL.  Materiales y reactivos (Análisis Capilar).  Beaker Pyrex de 100 mL de aproximadamente 5 cm de diámetro 70 cm de alto.  Bandas de papel de filtro de 4 cm x 20 cm.

  

Cámara Probeta o copa Lámpara de luz

3. MÉTODOS PARA

EL

EXTRACTOS

    

MATERIAL 1 Reverbero 20 Tubos de Ensayo 1 Gradilla 2 Vasos de Precipitación de 500mL 2 Pipetas de 5mL REACTIVOS

             

Reactivo de Sudan Reactivo de dragendorf Reactivo de Mayer Reactivo de Wagner Reactivo de Baljet Reactivo de Lieberman Buchard Reactivo para Catequinas Reactivo para resinas Reactivo de Fehling Reactivo de FeCl3 Reactivo de Ninhidrina Reactivo de Borntrager Reactivo de Shinoda Reactivo de Antocianidinas

protectora de la luz. graduada de 25 mL. UV de 366 nm. CUALITATIVOS ANÁLISIS

DE

Pipeta de 1,5 y 10 ml

Balón aforado

Vaso de precipitación

Pizeta

Soporte y pinza para bureta

Bureta de 25 ml

4. DETERMINACIÓN COLORIMÉTRICA DE COMPUESTOS FENÓLICOS EN AGUA MEDIANTE EL REACTIVO DE FOLIN-CIOCALTEU

ReactivoFolin-Ciocalteu

Reactivo Carbonato tartrato

5. DETERMINACIÓN DE FLAVONOIDES MATERIALES

Erlenmeyer 500 mL

Malla Metálica

Capilares de Vidrio

Tubos de Ensayo

Varilla de Vidrio Reverbero

Papel Filtro

Vaso de Precipitación

Embudo

Pipeta 1mL

Pipeta 10 mL

Pipetas Pasteur

REACTIVOS

Etanol

Ácido Sulfúrico

Ácido Clorhídrico

Reactivo de Fheling

Acetona-etanol Cloruro Férrico

Mg Metálico

Ácido Clorhídrico 5 %

METODOLOGÍA: 1. MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE SUSTANCIAS NATURALES 

Obtención de tinturas por maceración

Secar la planta

Tritutar la planta

En un recipiente de vidrio colocar 20 g de la planta

Verter 100 ml de alcohol potable al 96% y tapar.

Dejar reposar de 24 a 48 horas agitando 15 min dos veces al día.

Filtrar en recipiente ambar

2. MÉTODOS FÍSICO-QUÍMICOS APLICADOS AL ANÁLISIS DE EXTRACTOS Y TINTURAS. 

Determinación de los requisitos organolépticos Determinacion de olor

Determinación de color

Medir una tira de papel de 1x10 cm

En un tubo de ensayo limpio, llenar las 3/4 con el extracto.

Introducir un extremo en la muestra

Observar el color, transparencia, partículas, separacion.

Oler y determinar si corresponde al producto.



Determinación de la densidad relativa

Pesar el picnómetro vacío y seco.



Llenar el picnómetro con agua destilada

Ajustar el líquido al nivel empleado

Repetir la operación con el extracto, después de limpio el pignómetro.

Pesar cuidadosamente el picnómetro con el agua destilada

Determinación del índice de refracción.

Colocar sobre el prisma de medición una gota de agua destilada con una varilla.

Ajustar el equipo seleccionando la zona del espectro visible en la línea límite del campo visual.

Colocar una gota de la muestra sobre el prisma de medición

Realizar tres lecturas y calcular el promedio

Enfocar la luz por medio del espejo

Cerrar el termoprisma



Determinación del pH de extractos y tinturas.

Ajustar el equipo con la solución reguladora de pH



Introducir el pHmetro a la muestra

Esperar a que se estabilice el pHmetro

Repetir varias veces la operación para estimar el resultado.

Determinar el pH de la muestra.

