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• Esteban Ramirez

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INFORME DE LABORATORIO MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

PRESENTADO POR: MELANY JACQUELINE GUEVARA POLANIA COD: 1105792112 JENNY CAROLINA RODRIGUEZ GIL COD: 1106787547 YAMILE TORRES PEREZ COD: 1110062738 DANIEL LEONARDO ORDOÑEZ PALACIO COD: 1104709340 JULIETH TATIANA BARRIOS ROCHA COD 1070620195

PRESENTADO A: DIANA PALACIOS ARRIETA

FECHA DE REALIZACION DE LA PRÁCTICA: 05 Y 07 DE NOVIEMBRE DEL 2016

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNAD ESCUELA DE CIENCIAS AGRICOLAS PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE IBAGUE TOLIMA NOVIEMBRE DE 2017

INFORME LABORATORIO - COMPONENTE PRÁCTICO INTRODUCCIÓN En el presente laboratorio se darán a conocer los procedimientos y técnicas propias para el análisis microbiológico de bacterias y hongos, teniendo como objetivo reforzar nuestro conocimiento teórico y adquirir nuevos conocimientos mediante la práctica, realizando técnicas de recuento microbiano, manejo de muestras con disoluciones y observación de diferentes clases de bacterias y hongos. La Microbiología es la ciencia que se dedica al estudio de los microorganismos, estos forman un grupo muy extenso y diverso de organismos cuyo tamaño. La unidad de medida es el µm micra o micrón. La microbiología, como ciencia básica, investiga: Procesos vitales de los microorganismos, generación de energía, crecimiento, reproducción, la diversidad microbiana, la taxonomía microbiana, la evolución microbiana como ciencia aplicada, se relaciona con otras ciencias, agricultura, medicina, industria alimentaria, biotecnología, ecología, etc. Para estudiar la intervención de los microorganismos en los procesos de estas ciencias. Los microorganismos se encuentran ampliamente distribuidos en la naturaleza en donde pueden crecer y reproducirse: suelo, agua, animales, plantas y seres humanos. Muchos microorganismos pueden transportarse a través del aire aunque en este medio no se reproducen, el picaporte de una puerta, las manos, incluso los apuntes están cubiertos de microorganismos y pueden producir infecciones, si bien solo unos pocos microorganismos son capaces de producir enfermedades, algunas de estas son tan graves que justifican la preocupación y la necesidad de tener medidas preventivas para evitar infecciones. Técnicas Básicas en el laboratorio de microbiología Para estudiar los microorganismos, debemos conseguir su crecimiento en cultivo puro, en el laboratorio debemos proporcionarle nutrientes, a través de los medios de cultivos, y las condiciones ambientales para que se puedan desarrollar. Debemos evitar que microorganismos del ambiente se introduzcan en nuestros cultivos y los contaminen por ello, en microbiología se trabaja con elementos estériles y en condiciones de esterilización, la eliminación de todos los microorganismos presentes en una sustancia u objeto es un prerrequisito para poder estudiar, conservar y transportar cultivos de microbianos puros. El laboratorio de microbiología se ocupa de los ensayos de esterilidad, detección, aislamiento, recuento e identificación de microorganismos bacterias, levaduras y hongos filamentosos y pruebas de endotoxinas bacterianas en diferentes materiales ejemplo, materias primas, agua, productos, superficies, vestimentas y el medio ambiente, valoraciones usando microorganismos como parte del sistema de pruebas.

OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL 

Identificar diferentes especies de microorganismos como hongos y bacterias mediante toma de muestras en laboratorio de agua de charco y evaluación microbiológica en alimentos. Realizando procedimientos de siembra, coloración, tinción e identificación macroscópica y microscópica de estos.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS        

Identificar diferentes especies de microorganismos mediante métodos de siembra microbiana. Realizar métodos de tinción mediante coloración simple y compuesta. Clasificación de hongos mediante la observación microscópica. Identificar medios de cultivo diferencial y selectivo. Controlar el crecimiento bacteriano de Gram- positivo y Gram -negativos. Identificar mediante el método microscópico cianobacterias. Identificar unidades formadoras de colonias. Establecer normas y principios básicos de comportamiento en el laboratorio.

MARCO TEORICO BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO Los laboratorios de microbiología están regidos por normas de seguridad e higiene que deben cumplirse a cabalidad para garantizar la protección contra infecciones de los estudiantes u otro personal que labora en estas instalaciones, así como garantizar la calidad de las técnicas y la confiabilidad de los resultados.

