• Author / Uploaded
• Felipe Gomez

Citation preview

INFORME PRÁCTICA #6 OBTENCIÓN DE PENICILINA Y COMPROBACIÓN DE SU ACCIÓN ANTIBIÓTICA

Por: Nathalie Zapata Gaviria Ana Maria Henao Arango María Alejandra Muñoz Castrillon

Profesor: Juan Martin Delgado

Asignatura: Laboratorio de Biotecnología l Miércoles – jueves 12 - 14

Universidad de Antioquia Facultad de ciencias farmacéuticas y alimentarias Departamento de alimentos Medellín 2015-1

OBJETIVOS



General: Obtener penicilina a partir de una cepa esporulada de Penicillum Chrysogenum en medio de cultivo sumergido y comprobar su acción

 

antibiótica a partir de un antibiograma. Específicos: Garantizar el proceso de fermentación del Penicillum Chrysogenum para la



obtención de penicilina Favorecer el crecimiento micelar para favorecer la excreción de la penicilina



en el medio de cultivo Controlar y condicionar las condiciones ambientales para el crecimiento del



Penicillum Chrysogenum en medio de cultivo sumergido. Identificar y comparar la acción antibiótica de la penicilina obtenida y un tipo de penicilina comercial mediante un antibiograma, utilizando como microorganismo de prueba una cepa de Bacillus Subtilis.

DESCRIPCIÓN DEL PROCEDIMIENTO Inicialmente se obtuvo una cepa esporulada de Penicillum Chrysogenum cultivada en agar saburaud, a continuación

se prepararon para los seis

equipos de trabajo, mil quinientos mililitros (1500 mL) de caldo que contenía (45 gramos de lactosa, 15 gramos de glucosa, 60 gramos de extracto de levadura, 4.5 gramos de nitrato sódico, 0.75 gramos

deshidrogenofosfato

sódico, 0.45 gramos de fenilacetato, 0.375 gramos de sulfato magnésico y la punta de la espátula de sulfato de zinc), estos componentes tenían como función ser fuente de carbono, de nitrógeno molecular, de nitrógeno proteico, fosforo, azufre y otros minerales; después de homogenizada la mezcla de los componentes del caldo, se ajustó el pH ( pH:5) para favorecer la esterilidad del medio de cultivo, además de al crecimiento micelar del hongo. Posteriormente se racionó para cada equipo doscientos cincuenta mililitros (250mL) de caldo recibidos en erlenmeyer; a continuación se esterilizaron los medios en autoclave a 121°C y 15 minutos. Al día siguiente se inocularon las esporas de Penicillum Chrysogenum, de la siguiente manera, en cabina para evitar cualquier tipo contaminación ambiental, se adicionó al tubo de ensayo que contenía al hongo cinco mililitros (5 mL) de agua estéril en dos oportunidades y se agitó suavemente para liberar las esporas, y posteriormente se adicionaron

al erlenmeyer previamente esterilizado con mechero que contenía el caldo, luego se tapo el erlenmeyer que garantizaba un espacio de cabeza suficiente para la presencia de oxigeno necesario para el hongo aerobio con un tapón de algodón

y se dejó desarrollar el micelio del Penicillum Chrysogenum por

quince días en agitación orbital para garantizar la homogeneidad del medio. Antibiograma Inicialmente se sembró una suspensión bacteriana de Bacillus Subtilis (organismo de prueba) en un agar de ensayo para bacterias indicadoras que contenía

(glucosa,

peptona,

extracto

de

levadura,

agar

y

agua

desmineralizada), posteriormente se llevó la placa a la incubadora (45°C por 20 minutos) para secarla y que el calor ayudara a la incorporar el microorganismo al agar y no quedara solo en la superficie, a continuación, se dividió la placa en dos secciones y en la cabina se ubicaron en una de las mitades tres discos de papel humedecidos con un tipo penicilina comercial y un blanco ( disco de papel sin penicilina), y en la otra mitad se ubicaron un blanco y tres discos de papel humedecidos con el caldo que contenía el micelio del Penicillum Chrysogenum, ya que en el caldo era donde se encontraba la penicilina excretada por el hongo. Esta placa de ensayo se incubó a 28°C por dos días y transcurrido ese tiempo se realizo la medición del diámetro del halo de inhibición formado alrededor de los discos. RESULTADOS Tabla 1. Medidas de los diámetros del halo de inhibición tanto para penicilina comercial como para la penicilina obtenida a partir de Penicillum Chrysogenum.