Determinación de los sólidos totales

Tarar una capsula

Colocar 5 ml de la muestra en la capsula

Evaporar sobre baño maria hasta que esté seco.

Colocar en la desecadora hasta que alcance la temperatura ambiente.

Para obetener masa constante entre una pesada y otra se mantendrá un tiempo de secado de 60 minutos.

Poner en estufa hasta peso constante luego retirar



Análisis capilar.

Verter 5 ml de la muestra en un frasco con tapa.

Proceder a la inspeccion visual y caracterización.

Cortar un pedazo de papel filtro y amarrar con hilo

Introducir vertivalmente el papel filtro en el frasco

Retirar el papel y dejar secar

Cerrar el frasco y dejar transcurrir el tiempo hasta que suba la muestra por capilaridad.

3. MÉTODOS CUALITATIVOS PARA EL ANÁLISIS DE EXTRACTOS ENSAYO DE SUDAN

A la alicuota de la fraccion en el solvente de extracción Calentar en se baño le añade de agua 1mLhasta de una solución evaporación diluida en agua del solvente del colorante Sudán III o IV

ENSAYO DE DRAGENDORF

E

Tomar 1mL del extracto y evaporar a baño de agua

Redisolver el residuo con 1mL de HCl al 1%

Añadir 3 gotas dek reactivo de Dragendorf

Es positivo si existe opalescencia, turbidez definida o precipitado

NSAYO DE MAYER

Proceder Añadir una de la pizca misma de NaCl formaen anteriormente polvo, agitar y Es positivo sihasta hay opalescencia, turbidez citada filtrar solución ácida Añadir 2 a 3 gotas de reactivo de Mayer definida o precipitado coposo

ENSAYO DE WAGNER

Se procede de la misma forma hasta solución acida, se añade 2-3 gotas de reactivo clasificando los resultados de la misma forma

ENSAYO DE BALJET

Tomar 1mL del extracto y evaporar a baño de agua

Redisolver el residuo con 1mL alcohol

Añadir 1 mL de reactivo

Es positivo si existe aparición de coloración o precipitado rojo

ENSAYO DE BORNTRAGUER

Evaporar el solvente en baño de agua y redisolver el residuo con 1mL de cloroformo

Si la fase acuosa alcalina (superior) se colorea de rosa o rojo es positivo

ENSAYO DE LIEBERMAN-BURCHARD

Adicionar 1mL de NaOH, KOH o amonio al

Agitar mezclando las fases y se deja en reposo hasta su ulterior separación

Redisolver el residuo con 1mL de Evaporar extracto en baño de azul, agua Positivo si1mL hay de una coloración rosado cloroformo Adicionar 1mL de anhídrido acético verde intenso o verde oscuro

ENSAYO DE CATEQUINAS

Tomar 1 gota de la solución alcohólica

Colocar con un capilar en un papel filtro

ENSAYO DE FEHLING

Sobre la mancha aplicar solucion de carbonato de sodio

Es positivo si se presenta una mancha verde carmelita a la luz UV

Evaporar el solvente en baño de agua y redisolver el residuo en 1-2 mL de agua

Adicionar 2mL de reactivo y calentar en baño de agua 5-10 minutos

El ensayo es positivo si la solución se colorea roja o aparece precipitado rojo

ENSAYO DE ESPUMA

Es positivo si aparece espuma en la Disolver la alícuota alcohólica con 5 superficie del líquido de más de veces su volumen de agua y mezclar 2mm de altura y persiste por más de agitando 5-10 minutos 2 minutos

ENSAYO DE RESINAS

Para detectar este tipo de compuesto, adicione a 2 mL de la solución alcohólica, 10 mL de agua destilada. La aparición de un precipitado, indica un ensayo positivo

ENSAYO DE ESPUMA

Si la alícuota se encuentra en alcohol, se diluye con 5 veces su volumen en agua y se agita la mezcla fuertemente durante 5-10 minutos.