METODOS DE SIEMBRA Siembra en Estría Compuesta: Con éste procedimiento se puede conseguir una buena separación de las colonias y aislarlas fácilmente. Pará ello Se flamea el asa redonda, se toma la muestra del material a estudiar (agua residual), se coge parte de la muestra para colocarla en el tubo de ensayo que contiene el agua peptonada Homogenizar, luego se Colca el inoculo en uno de los extremos de la caja de Petri con el medio de cultivo indicado. Extienda el cultivo haciendo 4 estrías paralelas, sin romper el agar y Terminado la siembra, marcar las cajas en el borde de la base de la caja y envolverla en papel vinipel para llevarlas a incubar a 37 °C

TÉCNICAS DE TINCIÓN

Las tinciones en microbiología son las primeras herramientas que se utilizan en el laboratorio para el diagnóstico de las enfermedades infecciosas. Desde hace más de un siglo han ayudado a resolver problemas de etiología microbiana. Hay una gran variedad de tinciones, que se han ido desarrollando para la detección de los diferentes agentes infecciosos –en los que se incluyen bacterias, parásitos y hongos–. La tinción de Gram se considera básica en la valoración inicial de muestras para análisis bacteriológico, mientras que la tinción de Wright se ocupa para el diagnóstico de enfermedades muy particulares en el rubro de la parasitología. Hay técnicas tintoriales específicas de gran utilidad, como la tinción de Ziehl-Neelsen, que se utiliza para el diagnóstico de enfermedades crónicas como la tuberculosis o la actinomicosis, o la tinción de azul de lactofenol, que preserva e identifica a los componentes estructurales de los hongos. Las diferentes tinciones en el laboratorio microbiológico tienen una utilidad fundamental para el diagnóstico y tratamiento oportuno de múltiples patologías de etiología infecciosa. Tinción simple: Un solo colorante. Se basan en el hecho de que las células tienen una composición química diferente a la de su entorno, de modo que ambos se comportan de forma diferente frente a un colorante. Tinción de Gram: Fue desarrollada empíricamente por Christian Gram en 1884, a pesar del tiempo transcurrido la tinción apenas se ha modificado y es unos de los primeros pasos que se realiza para cualquier identificación bacteriana. Ayuda a determinar rápidamente las características morfológicas, por lo que es útil en la indicación de los antibióticos. Esta tinción también permite establecer si el material enviado al laboratorio para su cultivo posee la calidad adecuada.

Es la tinción usada más comúnmente en los laboratorios de microbiología. Constituyen el criterio básico para separar los grandes grupos de bacterias (Gram positivas y Gram negativas), Ahora se sabe que la discrepancia en las propiedades de tinción de estos dos grupos refleja una diferencia fundamental en la naturaleza química de sus paredes celulares y en la naturaleza de estas. Después de la fijación de la muestra en un portaobjetos de cristal (por calentamiento o tratamiento con alcohol), esta se expone a cristal violeta y después se agrega Lugol para formar un complejo con el pigmento principal. Durante la decoloración con alcohol o acetona, las bacterias Gram positivas teniendo una gruesa capa de peptidoglicano es capaz de retener el complejo, mientras que los microorganismos gramnegativos teniendo una capa delgada de peptidoglicano lo pierden; se añade saponina como contra colorante, que es retenido por los microorganismos gramnegativos (de ahí su color rosado).

MEDIOS DE CULTIVO Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado más de 10.000 medios de cultivo diferentes. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. La mayoría de las bacterias patógenas requieren nutrientes complejos similares en composición a los líquidos orgánicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusión de extractos de carne y Peptona a la que se añadirán otros ingredientes. El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparación de medios de cultivo. Se licúa completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mínimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en él. La Gelatina es otro agente solidificante pero se emplea mucho menos ya que bastantes bacterias provocan su licuación. En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentación de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se añaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. También se añaden colorantes que actúan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formación de ácido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH básico y amarillo en pH ácido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).

