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Alejandra Palacio Ana Belén Álvarez Laura S. Quintero

21/09/2017 Biología SL

PRACTICA DE LABORATORIO – OBSERVACIÓN DE CROMOSOMAS DE AJO

Marco teórico: En esta práctica de laboratorio, se busca principalmente observar mediante las raíces de Allium sativum (ajo), los cromosomas de este e identificar si sus células se encuentran en algún punto de la división celular. Esto, con el objetivo de adquirir una mayor comprensión de los procesos por los que pasan los cromosomas dentro de la célula. Para ello, hay que tener en cuenta que los cromosomas son estructuras que se encuentran en el núcleo de una célula, encargándose de transportar largos fragmentos de ADN. Existen los cromosomas bacterianos, los eucariotas, los autosómicos y los sexuales. Los cromosomas autosómicos son los pares cromosómicos que no tienen información ligada a las características sexuales; por otra parte, los cromosomas sexuales son un par cromosómico que denomina el sexo, y la información ligada a este. En esta ocasión se estarán tratando cromosomas eucariotas y autosómicos debido a que se trata del estudio de una planta. De igual forma, se deben de tener en cuenta las características de los cromosomas, por ejemplo, su longitud, la posición del centrómero, ya sea metacéntrico, sub-metacéntrico, acro-centrico o telocentrico, debido a que estos ayudan con la organización y la diferenciación entre ellos, además de ello, están los telómeros que son regiones de ADN no codificante ubicado en los extremos de los cromosomas. Los cromosomas cuentan con una composición de Ácido Desoxiribo-Nucleico (ADN), por la unión de aminoácidos con orden y secuencia de nucleótidos distintos, identificando así a cada especie.

Método: 1. Mantener durante 3 o 4 días a una temperatura de 25°C los bulbos de ajo con su base en agua. 2. Finalizado este lapso de tiempo, cortar las raíces de color amarillo, de aproximadamente 5mm, del bulbo utilizando un cortador y con ayuda de pinzas trasladarlas a un vidrio de reloj. 3. Las puntas de las raíces se ponen en una mezcla de colorante que se adhiere a los cromosomas y de ácido que desliga las conexiones entre las paredes celulares. Diez partes de aceto -orceína con una parte de 1,0 mol dm-3 de ácido clorhídrico proporcionarán buenos resultados.

Alejandra Palacio 21/09/2017 Ana Belén Álvarez Biología SL Laura S. Quintero 4. Calentar las raíces con la mezcla de colorante y ácido en una placa calefactora a 80|C durante 5 minutos. Colocar una de las puntas de las raíces en un portaobjetos de microscopio, cortar por la mitad y descartar la mitad más alejada de la terminación de la raíz. 5. Agregar una gota de colorante, colocar un cubreobjetos y presionar la punta de la raíz para esparcir las células, formando una capa de una sola célula de grosor. Así se pueden examinar y contar los cromosomas y también se pueden observar las distintas fases de la mitosis. 6. De la observación en el microscopio es necesario tomar fotografías. Cada fotografía debe ir acompañada de una descripción breve de lo que se está observando.

Materiales:      

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Bulbo de ajo Regla ± 01mm Vidrio de reloj Aceto – orceina Ácido Clorhídrico 1,0 mol dm-3 Placa calefactora

Portaobjetos Microscopio Cubreobjetos Cortador Pipeta Pasteur Aceite de inmersión

Resultados:

100x

40x

Alejandra Palacio Ana Belén Álvarez Laura S. Quintero La imagen en la parte superior expone parte de la etapa de Anafase. Aunque no se logran ver las otras cromatidas hermanas que se mueven hacia el otro extremo, en la imagen, si se evidencia uno de los lados con esta separación. De igual forma, en la parte inferior derecha de la microscopia se logra divisar un núcleo que no aparenta estar en ninguna fase de división.

21/09/2017 Biología SL En esta imagen se logran divisar las células individuales de la raíz de ajo. Sin embargo, dentro de estas no se evidencia algún proceso de la división celular. En ciertas de estas células se logra ver levemente el núcleo, mas no un proceso de división de esta. Para esta imagen se utilizó un aumento de 40x en el microscopio.

Para esta imagen se utilizó un aumento de 100x en el microscopio con ayuda de aceite de inmersión para mayor claridad de la imagen.