El ensayo se considera positivo si aparece espuma en la superficie del líquido de más de 2 mm de altura y persistente por más de 2 minutos

ENSAYO DE CLORURO FERRICO

A una alícuota del extracto alcohólico se le adicionan 3 gotas de una solución de tricloruro férrico al 5 % en solución salina fisiológica (cloruro de sodio al 0.9 % en agua). Si el extracto es acuoso, el ensayo determina fundamentalmente taninos. A una alícuota del extracto se añade acetato de sodio para neutralizar y tres gotas de una solución de tricloruro férrico al 5 % en solución salina fisiológica.

Es positivo si hay desarrollo de una coloración rojo-vino, compuestos fenólicos en general.

Desarrollo de una coloración verde intensa, taninos del tipo piro catecólicos

Desarrollo de una coloración azul, taninos del tipo piro galotánicos

ENSAYO DE NINHIDRINA

Si el extracto se encuentra en otro solvente orgánico, Se mezcla alícuota 5-10 del extracto en alcohol, el una La se calienta minutos en baño deoagua. se toma mezcla con 2 mLde solución al 2 % de ninhidrina residuo en baño cuando de agua. de la concentración Este ensayo se considera positivo se en agua. desarrolla un color azul violáceo

ENSAYO DE SHINODA Si la alícuota del extracto se encuentra en alcohol, se diluye con 1 mL de ácido clorhídrico concentrado y un pedacito de cinta de magnesio metálico. Después de la reacción se espera 5 minutos, se añade 1 mL de alcohol amílico, se mezclan las fases y se deja reposar hasta que se separen.

ENSAYO DE ANTOCIANIDINAS

Si la alícuota del extracto se encuentra en agua, se procede de igual forma, a partir de la adición del ácido clorhídrico concentrado. El ensayo se considera positivo, cuando el alcohol amílico se colorea de amarillo, naranja, carmelita o rojo; intensos en todos los casos

Se calientan 2 mL del extracto etanólico por 10 min con 1 mL de HCL conc. Se deja enfriar y se adiciona 1 mL de agua y 2 mL de alcohol amílico. Se agita y se deja separar las dos fases. La aparición de color rojo a marrón en la fase amílica, es indicativa de un ensayo positivo

ENSAYO DE MUCILAGOS

Para ello una alícuota del extracto en agua se enfría a 05 ºC y si la solución toma una consistencia gelatinosa el ensayo es positivo

ENSAYO DE PRINCIPIOS AMARGOS Y ASTRINGENTES

El ensayo se realiza saboreando 1 gota del extracto acuoso o del vegetal y reconociendo el sabor de cada uno de estos principios, bien diferenciados al paladar 4. METODOLOGÍA DETERMINACIÓN COLORIMÉTRICA DE COMPUESTOS FENÓLICOS EN AGUA MEDIANTE EL REACTIVO DE FOLIN-CIOCALTEU

Determinación colorimétrica de compuestos fenólicos en agua mediante el reactivo de Folin-Ciocalteu. Preparación del reactivo carbonato/tartrato. Pesar 200g de carbonato de sodio y 12g de tartrato de sodio, disolver en aproximadamente 750mL de agua desmineralizada y dejar enfriar a temperatura ambiente. Ajustar el volumen a 1000mL con agua destilada.

Tratamiento de la muestra. - Pesar 5g de planta mas 50 mL de agua destilada y colocar en el sonicador . - Luego cojer 1 mL de muestra y aforar en un balón aforado de 100 mL. - Despues cojer 0.1 mL de muestra y aforar en un balón. aforado de 100 mL - Luego tomar 10ml de muestra, añadir 15mL de agua y proceder de la misma forma que se ha descrito en la curva de calibrado (añadir 2 mL del reactivo carbonato tartrato y 1,5 mL de reactivo FolinCiocalteu). - - Efectuar las lecturas en el espectrofotómetro a 700nm, interpolar valores de absorbancia en la curva de calibrado para obtener los valores de concentración. (CLESCERI, A. 2010, p 1)

Preparación de la curva de calibración. - Cuadro 2-4. Determinación colorimétrica de compuestos fenólicos en agua mediante el reactivo de Folin-Ciocalteu. Laboratorio de productos naturales. Facultad de ciencias. Espoch. Octubre 2014.