De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en:  Líquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulación.  Semisólidos: Contienen 0.5% de agar en su formulación. Se utilizan para estudiar la movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelo).  Sólidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulación. Estos medios inmovilizan a las células, permitiéndoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias permiten al microbiólogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan más de un tipo de colonia no provienen de un cultivo puro. Las placas de agar también se utilizan para la determinación de células viables (recuento en placas). De acuerdo a su composición, los medios de cultivo pueden clasificarse en:  Definidos: es aquél medio de cultivo del cual se conoce su composición exacta. Son muy utilizados en estudios fisiológicos. Los medios mínimos son medios definidos que únicamente le proporcionan al microorganismo los nutrientes necesarios para crecer, pe ro no para desarrollarse óptimamente.  Complejos: es aquél del cual no se conoce la composición exacta del medio. A menudo, los medios complejos emplean sangre, leche, extracto de levaduras, extracto de carne u otras sustancias muy nutritivas pero de las cuales se desconoce la composición química exacta. Estos medios son muy utilizados para cultivar bacterias desconocidas o bacterias de requerimientos nutricionales muy complejos. De acuerdo a su función, los medios de cultivo se clasifican como:  Medios Selectivos: Son aquéllos que poseen uno o más componentes añadidos, los cuales inhibirán o prevendrán el crecimiento de ciertos tipos de especies de bacterias y/o promoverán el crecimiento de las especies deseadas. Uno puede ajustar las condiciones físicas de un medio de cultivo tales como el pH, la temperatura, para hacerlo selectivo para los organismos de interés.  Medios Diferenciales: Permiten al investigador distinguir entre diferentes tipos de bacterias con base en alguna característica observable en su patrón de crecimiento en el medio, ya sea por producción de algún pigmento o por cambios de color en el medio debido a indicadores de pH, o por halos de degradación de algún componente en el medio de cultivo.  Medios de Enriquecimiento: Contienen algún componente que permite el crecimiento de cierto tipo específico de bacteria, pero no contienen sustancias inhibidoras.  Medios Enriquecidos: Se emplean para cultivar microorganismos que requieren un gran número de factores de crecimiento. Generalmente contienen extractos biológicos poco usuales como sangre, suero en polvo, extracto de cerebro de res, yema de huevo, etc. El procedimiento se hace mediante una siembra de la muestra en caja de Petri por medio del método ecométrico y determinar el índice de crecimiento absoluto (ICA).

CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO Los factores físicos y químicos tienen un efecto notable sobre la vida de los microorganismos en su medio ambiente natural. Algunos estimulan su desarrollo en tanto que otros lo retardan o lo impiden. El conocimiento del efecto de esos parámetros medio ambientales no solo permitió estudiar los microorganismos bajo condiciones controladas de laboratorio para favorecer su crecimiento sino que posibilitó aprender la forma de controlarlos. El crecimiento bacteriano es la división de una bacteria en dos células hijas en un proceso llamado fisión binaria. Previniendo que no se produzca ningún caso de mutación las células hijas resultantes serán genéticamente idénticas a la célula original. De este modo tiene lugar la "duplicación local" de la población bacteriana. Las dos células hijas creadas tras la división no sobreviven necesariamente. Sin embargo, si el número de supervivientes supera la unidad, en promedio, la población bacteriana experimenta un crecimiento exponencial. La medición de una curva del crecimiento exponencial de las bacterias en un cultivo ha sido tradicionalmente una parte de la formación de todos los microbiólogos. Los procesos fundamentales empleados para ello son la enumeración bacteriana (conteo bacteriano) por métodos directos e individuales (microscopía, citometría de flujo1), por métodos directos y masivos (biomasa), por métodos indirectos e individuales (conteo de colonias), o por métodos indirectos y en bloque (número más probable, turbidez, absorción de nutrientes). Los modelos permiten conciliar la teoría con las mediciones.

OBSERVACIÓN MICROSCÓPICA DE CIANOBACTERIAS Cyanobacteria: Es el nombre de un filo del reino Bacteria (único del dominio del mismo nombre) que comprende a las cianobacterias y, en algún sentido, a sus descendientes por endosimbiosis, los plastos. Las cianobacterias se caracterizan por ser los únicos procariotas que llevan a cabo fotosíntesis oxigénica, por ello también se les denomina oxyphotobacteria. El procedimiento se hace Colocando en el centro de la lámina portaobjeto una gota del agua que trajo como muestra y colocar luego una laminilla encima de esta preparación y esperar 2 minutos. Finalizado este tiempo montar al microscopio y observar en 10X, 40X y 100X con el fin de ver las características de la bacteria mejor.

RECUENTO DE UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS (UFC) Microorganismo aerobio mesófilo son todas las bacterias, levaduras y hongos capaces de desarrollarse en condiciones de aerobiosis a 30°C. Es un parámetro que sirve para estimar la flora total, pero sin especificar tipos de microorganismos. Es uno de los indicadores más útiles del estado microbiológico de un alimento, agua, suelo entre otros. Tiene un valor limitado como indicador de la presencia de patógenos o sus toxinas. Altos recuentos microbianos se consideran poco aconsejables para la mayor parte de los alimentos.

