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• cesar Huerta Herrera

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SEP

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UEMSTIS

CENTO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS 250º

ALUMNO (A): Cruz Zavala Viridiana Azeneth

DOCENTE: Q.F.B Gabriela Rodríguez Santiago

GRADO:

GRUPO:

4º “E”

TECNICO LABORATORISTA QUIMICO

REPORTE DE PRACTICA:

Metodo de breed: Tincion

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CENTRO DE BACHILLERATO TECNOLOGICO INDUSTRIAL Y DE SERVICIOS No. 250. PLANTEL PEDRO MORENO. SUBMODULO 3 Cuantificacion de microorganismos. Práctica de Laboratorio. No. Metodo de breed: tinción. Docente: Q.F.B. Gabriela Rodríguez Santiago

Competencia genérica y atributo:

5.1 Sigue instrucciones y procedimientos de manera reflexiva, comprendiendo como cada uno de sus pasos contribuye al alcance de un objetivo

5.6 Utiliza las tecnologías de la información y comunicación para procesar e interpretar información Competencia Disciplinares Básicas:

CE4 Obtiene, registra y sistematiza la información para responder a preguntas de carácter científico, consultando fuentes relevantes y realizando experimentos pertinentes

CE14 Aplica normas de seguridad en el manejo de sustancias, instrumentos y equipo en la realización de actividades de su vida cotidiana. Competencia Profesional:

Analiza muestras empleando los métodos instrumentales, siguiendo instrucciones y procedimientos, en base a las buenas prácticas de laboratorio.

Evidencia de desempeño:

El análisis de muestras.

OBJETIVO: Explicar el fundamento de las técnicas más utilizadas en el recuento microbiano: microscópico, siembra en placa o tubo.

Establecer la cantidad de microorganismos en una muestra mediante la aplicación de las técnicas más adecuadas. Relacionar los resultados obtenidos y explicar las causas que determinan la variación de éstos.

INTRODUCCIÓN: El crecimiento de los microorganismos presentes en sustratos que se encuentren en condiciones que lo propicien, se traducirá primero en el aumento de los componentes celulares, y en seguida por el aumento del tamaño y el incremento del número de células. Los estudios relacionados con el análisis de muestras como agua, alimentos, leche y aire requieren de una enumeración cuantitativa de los microorganismos presentes en estos compuestos, ya que la calidad microbiológica de estos productos está en relación directa con la calidad sanitaria y la seguridad para el consumo de ellos. Por lo heterogéneo de los microorganismos y de las muestras, existen muchos métodos para tales fines que incluyen métodos microscópicos o directos, el uso de contadores electrónicos de células como el contador Coulter, métodos químicos que permiten estimar la masa celular o constituyentes celulares, lecturas turbidimétricas que se pueden relacionar con el aumento de la masa celular y el método de cuenta en placa de unidades formadoras de colonias. MARCO TEORICO: El Método de Breed es una técnica de laboratorio que se utiliza para el recuento de microorganismos en la leche. Fue presentado en 1910 por los biólogos estadounidenses Samuel Cate Prescott y Robert Stanley Breed. Se trata de un método para el "recuento de totales", dado que se contabilizan los microorganismos vivos y muertos. Cuando el método solamente recuenta organismos vivos se denomina "recuento de viables". Existen muchos métodos para la cuantificación de microorganimos, incluyendo métodos microscópicos, electrónicos (contador Coulter), químicos (para estimar masa celular), y conteo en placas donde se forman y crecen las colonias de bacterias. La seguridad existente en los productos lácteos está dada por la calidad microbiológica de los mismos, lo cual garantiza el consumo desde el punto de vista sanitario. El análisis de la calidad de leche cruda es una práctica frecuente en la industria láctea y tiene como objetivo el control de la calidad de las muestras y de la materia que se introduce en la usina de procesamiento, para culminar en un producto de consumo masivo que debe responder a estándares de calidad.

TÉCNICA: Metodología Método de Breed a) En un portaobjetos limpio y desengrasado, marcar un área de 2 cm2, e invertir el portaobjetos. b) A partir de la muestra de leche o de la muestra microbiana preparada, tomar con una pipeta estéril, 0.01 mL y transferir al portaobjetos y extender en el área marcada de 2 cm2 con el asa. c) Dejar secar al aire. Muestra de leche 1. Sumergir el frote en xilol durante 2 min. 2. Sacarlo del xilol y sumergirlo en etanol durante otros 2 min. 3. Sacar el frote del etanol y cubrirlo con solución de azul de metileno durante 2 min. Lavar con agua. Dejar secar al aire. Muestra microbiana preparada 1. Fijar a la flama el frote. 2. Teñir la preparación con azul de metileno de Löeffler. 3. Eliminar el exceso con agua de la llave. 4. Dejar secar, para observar con el objetivo de inmersión. Determinación del área del campo microscópico a) Colocar en la platina del microscopio el objetivo micrométrico.

b) Medir el diámetro del campo microscópico. La reglilla del objetivo micrométrico está dividida en espacios de 10 m (0.01 mm ó 0.001 cm). c) Determinar el área del campo microscópico aplicando la siguiente fórmula:

( r )2 ( 3.1416 ) = Area delcampo microscopico en cm2 100 Número de microorganismos por campo microscópico a) Colocar en la platina del microscopio la preparación previamente teñida y contar el número de microorganismos que se observan en un campo microscópico. Cambiar el campo microscópico y contar nuevamente el número de microorganismos. Repetir este ejercicio hasta registrar 10 campos microscópicos.

Determinación del número de campos microscópicos Aplicar la siguiente fórmula: area de preparacion =Numero de campos microscopicos area del campomicroscopico

Leucocitos

Celulas somaticas

HIPOTESIS: A través de la técnica de tinción por método de breed se compararan dos muestras una de leche bronca y la otra de leche ultra pasteurizada para que después después de pasar el proceso de ser sometidas a la tinción se observen

bajo el microscopio y se observen las pequeñas partículas que quedaron de la muestra en el porta objetos OBSERVACIONES: Al poner la muestra sobre el portaobjetos la leche tardo en secar, al observarse en el microscopio la muestra de la leche bronca se noto demasiada fibra presente, esto a razón de que no esta procesada y fue extraida directamente, sin embargo en la leche ultra pasteurizada no se notaba restos de fibra.

EVIDENCIA:

Muestra de leche ultra pasteurizada

Muestra de leche bronca

CONCLUSION: El método de breed se trata de un método para el "recuento de totales", dado que se contabilizan los microorganismos vivos y muertos. El análisis de la calidad de leche cruda es una práctica frecuente en la industria láctea y tiene como objetivo el control de la calidad de las muestras y de la materia que se introduce en la usina de procesamiento, para culminar en un producto de consumo masivo que debe responder a estándares de calidad.

El instrumental de laboratorio debe estar limpio pero no necesariamente estéril dado que el método se basa en recuento de células y para el mismo no es precisa la asepsia. Si posteriormente se van a realizar análisis microbiológicos detallados con la misma muestra, sí es necesario que sea obtenida y manipulada con material estéril.

BIBLIOGRAFIA: Almenar, V. S., Vandevenne, C. A., Almenar, I. V., Martí, N. S., & Grifo, M. T. (1997). Prácticas. Microbiología de alimentos (Vol. 22). Universitat de Lleida.