Solución patrón de fenol de 50mg/L Agua destilada Reactivo Folin-Ciocalteu Reactivo Carbonato-tartrato Correspondencia en mg/L de fenol

B 0 25 1.5 2 0

I 0.2 24.8 1.5 2 1

II 0.5 24.5 1.5 2 2.5

III 1 24 1.5 2 5

IV 1.5 23.5 1.5 2 7.5

V 2 23 1.5 2 10

VI 5 20 1.5 2 25

VII 10 15 1.5 2 50

5. METODOLOGÍA DETERMINACIÓN DE FLAVONOIDES

- Agitar el contenido de los tubos, esperar treinta minutos para que se desarrolle el color y efectuar las lecturas en el espectrofotómetro a una Se toman 50 g de epicarpio de un cítrico (naranja, toronja, etc.),la se calienta un erlenmeyer 30 longitud de onda de 700nm. Trazar curvaen de calibrado min., con una cantidad de etanol que cubra todo el material triturado y un pequeño exceso. Se filtra concentración/absorbancia. (CLESCERI, A. cromatografía 2010, el extracto en se caliente y conen el baño filtrado realizan siguientes ensayos:p 1) en placa delgada, Una alícuota concentra deseagua y se los realiza una corriendo en acetona-etanol (2:1) y revelando con ácido sulfúrico al 50 % y calor.

Una alícuota se trata con solución reactiva de cloruro férrico. Observe.

Una alícuota se trata con el reactivo de Fehling (A + B y calor en baño de agua). Observe. Una alícuota se trata con 1 mL de ácido clorhídrico concentrado y un pedazo de Mg metálico. Observe.

El resto de la solución se concentra hasta aproximadamente 1mL. Se añaden 10 mL de ClH 5%. Enfriar. Si aparece precipitado (hesperidina), decante la solución y al sólido realícele el ensayo (b) para confirmar que es hesperidina por la aparición de un color vino.

3. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 1.2.

MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE SUSTANCIAS NATURALES, FÍSICO-QUÍMICAS APLICADOS AL ANÁLISIS DE EXTRACTOS TOTALES Y TINTURAS.

CALCULOS: Rendimiento de extracción Rendimiento de extracción = Rendimiento de extracción =

m. extracto m. droga vegetal 18.40 g 20 g

x 100 =

x 100 = 92%

Densidad Relativa M -M D25 = M 1 - M 2 Dónde: M1: M2: M:

peso del picnómetro con la muestra (g) peso del picnómetro con el agua (g) peso el picnómetro vacío (g). 22.50−14.80 D25= 24.15−14.80 = 0.823 g

Índice De Refracción Nd25 =Ndt + 0.00044 (t-25) Dónde: Nd25= Índice de refracción a 25 °C Ndt= valor leído en la escala del aparato a la temperatura t. t= valor de la temperatura a que se realiza la medición (°C) 0.00044 = factor de corrección por grado Celcior. Nd25 = 22.2 + 0.00044 (25) = 22.2 pH De Extractos pH= -log a[H+] a[H +] = actividad de los iones hidrógeno pH= 5.89 Sólidos Totales St =

Pr - P V

Dónde: Pr= P= V= 100=

masa de la cápsula más el residuo (g) masa de la cápsula vacía (g) volumen de la porción de ensayo. factor matemático para el cálculo.

x 100

St =

34.5771−34.5771 x 100 = 1.062 g 5

RESULTADOS

PARÁMETRO

RESULTADO Olor: característico Características Organolépticas Color: verde oscuro Transparencia : (-) Presencia de Partículas: (-) Densidad relativa 0.823 g Índice de refracción 22.2 pH 5.89 Solidos totales 1.062 % Contenido alcohólico No se realizó Color: verde claro Altura: Mediana (7 cm) Análisis Capilar Análisis de Imagen: Franja Forma de la Franja: regularmente dentada DISCUSION

