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MICROBIOLOGÍA AMBIENTAL INFORME DE COMPONENTE PRÁCTICO

ESTUDIANTES: OMAYRA ALEJANDRA BLANCO BAYONA CODIGO: 1.100.968.727 PAOLA ABDREA PINTO AGUIAR CODIGO: 1.099.554.499

GRUPO: 90121_134

PRESENTADO A: TUTORA MARIA FERNANDA DOMINGUEZ

UNIVERSIDAD ABIERTA Y A DISTANCIA - UNAD ESCUELAS DE CIENCIAS AGRICOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE CEAD BUCARAMANGA 29 DE NOVIEMBRE DE 2019

INFORME DE COMPONENTE PRÁCTICO

INTRODUCCIÓN

El laboratorio de Microbiología Ambiental está regido por normas de seguridad e higiene que se debe cumplir a cabalidad para garantizar la protección contra infecciones de los estudiantes u otro personal que labore en estas instalaciones, así como garantizar la calidad de las técnicas y la confiabilidad de los resultados. Por lo tanto, el Presente trabajo contiene información de la práctica de laboratorio de Microbiología Ambiental realizado el día 09 y 15 de noviembre del presente año, donde se pudo conocer e identificar sus partes y nuevamente aplicar el manejo adecuado del microscopio, en la observación se reconocieron los diferentes microorganismos, estructuras celulares, grupos bacterianos y sus diferentes estructuras de tejidos. Recordemos que Por las atribuciones a la ciencia de la microbiología, el amplio campo de acción y el propósito de la comprensión cabal por parte del estudiante, desde el punto de vista práctico “el saber hacer” el curso de Microbiología de la Escuela de Ciencias de la salud de la Universidad Nacional Abierta y a Distancia UNAD, está diseñado para que a través de actividades prácticas, lleven a cabo procesos para comprender, aplicar y desarrollar nuevo conocimiento en el estudio de la Microbiología. Es necesario entender que la Microbiología es la ciencia que estudia organismos vivos de tamaño diminuto que se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano, todo inició con la invención del microscopio, alrededor del año 1620. Los experimentos con animales, los cultivos bacterianos, la relación entre patógeno y patología, el perfeccionamiento de técnicas microbiológicas, entre otros, iniciaron la construcción del cuerpo de conocimientos de estas ciencias biológicas que estudian microorganismos, la genética y la bioquímica, la biología celular y molecular. Seguidamente se evidenciaron los pasos realizados en cada una de las prácticas las metodologías y la discusión del resultado, las imágenes tomadas y cuestionario con los que se contrastan la imagen obtenida en la práctica de laboratorio.

OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL Identificar diferentes especies de microorganismos como hongos y bacterias mediante toma de muestras en laboratorio de agua de charco y evaluación microbiológica en alimentos. Realizando procedimientos de siembra, coloración, tinción óptica y microscópica de estos.

OBJETIVOS ESPECIFICOS ➔ Entender y clasificar diferentes tipos de medios de cultivo que se manejan para el crecimiento de microorganismos en un laboratorio. ➔ Conocer métodos de siembra de microorganismos en diferentes cultivos. ➔ Realizar la coloración de Gram en las muestras a estudiar. ➔ Clasificar las bacterias por su afinidad tintorial, su morfología y agrupación ➔ Crecimiento de mohos en el pan ➔ Crecimiento de levaduras

Materiales y equipos Por estaciones: ▪ Dos vasos de precipitado de 50-100 mL con 20 mL de agua destilada estéril. X5 ▪ Agitador de vidrio o espátula. X5 ▪ Gotero estéril. X5 ▪ Portaobjetos y cubreobjetos. X5 ▪ Asa bacteriológica de punta redonda. X5 ▪ Mechero de alcohol o gas. X5 ▪ Azul de lactofenol (reactivo). X5 ▪ Microscopio de luz. X5 ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪ ▪

a.

Por todo el grupo: Un vaso precipitado de 100 mL con 90 mL de agua destilada estéril. Un recipiente de plástico o vidrio con 20 mL de etanol al 70 %. Un recipiente de plástico o vidrio con 20 mL de hipoclorito de sodio (o clorox) al 3 %. Cuatro tubos de ensayo con 9 mL de agua destilada estéril. Cinco pipetas de vidrio de 1 mL estériles. Azul de metileno (reactivo). Metanol o etanol (reactivo). Incubadora ajustada a 25 °C. Incubadora ajustada a 37 °C. Balanza gramera o analítica. Medio gramo de peptona pancréatica de caseína (reactivo). Ocho cajas de Petri con agar nutritivo (AN). Un rastrillo de plástico estéril. Unas pinzas metálicas estériles. Láminas para cortar o bisturí. Una caja de Petri estéril vacía. Dos cajas de Petri con Agar Sabouraud y dextrosa (ASD). Embudo estéril. Papel filtro. Dos escobillones estériles. Dos tubos de ensayo con agua destilada estéril. Dos asas micológica de punta recta. Cristal violeta para Gram (reactivo). Lugol para Gram (reactivo). Alcohol acetona para Gram (reactivo). Fuscina para Gram (reactivo).

