Fundamento de Un Papanicolaou
FUNDAMENTO DE UN PAPANICOLAOU 1. FUNDAMENTO TEÓRICO: La tinción de Papanicolaou es un método de tinción muy importante
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- Yan Yeberson Chamba Contreras
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FUNDAMENTO DE UN PAPANICOLAOU
1. FUNDAMENTO TEÓRICO: La tinción de Papanicolaou es un método de tinción muy importante en citología. La fijación se realiza al momento de la toma de muestra del Papanicolaou aplicándole alcohol por Spray evitando una fijación inadecuada por exeso o falta de esta. Además, es fundamental que el tiempo entre la toma de muestra y fijación sea el mínimo posible (menos de 5 segundos). La coloración nuclear se realiza mediante la aplicación de hematoxilina de Harris como antes ya mencionado, es un colorantes alcohólico basófilo. La
tinción
citoplasmática
se
realiza
mediante
colorantes
alcohólicos de los cuales tiñen de forma diferencial cada tipo celular de la muestra debido a la existencia de una diferencia en la afinidad electroestática
por las proteínas que tiene cada
colorante. Además, la diferencia en los tamaos moleculares de los colorantes determina la tinción diferencial de citoplasma según el grado de diferenciación celular. El orange G, tiñe citoplasmas de células maduras bien diferenciadas con hiperqueratosis las que poseen
queratinas
de
alto peso
molecular
generando
una
coloración orangeofílica. El colorante EA-50 es una mezcla de colorantes que tiñen citoplasma y está compuesto por eosina, verde luz
y pardo
Bismarck como antes ya mencionado. La eosina posee mayor afinidad electrostática desplazando al orange G, por lo que tiñe los citoplasmas de todas las células pero finalmente son las superficiales e intermedias las que poseen coloración eosinofila o acidofila. El verde luz tiñe el citoplasma de
las células menos diferenciadas ya que poseen una matriz permeable quedando finalmente las células basales y parabasales Teñidas de azul. El pardo Bismarck tiene afinidad por la tinción de la
mucina,
por
lo
que
es
el
citoplasma
de
las
células
endocervicales las que se tiñen con este colorante. El aclaramiento es el paso final de la tinción donde se produce la transparencia celular, para lo cual, se utiliza Xilol como solución aclaradora. Finalmente las muestras se montan por medio de la unión del portaobjetos con resina o balsamo la cual es un medio de montaje soluble en el agente aclarante y debe tener un índice de refracción que coincida con ambos. 1. Lavado en agua corriente: es utilizado para hidratar y limpiar las muestras y darle un cierto carácter acuoso. Es importantes estilar bien las muestras para evitar la dilución y pérdida de capacidad de tinción del colorante utilizado. 2. Hematoxilina de Harris: utilizado para realizar la tinción nuclear de las células del frotis. 3. lavado en agua corriente: utilizado para eliminar los exesos de colorante que queden en la muestra. Es importante estilar bien las muestras
para
evitar
diluir
y
por
lo
tanto,
disminuir
la
concentración del reactivo del paso siguiente. 4. agua acida: utilizado para realizar una diferenciación de la coloración nuclear por la hematoxilina, proceso llamado coloración regresivo. Es importante que las inmersiones sean rápidas para evitar una disminución exesiva de la tinción nuclear.
5. alcohol 95%: utilizado para darle carácter alcohólico a las muestras para que reaccionen con el colorante del siguiente paso. Es importante estilar bien las muestras para evitar la dilución de los alcoholes y la pérdida de capacidad de tinción del colorante utilizado en el paso siguiente. 6. Orange G: colorante alcohólico que tiñe el citoplasma de color anaranjado, el cual tiene afinidad electrostática con las proteínas, de todas las células en una primera instancia. Finalmente son las células escamosas superficiales queratinisadas alas que obtienen una tinción orangeolica. 7. alcohol 95%: utilizado para eliminar el exceso de colorante de las muestras. Es importante estilar bien las muestras para evitar la dilución de los alcoholes y la pérdida de capacidad de tinción del colorante utilizado en paso siguiente. 8. EA-50: es una mescla de colorantes que tienen afinidad por el citoplasma de las células. 9. alcohol 95%: Es importante estilar bien las muestras para evitar la dilución de los alcoholes, alteración del xilol y su pérdida de capacidad como mordiente. Las inmersiones no deben ser por mucho
tiempo
ya
que
puede
disminuir
la
coloración
citoplasmática. 10. Xilol: utilizado para el aclaramiento de la muestra, se tiene tres depósitos para una inmersión en cada recipiente, esto es para la mejor aclaración con la importancia que tiene el oxígeno de ayudar al aclaramiento de las células, para cada inmersión de xilol.