Blanco Disco de papel 1 Disco de papel 2 Disco de papel 3

Penicilina Comercial Diámetro (cm) 0,6 1,7 1,1 1,4

ANÁLISIS DE RESULTADOS

Penicilina Obtenida Diámetro (cm) 0,6 0,7 0,6 0,6

A partir de los resultados obtenidos (Tabla 1) del diámetro del halo de inhibición para penicilina comercial y la obtenida en el laboratorio mediante la fermentación del Penicillum Chrysogenum se concluye que el diámetro los halos de inhibición para la penicilina obtenida son menores en comparación de la penicilina comercial. La penicilina comercial produjo un halo de un diámetro visible alrededor del disco de papel mientras que la obtenida se quedo solo en la superficie, por lo que concluimos que la penicilina obtenida en el laboratorio debido a que se encontraba dispersa y en solución junto con el micelio del hongo y no se sometió a proceso de purificación la concentración no fue suficiente para producir un diámetro de halo mayor en comparación con la penicilina comercial, la cual fue sometida a una serie de procesos para su obtención debido a que esta se realiza con mayor aislamiento y control del proceso, entre otros factores que pueden mejoran el producto final. El efecto que produjo la penicilina sobre el Bacillus Subtilis fue un rompimiento o lísis de la pared celular del microorganismo, produciendo una inviabilidad celular a medida que la penicilina se iba expandiendo a lo largo del disco de papel. Al ser una bacteria Gram (+), indica que su tamaño de su pared celular es mayor en comparación con las Gram (-) por esta razón la penicilina necesitaba más tiempo para producir la lisis y por lo tanto tampoco se logró obtener un mayor diámetro

de

hablo

de

inhibición

teniendo

en

cuenta

también

las

concentraciones. Los compuestos adicionados en el medio de cultivo como fuente de fosforo y nitrógeno fueron indispensables, el nitrógeno para la formación y fuente de aminoácidos esenciales para la producción de la penicilina y el fosforo como interventor en la fermentación; además con la adición de la fuente de fenilacetato se garantizo que la penicilina obtenida fuera penicilina G, esto debido a que para obtener un tipo determinado de penicilina este tipo de compuestos se debe adicionar inicialmente ya sea fenilacetato o fenoxiacetato.

CONCLUSIONES



El medio cultivo favoreció la fermentación del Penicillum Chrysogenum debido a la presencia de glucosa y lactosa, pero además gracias a la presencia de los demás nutrientes se ayudo y se garantizó una producción



significativa de penicilina. El tamaño del micelio de Penicillum Chrysogenum obtenido en el medio de cultivo favoreció la excreción del la penicilina en el medio de cultivo consumido que además contenía los demás metabolitos resultantes del proceso oxido-fermentativo favorecido por la presencia de oxigeno



representado en el espacio de cabeza. Se logró diferenciar mediante el antibiograma la acción antibiótica de la penicilina comercial en comparación con la penicilina obtenida en el laboratorio, debido a las diferencias de concentraciones y a las condiciones



físicas de cada una. Se pudo reconocer que la penicilina no solo ejerce su acción antibiótica sobre agentes o microorganismos que producen virulencia o que no solo puede ser utilizada para prevenir o solucionar enfermedades de salud, sino que también puede ser aplicada en otro tipo de microorganismos no patógenos, por lo que podría tener otras aplicaciones industriales.

BIBLIOGRAFÍA 

COOMBS, J. Diccionario de biotecnología. Editorial Labor, S.A. 1ª edición



1989. España. CRUEGUER, Anneliese. Manual de Microbiología Industrial. Editorial Acribia



S.A. Zaragoza España. 3ª edición. 1989. JAGNOW, Gerhard. Biotecnología “Introducción con experimentos modelo”.



Editorial Acribia S.A. Zaragoza España. 1991. STIEL, Néstor. Blog. Producción de penicilina. Esquema y proceso. Capitulo 9. Disponible en: www.academia.edu