PRUEBAS DE ANTAGONISMO La composición del micro flora y del micro fauna de un ecosistema está regulada por las interacciones de los microorganismos de una comunidad entre sí y de los mismos con el medio no biótico de lo cual surge un equilibrio dinámico. Si dos o más especies que coexisten en un lugar no se afectan mutuamente la relación es neutralismo. Cuando algo de esto se modifica, las especies comienzan a interactuar y las relaciones que se presentan pueden ser: comensalismo, protocooperación, simbiosis, amensalismo, predación, parasitismo. La evaluación de estas relaciones in vitro permiten aislar y

seleccionar microorganismos con capacidad de Biocontroladores. En las pruebas de antagonismo se trabaja con la técnica por enfriamiento, el Método de Igarashi y técnica de estrías. En la técnica por enfriamiento se toma la caja de Petri con el medio de cultivo nutritivo y se divide en la parte trasera por la mitad con un marcador de vidrio y se señala la mitad de cada una de las mitades previamente divididas. Se marca cual microorganismo va a inocular en cada lado y finalmente por punción sembrar los microorganismos. Incubar a 37ºC si uso bacterias o a 25ºC si uso hongos. En método de Igarashi Se toma una caja de Petri y se divide en 4/4 y sembrar por siembra masiva con un asa redonda, en un espacio de tres (3) centímetros un microorganismo seleccionado y finalmente siembre en el centro por punción. La técnica por estrías su proceso se hace en caja de Petri en la cual previamente usted sembró con una estría en el centro una bacteria, sembrar a 0.5 cm, por medio de estrías, cuatro bacterias a evaluar. En el revés de la caja con marcador de vidrio señale que microorganismos sembró. Incubar a 37ºC.

DIAGRAMA DE FLUJOS

METODOLOGÍA INSTRUMENTOS                

Asa redonda Cajas de Petri Mechero Incubadora Vinipel Marcador de vidrio Portaobjetos Cubreobjetos Tubos de ensayo Asa redonda o curva Asa recta Pipetas estériles de 1 y 2 ml Estufa Vaso de Precipitado de 500 ml Contador de colonias Microscopio

REACTIVOS               

Muestra contaminada con microorganismos Agua peptonada al 0,1% estéril Agar nutritivo Agua destilada estéril Azul de metileno Cristal violeta Lugol Alcohol cetona Fucsina básica o safranina Azul de lactofenol Cultivo de Hongos 2. Agar Baird Parker (selectivo para estafilococos) Medio de cultivo nutritivo en cajas de Petri Caldo nutritivo Agua con cianobacterias

PROCEDIMIENTO PRACTICAS LABORATORIO A. Crecimiento de mohos en el pan Disuelva los 2.5 g de azúcar de mesa en 20 mL de agua destilada (Nota: Puede preparar una disolución única para todo el grupo de laboratorio).

Adicione 20 gotas de esta disolución en diferentes partes del pan tajado. Introduzca la muestra que acaba de tratar en la bolsa transparente, y ciérrela. Incube a temperatura ambiente en un lugar oscuro (Nota: Si se encuentra en un ambiente de clima frío, utilice una incubadora de 18-25 °C)

B. Observación de levaduras.

Disuelva 2.5 g de azúcar de mesa y aproximadamente 5 g de levadura de pan en 20 mL de agua destilada. Incube la disolución anterior a 37 °C por 15 min.

Tome una muestra de esta disolución y dispóngala sobre un portaobjetos. Puede asistirse de un asa bacteriológica de punta redonda estéril o un agitador de vidrio estéril. Adicione una gota de azul de metileno, deje actuar por 3 min y disponga un cubreobjetos sobre esta muestra

Observe en el microscopio utilizando los 4 objetivos: 4x, 10x, 40x y 100x.

4X

10X

40x

100x

C. Observación de bacterias probióticas Tome una gota de yogurt y mézclela con una gota de agua destilada estéril sobre un portaobjetos. Puede asistirse de un asa redonda. Extienda la muestra y séquela completamente. Puede asistirse del calor del mechero, evitando sobrecalentar la muestra. Cubra la muestra con metanol o etanol durante 10 s para limpiar la parte grasa.

Cuando la muestra esté completamente seca, cúbrala con azul de metileno y deje actuar por 2 min. Elimine el exceso de azul de metileno y deje secar nuevamente.

Observe en el microscopio utilizando los 4 objetivos: 4x, 10x, 40x y 100x. Dibuje y señale los diferentes grupos bacterianos

4X

10X



40x No se puso observar en el 4 objetivo 100x

D. Actividades segmentadas por estaciones I. Estación 1: Bacterias en el suelo. Pese 10 g de suelo y mézclelos con 90 mL de agua destilada estéril. Adicione 0.1 g de peptona pancréatica de caseína. Agite gentilmente por 10 minutos e incube a 37 °C por 30 min.