 Mediante los requisitos organolépticos se establecieron las características propias del extracto, como son un color de tonalidad verde oscura por su paso por el etanol, no presento transparencia debido a lo mencionado anteriormente, no se observó además la presencia de partículas en dicho extracto.  La Densidad relativa es de 0.823 obtenida al realizarse una comparación entre la densidad del agua con respecto al extracto de referencia, estableciéndose que la densidad relativa es el cociente de las densidades.  El índice de Refracción es igual a 22.2 indicativo dela determinación del ángulo límite el cual presenta en el campo visual un contraste claro y otro oscuro, la línea de separación entre ambos campos establece el ángulo límite de la luz incidente.  El pH del extracto fue 5.89 indicativo de la cercanía a la neutralidad, debido a su interacción con el solvente utilizado y a la posible presencia de metabolitos secundarios que podrán tener un valor aproximado como es el caso del alcaloide piperina contenido esta nuestra planta.

 El resultado de los sólidos totales fue de 1.062 siendo estos los residuos que quedaron después de la evaporación de la muestra y su consecutivo secado en estufa.  Mediante el análisis capilar se establecieron las características propias del extracto. 3. MÉTODOS CUALITATIVOS PARA EL ANÁLISIS DE EXTRACTOS Cuadro 3-1 Tamizaje fitoquímico del extracto etéreo 1.Ensayo de Sudan: 2.Ensayo de Dragendorf: 3.Ensayo de Mayer: 4.Ensayo de Wagner: 5.Ensayo de Baljet: 6.Ensayo de Lieberman Buchard:

Positiva Negativa Negativa Positiva Negativa Positiva

Cuadro 3- 2 Tamizaje fitoquímico del extracto alcohólico EXTRACTO ALCOHÓLICO (ETANOL AL 96%) 1.Ensayo de Catequinas: 2.Ensayo de Espuma: 3.Ensayo de Fehling: 4.Ensayo de Baljet: 5.Ensayo de Lieberman-Buchard: 6.Ensayo de Espuma: 7.Ensayo de Cl3Fe: 8.Ensayo de Bortrager: 9.Ensayo de Shinoda: 10.Ensayo de Antocianidinas: 11.Ensayo de Dragendorf: 12.Ensayo de Mayer: 13.Ensayo de Wagner:

Positiva Positiva Positiva Negativa Positiva Positiva Positiva Negativa Negativa Positiva Negativa Negativa Positiva

Cuadro 3- 3 Tamizaje fitoquímico del extracto acuoso EXTRACTO ACUOSO 1.Ensayo de Dragendorf: 2.Ensayo de Mayer: 3.Ensayo de Wagner: 4.Ensayo de Cl3Fe 5.Ensayo de Shinoda 6.Ensayo de Fehling 7.Ensayo de Espuma

Negativa Negativa Positiva Positiva rojo vino Positiva amarillo intenso Positiva Positiva

8.Ensayo de Mucilagos 9..Ensayo de Principios amargos

Negativa Positiva

DISCUSIONES:  El ensayo de Sudan nos dio positivo confirmando la presencia de compuestos grasos.  Los ensayos de Dragendorff