Crecimiento de mohos en el pan

Procedimiento ✔ Se disolvieron 2.5 g de azúcar de mesa en 20 mL de agua destilada ✔ Se adicionaron 20 gotas de esta disolución en diferentes (20) partes del pan tajado

✔ Se introdujo la muestra en una bolsa transparente de cierre hermético, y se cerró rápidamente ✔ Se incubo a temperatura ambiente en un lugar oscuro (En un gabinete del laboratorio) En el momento 3 (practica N° 2), se continuo así: ✔ Se dispuso un trozo de cinta adhesiva de los extremos entre los dedos pulgar y corazón, con el lado adhesivo hacia afuera. ✔ Se utilizó el lado adhesivo de la cinta sobre el moho que creció en el pan ✔ Agregamos una gota de azul de lactofenol extendida sobre un portaobjetos y se dispuso suavemente la cinta sobre este. ✔ Observamos en el microscopio utilizando los 3 objetivos: 4x, 10x, 40x. ✔ Se toman fotografías obtenidas del microscopio y se mencionan las estructuras celulares (hifa, septo y esporas/condios).

Registro fotográfico:

Peso de azúcar

Aplica mezcla en el pan

Se aplica una gota de azul de lactofenol

4x

Se empaca el pan

10x

Conidios

hifa Septo

Septo

40 x Observaciones: Al finalizar el procedimiento mencionado en la guía se incuba el pan de marca industrial Guadalupe en una gaveta del laboratorio debido a que la oscuridad y humedad del lugar permiten una mejor reproducción de hongos (mohos) en combinación con el azúcar que fue aplicado y a una temperatura aproximada de 18 – 20 °C, durante una semana. Después de esto se evidencian en el microscopio con los 3 objetivos anteriormente mostrados, nos permite ver la parte estructural de las células de los hongos obtenidos (moho). Sin embargo, no fue mucha la obtención de los mohos debido a la cantidad de conservantes que le aplican a estos productos. El objetivo 100 x no funciono por lo tanto no se evidencio ninguna estructura.

b. Observación de levaduras Procedimiento: ✔ Se disolvieron 2.5 g de azúcar de mesa y aproximadamente 5 g de levadura de pan en 20 mL de agua destilada. ✔ Se incubó la disolución anterior a 37 °C por 15 min. ✔ Se tomó una muestra de esta disolución y se dispuso sobre un portaobjetos. Se utilizó un asa bacteriológica de punta redonda estéril y también un agitador de vidrio estéril para disolver la levadura. ✔ Se adicionó una gota de azul de metileno, se dejó actuar por 3 min y se dispuso un cubreobjetos sobre esta muestra

✔ Se observó en el microscopio utilizando los 3 objetivos: 4x, 10x, 100x . ✔ Se tomó registro fotográfico de y se señaló lo observado: estructuras celulares (gemas,

pared y núcleo).

Registro fotográfico:

pared

4x

Gema

Nucleo

10x

100x

Observaciones: Para esta práctica se observó al microscopio las levaduras después de la incubación en el horno, donde se evidencio que la temperatura de 37°C hizo crecer la levadura ( Se derramó dentro del horno) lo que nos indica que a mayor temperatura hay una mayor actividad de crecimiento de los hongos y levaduras.

c.

Observación de bacterias probióticas. ✔ Se tomó una gota de yogurt y se mezcló con una gota de agua destilada estéril sobre un portaobjetos. Se utilizó un asa redonda para tomar la muestra. ✔ Se extendió la muestra y se secó completamente. Se asistió con el calor del mechero, pero evitando sobrecalentar la muestra. ✔ Se cubrió la muestra con metanol durante 10 s para limpiar la parte grasa. ✔ Escurrimos el alcohol adicionado y se dejó secar a temperatura ambiente. ✔ Cuando la muestra estuvo completamente seca se cubrió con dos gotas de azul de metileno y se dejó actuar por 2 min. ✔ Se eliminó el exceso de azul de metileno y se dejó secar nuevamente. ✔ Hicimos la observaciones en el microscopio utilizando los 4 objetivos: 4x, 10x, 40x y 100x. Se tomó registro fotográfico de los diferentes grupos bacterianos (cocos y bacilos).