Agite la dilución 100. Tome 1 mL y mézclelo en 9 mL de agua destilada estéril. Repita el paso anterior utilizando la dilución 10-1 como partida para preparar la dilución 10-2. Realice el mismo procedimiento hasta obtener la dilución 10-4.

Tome 0.1 mL de la dilución 10-4 y dispénsela en una caja de Petri con agar nutritivo (AN). Realice un duplicado. Utilizando la misma pipeta, tome 0.1 mL de la dilución 10-3 y dispénsela en una caja de Petri con AN. Realice un duplicado. Utilizando la misma pipeta, tome 0.1 mL de la dilución 100 y dispénsela en una caja de Petri con agar nutritivo. Realice un duplicado. Disperse cada gota sobre la superficie completa del medio de Cultivo. Asista esta labor con un rastrillo de plástico estéril para todas las cajas de Petri utilizadas. Nota: disperse primero aquellos montajes correspondientes a la dilución mayor. Primero las dos cajas de 10-4, luego las dos de 10-3 y finalmente las dos de 100. Marque las tapas de las cajas de Petri e incube a 37 °C por 2 días. Nota: el docente a cargo o el técnico de laboratorio se encargará de sacarlas de la incubadora y ponerlas en refrigeración hasta la segunda sesión.

Estación 2: Recuperación de hongos acuáticos verdaderos. Limpie las semillas que trajo con agua destilada estéril durante 30 s, puede asistirse de unas pinzas estériles. Manténgase cerca de un mechero.

Realice un segundo lavado con etanol durante 30 s y rápidamente elimine el exceso con agua. Manténgase cerca de un mechero.

Realice cortes de las semillas utilizando láminas o bisturí estéril. Manténgase cerca de un mechero. Disponga las semillas en una caja de Petri vacía y coloque 20 mL de la muestra de agua que trajo. Las semillas servirán como cebo para los hongos acuáticos, que presentan flagelo y por quimiotaxis se desplazan y colonizan la semilla. Incube a temperatura ambiente en un lugar oscuro por una semana

OBSERVACIONES EN EL MICROSCOPIO

CONCLUSIONES  Los medios químicamente definidos se preparan añadiendo al agua destilada cantidades precisas de compuestos orgánicos o inorgánicos altamente purificados. Los diferentes medios y técnicas de cultivo son esenciales en el laboratorio de microbiología pues sirven para identificar las bacterias causantes de las enfermedades infecciosas y los antibióticos a los que son sensibles esas bacterias  Esta práctica nos permite diferenciar varios tipos morfológicos que se identifican en cada una de las estaciones realizadas las cuales fueron observadas por el microscopio, donde podemos estudiar y observar sus estructuras internas bacterianas como paredes celulares, cuerpos celulares ya que se pueden ampliar a mayor enfoque gracias al microscopio • Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes, factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones necesarias para el desarrollo de los microorganismos. Es decir, es un soporte que proporciona sustancias nutritivas que permitan el desarrollo y reproducción de microorganismos. • Los hongos acuáticos son los únicos miembros del reino fungí que en alguna parte de su ciclo de vida producen células móviles llamadas flagelos, las cuales les ayudan a desplazarse por el medio acuático • Por medio de esta práctica se logró utilizar las técnicas aprendidas durante el transcurso del proceso en el laboratorio. Se logró aprender a realizar algunos de los métodos que existen para cultivar bacterias y de esta manera observar sus características tanto macroscópicas como microscópicas e interpretación de las mismas, con lo que se observó que para cada bacteria existen características diferentes que son las que las identifican y diferencian de otras bacterias, por lo que de esta manera se le puede llegar a identificar con su correcta siembra y observación para análisis posteriores o simplemente para la identificación de una bacteria en algún medio u organismo.

BIBLIOGRAFÍA 

CIBEM. (S.F). Normas de la American Psychological Association (APA) para la confección de referencias bibliográficas. [Documento PDF]. Recuperado de: http://www.cibem.org/~josepr23/2017/CIBEM2017_OK/index.php/es/



Microinmuno. (S.F). Los medios de cultivo en microbiología. [Sitio Web]. Recuperado de: http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htm



Medigraphic. (2014). Las tinciones básicas en el laboratorio de microbiología. [Arituculo de revisión]. Recuperado de: http://www.medigraphic.com/pdfs/invdis/ir-2014/ir141b.pdf



UNAD. (S.F). Guía para el desarrollo del componente práctico. [Documento PDF]. Recuperado de: https://es.scribd.com/document/227411935/Informe-PracticaMicrobiologia-Ambiental-Bucaramanga