y Mayer dan negativo en los extractos etéreo,

alcohólico y acuoso, sin embargo en el ensayo de Wagner dio positivo en los tres extractos indicando la presencia de alcaloides, según (Martínez A. y otros 2008) “Para fines de comparación realizar el ensayo con 0,5 ml de una solución patrón de sulfato de quinina”.  Presencia de triterpenos y/o esteroides nos indicó el ensayo de Lieberman-Burchard en los dos extractos etéreo y alcohólico.  Obtuvimos la presencia de Catequinas y azúcares reductores, según los ensayos realizados de Catequinas y Fehling respectivamente.  El ensayo de espuma positivo indica la presencia de saponinas, esto en el ectracto alcohólico.  En el ensayo de Cloruro Férrico nos dio positivo en el extracto alcohólico y acuoso, indicando que la muestra tiene compuestos fenólicos como taninos. En el acuoso dio color rojo vino indicando compuestos fenólicos en general, según (Martínez A. y otros 2008) “Para fines de comparación realizar la prueba con 0,5 ml de solución patrón de ácido tánico”.  En el extracto acuoso da positivo la presencia de flavonoides con el ensayo de Shinoda con un color amarillo intenso, y con el ensayo de Antocianidinas se confirma la presencia de flavonoides en la secuencia C6-C3-C6 del grupo de los flavonoides, según (Martínez A. y otros 2008) “Para fines de comparación realizar la prueba con 0,5 ml de una solución patrón de Morina”.  Los principios amargos dio levemente positivo al paladar.

4.

DETERMINACIÓN COLORIMÉTRICA DE COMPUESTOS FENÓLICOS EN AGUA MEDIANTE EL REACTIVO DE FOLIN-CIOCALTEU

Concentración (mg/L)

Absorbancia

1

0.05

2.5

0.055

5

0.065

7.5

0.081

10

0.086

25

0.090

50

0.126

Curva de Calibración Absorbancia (Y) en función de la Concentración (X) 0.14 0.12 f(x) = 0x + 0.06 R² = 0.88 0.1

Absorbancia

0.08

Linear (Absorbancia)

Linear (Absorbancia) Linear (Absorbancia)

0.06 0.04 0.02 0 0

10

Planta Pimienta negra (Piper nigrum)

20

30

40

50

60

Absorbancia =

Concentración del extracto en ppm o (mg/L)

Y

Y= 0.0014X + 0.0592

0.065

4.143

Cardo santo (Cnicus benedictus L)

0.080

14.867

Malva blanca (Malva sylvestris)

0.081

15.571

0.099

28.428

0.151

65.571

Pata de vaca (Bauhinia grandiflora Juss) Uvilla (Physalis peruviana L)

CURVA DE CALIBRACIÓN CON LAS CONCENTRACIONES OBTENIDAS MEDIANTE LA ECUACIÓN DE LA RECTA Y SU RESPECTIVA INTERPOLACIÓN. Concentración en ppm o (mg/L)

Absorbancia (Y)

(X) 1

0.05

2.5

0.055

5

0.065

4.143

0.065

14.867

0.08

10

0.081

15.571

0.081

25

0.09

28.428

0.099

50

0.126

65.571

0.151

INTERPOLACIÓN DE LAS CONCENTRACIONES 0.16 0.14 Absorbancia Linear (Absorbancia) 0.12 f(x) = 0x + 0.06 R² = 0.88 0.1

Linear (Absorbancia)

Interpolar

Interpolar

0.08 0.06 Interpolar 0.04

Interpolar

Interpolar

0.02 0 0

10

20

30

40

50

60

En el análisis de compuestos fenólicos que se realizó en la práctica nos indican que todos los extractos contienen compuestos fenólicos, a su vez relacionada con la actividad antioxidante, en cada extracto de cada planta es el sostén sobre el cual se fundamenta su uso medicinal y farmacológico que contenga. (Martínez F, Fernando.2002) PIMIENTA NEGRA Las hojas de la especie Piper nigrum han mostrado prueba positiva frente a pruebas fotoquímicas para compuestos fenólicos los cuales se caracterizan por su actividad antioxidante. En otros estudios se los realiza a la planta Piper nigrum lo realizan con ensayos de DPPH que este ensayo se basa para determinar la actividad antioxidante se utiliza el método de barrido de radicales libres difenilpicrilhidrazilo (DPPH). (Puertas M., 2009.) El DPPH (1,1-difenil-2-picril-hidrazil) se caracteriza por ser un radical estable gracias a la deslocalización de su electrón libre y su color violeta oscuro que posee una banda de absorción de 520nm aproximadamente cuando se encuentra disuelto en etano. (Molyneux, 2004.) La partes aéreas (hojas, flores y madera) de la especie Piper nigrum están constituidas por compuestos fenólicos como el ácido gálico, la catequina, epicatequina, ácido ferúlico, resveratrol y quercetina, además han mostrado un elevada actividad antioxidantes en ensayos de DPPH. (Diaz, L., 2012. 17)