Análisis: En nuestras observaciones del laboratorio se identificó que no se pudieron visualizar una gran cantidad de células en el proceso de mitosis, esto puede ser tanto por un mal proceso en el desarrollo del método. Esto pudo haber ocurrido por la mala limpieza de los materiales utilizados que pudo haber influenciado el contacto correspondiente entre las sustancias y el ajo. Se debe tener en cuenta también el manejo del microscopio con el fin de eliminar posibles errores sistemáticos en el procedimiento, por ejemplo al cambiar de aumento o al manejar la platina. Por otro lado, también es importante tener cuidado con la muestra pues es posible que el corte en el lugar no correspondiente o el uso de la parte del ajo que no estaba cerca de la raíz, el hecho de que las puntas de las raíces con células de mitosis son de color amarillo, y las raíces utilizadas eran blancas, haya influenciado los resultados y las imágenes que fueron visibles en el microscopio. Por último, se recomienda prestar atención a la manera en la que se suministran las diferentes sustancias a la muestra para que ésta no se vea afectada por un error de pulso o de cantidad en la adición de la sustancia. Estas pudieron ser varias de las razones por las cuales no se pudieron observar un mayor número de células en diferentes fases de la mitosis, y por lo tanto una gran cantidad de cromosomas.

Alejandra Palacio Ana Belén Álvarez Laura S. Quintero

21/09/2017 Biología SL

Conclusión Durante la práctica no se logró ver una gran cantidad de estructuras como se esperaba y en su mayor parte no hubo células en proceso de división por mitosis. A pesar de lo anterior, se pudo apreciar la imagen de una célula en la anafase de la división por lo que se puede concluir de que los errores influenciaron la mayor parte de la práctica pero no obstruyeron la visibilidad de la célula. Esto significa que la intervención de los errores tanto sistemáticos como aleatorios no impidió en su totalidad el desarrollo completo de la práctica. Este resultado se puede interpretar como una invitación a mejorar en el manejo de cada una de las dificultades para así llegar a obtener lo requerido y llevar a cabo buenos resultados en el laboratorio.

Preguntas 8. En las fotos y las observaciones se puede distinguir las similitudes entre una de las fases de la mitosis, esta es la anafase, pues en ambos (fotos y observaciones) se visualiza como los cromosomas están siendo direccionados a polos de la célula. Por otra parte, no se pudieron visualizar las demás fases de la mitosis. 9. Los cromosomas son difíciles de ver en dicho caso, sin embargo, se ve cómo se van reuniendo a uno de los lados de dicha célula. 10. Por la resolución y claridad de la imagen no se puede contar exactamente cuentos cromosomas tenía la célula observada. Sin embargo, se alcanzan a visualizar entre 4 a 6 cromosomas en la célula. 11. La fase que se pudo reconocer en nuestras observaciones fue la anafase. 12. Lamentable no alcanzamos a llegar a comprobar si se pueden observar los cromosomas con cualquier trozo de ajo, del mismo modo no pudimos elaborar el proceso con un tejido de cebolla. 13. En la parte superior de la imagen se logra ver parte de la anafase. Esto se puede deducir a partir de la distinción de la mitad de las cromátidas hermanas siendo separadas. Si se compara con la imagen del laboratorio, la figura mostrada en la segunda parte de la anafase se asemeja a la parte superior de la microscopía. 14. Identifique las fases señaladas con un círculo  

En el medio se encuentra la interfase, en la cual la célula duplica su material genético y crece. Al lado de la interfase está la profase, donde se condensa el material genético y el desarrollo bipolar del huso acromático.

Alejandra Palacio 21/09/2017 Ana Belén Álvarez Biología SL Laura S. Quintero  Más arriba y a la derecha se encuentra la metafase, en la cual los cromosomas se alinean en el ecuador de la célula y los dos cinetocoros de cada cromosoma se unen a los microtúbulos del huso.  En la esquina superior izquierda se encuentra la anafase, en la que las cromátidas hermanas se separan y son jaladas hacia los polos opuestos de la célula.  De lado derecho está la telofase, donde la célula comienza a restablecer sus estructuras normales.  En la etapa mostrada en la esquina superior derecha la célula ya ha terminado de dividirse y acaba de ocurrir la citocinesis en la cual el citoplasma se divide para formar dos nuevas células.

Referencias Audesirk,T.,& Audesirk, G. (1999). Biology: Life on Earth. Upper Saddle River, NJ: Prentice Hall.