Registro fotográfico:

cocos

4x

10x

100x

40x

Observaciones: Se evidencio actividad de bacteriana en los probióticos donde se identifican claramente los cocos. En el objetivo 100x no se evidencio claramente la muestra.

a. Actividades segmentadas por estaciones: ✔ Se tomó una caja de Petri con AN y se marcó una división (2 mitades) con marcador. Se humedeció un escobillón estéril (aplicador) en una solución de agua destilada estéril. Se pasó el escobillón por toda la mano, sin lavar. Se realizó este paso teniendo cerca la mano de un mechero para garantizar esterilidad alrededor de la mano y de la caja. Se extendió el escobillón sobre la primera mitad de la caja de Petri con AN. Se realizó este paso teniendo cerca la caja Petri de un mechero para garantizar esterilidad alrededor de la caja. Se procedió a lavar la misma anteriormente utilizada mano con jabón. Se realice el mismo procedimiento anterior en esta mano lavada y se realizó el extendido en la segunda mitad del medio de cultivo. También como el paso anterior manteniéndose cerca un mechero para garantizar esterilidad alrededor. Registro fotográfico:

4x

10x

40x

Observaciones: Para esta actividad se requirió la exposición de la mano a posibles patógenos, sin embargo, aunque los microorganismos que se extrajeron de corresponden a las bacterias presentes normalmente en la mano ésta se mantuvo lo más cerca posible a la llama del mechero, para evitar que otros microorganismos se sembraran en la caja Petri. Se tomó 2 colonias del morfotipo más abundante (la de la mano sin lavar), se utilizó un asa bacteriológica de punta redonda. Se extendió las colonias (la de la mano lavada; limpia) sobre una gota de agua en un portaobjetos y se dejó secar completamente. Se asistió del calor del mechero, evitando sobrecalentar la muestra. Se realizó tinción de Gram Se cubrió la muestra con cristal violeta y se dejó actuar por 1 min. Se eliminó el exceso y se lavó con agua. Se aplicó Lugol a la muestra y se dejó actuar por 1 min. Se eliminó el exceso y se lavó con agua.

Se adicionó alcohol acetona y se dejó actuar por 30 s. Se eliminó el exceso y se lavó con agua. Finalmente se cubrió con fucsina y se dejó actuar por 15 s. Se eliminó el exceso y se lavó con agua. Se realizaron las observaciones en el microscopio utilizando los 4 objetivos: 4x, 10x, 40x y 100x. Se tomó registro fotográfico evidenciando las estructuras celulares (forma de cocos o bacilos, y Gram).

Estación 5: Aislamiento de microorganismos presentes en agua estancada (de Jagüey). Se tomó una caja de Petri con AN y se marcó con los integrantes del grupo Se Esterilizó un asa redonda para proceder a hacer la siembra Se tomó muestra del recipiente del agua directamente y se distribuyó la muestra en forma de zig-zag . Se realizó este paso teniendo cerca de un mechero a la muestra y la caja Petri para garantizar esterilidad alrededor. Se tapó rápidamente la caja Petri con la muestra en cultivo y se selló con cinta aislante. Se puso a incubar a temperatura ambiente en un lugar oscuro (En un gabinete del laboratorio) por una semana. Registro fotográfico:

4x

10x

40x

Observaciones: Las bacterias observadas y que fueron incubadas por una semana son del tipo mesófilas por su crecimiento entre temperaturas de 25°C a 40 °C .

Análisis de resultados de la práctica  En el transcurso de esta práctica pudimos observar cómo se hace una siembra de bacterias y hongos, cuál es su medio óptimo para su reproducción y crecimiento también observamos cuáles son sus diferencias y los diferentes tipos de bacterias y hongos que conviven en un medio como interrelacionan y con ayuda mutua en condiciones óptimas logran prosperar como colonias, además con el uso de diferentes sustancias (por ejemplo, con la tinción de gram)pudimos observar cada colonia de las diferentes bacterias que se formaron los en los medios y cómo es su comportamiento en los mismos microorganismos presentes en la columna de Winogradsky:  Se realizó la identificación de los microorganismos gracias al tiñe azul de metileno nos dejó ver, una buena abundancia de microorganismos se localizó de inmediato, demostrando también una correcta utilización del microscopio.  Las condiciones medioambientales y el tipo de agar son fundamentales para la reproducción de los microorganismos; de tal forma que algunos cultivos son hábitats muy prósperos para cierto tipo de bacterias y/ hongos.  Se observaron e identificaron diferentes grupos bacterianos como los son los cocos y los bacilos.  la práctica fue de mucha ayuda para complementar la teoría y tener un conocimiento más acertado sobre de las estructuras celulares, los grupos bacterianos y los microorganismos.

BIBLIOGRAFIA Biografias y Vidas. (2004). Recuperado el 27 de 04 de 2018, de nucleo: https://www.biografiasyvidas.com/tema/bacterias.htm Función de vacuolas. (2016). Recuperado el 26 de 04 de 2018, de Las vacuolas son organelas propios y únicos de las células de las plantas y algas. : http://funcionde.com/vacuolas/