70

5. FLAVONOIDES DE LA PIMIENTA NEGRA ENSAYO A) Cromatografía de capa fina. B) Ensayo del cloruro férrico. C) Ensayo de Fehling. D) Ensayo de Shinoda E) Ensayo de la Hesperidina.

RESULTADO Positivo Positivo Positivo Positivo Negativo

 Al realizar la extracción con Etanol (extracto alcohólico) tenemos en la muestra (glicósidos o agliconas hidroxiladas) pueden ser extraídos inicialmente con solventes alcohólicos sin perder sus propiedades estructurales, y son muy estables al calor y a las reacciones de oxidación, resistiendo la mayoría a los tratamientos térmicos. A) Cromatografía capa fina. Discusión: Tanto en el papel y revelado cromatografico se observó una coloración intensa debido a la que los flavonoides son solubles en alcohol y ácidos fuertes por el carácter básico que les confieren los átomos de oxigeno del núcleo de la pirona formando asi sales de oxonio (sales de pirilio o sales de flavilio) y son muy estables al calor sin perder sus propiedades estructurales (ELSEVIER 2014). Los flavonoides en acetona - etanol, presentan bandas características debidas a los sistemas conjugados de los anillos aromáticos. Las flavonas y flavonoles muestran dos bandas definidas debido a sus dobles enlaces entre C2 y C3: 1) La banda I, 300-390 nm asociada con la funcionalidad cinamoílo, 2) la banda II, 250-280 nm debida al anillo aromático A (funcionalidad benzoílo), La posición de la banda I depende del tipo de flavonoide: las flavonas la muestran en 310350 nm, los flavonoles 3-O-sustituidos en 330-360 nm, y los flavonoles en 350-385 nm (ELSEVIER 2014). B) Ensayo de cloruro férrico. Discusión: En la muestra que obtuvimos, contienen agentes quelantes y grupo fenólicos como las geninas que son solubles en cloruro férrico (FeCl3) dándonos así una coloración azul – verdoso (Alarcón A, Navarro C. 2012). C) Ensayo de Fehling. Discusión: Al reaccionar el extracto alcohólico con el reactivo de fehling genera una ionización en medio básico y en presencia de calor obtenemos un tipo de flavonoides como

las antocianidinas ya que se logró observar una precipitación de coloración roja – verde intenso (Alarcón A, Navarro C. 2012). D) Ensayo de Shinoda. Discusión: En este ensayo se da la reacción de Cianidina el cual el medio extracto alcohólico presenta una coloración (amarillo – incoloro) y al añadir un reactivo como HCL + Mg2 se observó una coloración rojo intensa lo que nos indica que hay la presencia de Flavonas (Alarcón A, Navarro C. 2012). E) Ensayo de la Hesperidina. Discusión: No se logró observar el precipitado por lo que deducimos que nuestra muestra alcohólica no contiene hesperidina un compuesto importante que suele encontrase en cantidades abundantes, la cual es un tipo de flavononas glicosiladas presentándose usualmente como digliconas la cual da el sabor característico amargo a la planta. Como producto del proceso de separación de flavonoides se obtuvo un extracto alcohólico, de naturaleza polar, los cuales fueron confirmados positivamente mediante los ensayos de Cromatografía capa fina, Cloruro Férrico, Fehling, Shinoda y confirmado negativamente el ensayo de Hesperidina (ELSEVIER 2014). BIBLIOGRAFIA: José Oriel R.V. Propiedades medicianales de las plantas:guía terapéuticas. 2ª ed. Madrid: Elsevier; 2005.