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Identificación de las fases de la mitosis en raíces de cebollas (hortaliza) mediante observación microscópica Abad Arce Myriam Estefanía

Universidad de las Fuerzas Armadas- ESPE Departamento de Ciencias de la Vida Ingeniería en Biotecnología [email protected]

1.

HIPOTESIS

Se puede observar las fases de la mitosis en los ápices de la cebolla. 2.

OBJETIVOS



Identificar y diferenciar mediante observación microscópica las fases de la mitosis. Identificar los cambios morfológicos en cada una de las fases de la mitosis en base a bibliografía científica. Distinguir correctamente los cromosomas y su disposición dentro de cada fase de la mitosis.

 

INTRODUCCIÓN La profase es la primera fase la mitosis en la cual ocurren cambios como que los cromosomas duplicados se condensan además desaparece el nucléolo, se forman los micro túbulos del huso y este captura a los cromosomas. (Audesirk, 2004) 3.

La metafase es la etapa más larga de la mitosis dura 20 minutos, los cromosomas se ubican en la parte ecuatorial de la célula, los centrosomas se encuentran ahora en los polos de la célula. (Campbell, 2007) En la anafase los centrómeros se dividen y los cromosomas hijos se separan, toman la forma de V ya que la fibra del huso de la cual están adheridos se va contrayendo, y estos se dirigen hacia los polos de la célula. (Abate, 1999)

En la telofase el huso desaparece y dos núcleos hijos comienzan a formarse en la célula, los cromosomas se vuelven menos condensados y finalmente tenemos dos núcleos con idéntico material genético. (Campbell, 2007)

4.

METODOLOGÍA

Preparación de cebolla de una a dos semanas antes 1. Se colocó una cebolla roja (paiteña) o perla en un recipiente con agua de tal forma que solo las raíces han tenido contacto con el agua. 2. Se mantuvo la cebolla en el recipiente de una a dos semana (s) hasta el día de la práctica de laboratorio. 3. Se llevó al laboratorio la cebolla de experimentación. Preparación de muestras de raíces Se cortó con bisturí o tijera, aproximadamente 0.5 a 1 cm de los ápices (puntas) de las raíces de la cebolla. Tinción de muestras Procedimiento 1 (Ácido clorhídrico, Orceína B): 1.

2. 3.

4. 5. 6.

Se colocó 2 gotas de una solución de ácido clorhídrico al 10% en un vidrio reloj y se calentó hasta 40ºC aproximadamente, tomando el vidrio reloj con una pinza de madera. Se depositó los ápices de raíces en el vidrio reloj que contenía las dos gotas de ácido clorhídrico al 10% (caliente), durante 8 minutos. Con una pinza se retiró los ápices del vidrio reloj que los contiene y se los trasladó a otro vidrio reloj conteniendo una gota del colorante aceto-orceína (Orceína B), durante 4 minutos. Se depositó los ápices en una placa portaobjetos, se agregó 1 gota de ácido acético al 45% y se cubrió con una placa cubreobjetos. Se hizo una ligera pero firme presión sobre la placa cubre objetos, para obtener una extensión de la muestra, quedando prácticamente transparente. Se observó en el microscopio a 10, 40 y 100x y se identificó las fases de la mitosis.

Procedimiento 2 (Orceína A y B): 1. Se depositó los ápices de las raíces en un vidrio reloj conteniendo 2 a 3 gotas de Orceína acética clorhídrica (Orceína A), durante 8 minutos. 2. Se calentó suavemente el vidrio reloj a la llama del mechero de alcohol, con la ayuda de una pinza de madera, evitando la ebullición, hasta que emitió vapores tenues. Se dejó enfriar y se repitió el proceso.

3. Se depositó con la ayuda de una pinza los ápices en una placa portaobjetos, se virtió 1 gota de Orceína acética (Orceína B) y se cubrió con cubreobjetos. 4. Se procedió de la misma forma que en los pasos 6 y 7 del procedimiento 1. Procedimiento 3 (Carnoy y Acetocarmín): 1. Se depositó los ápices de raíces en un vidrio reloj que contenía una a dos gota(s) de solución fijadora de Carnoy (3 metanol: 1 ácido acético), durante 18 minutos. 2. Se trasladó con la ayuda de una pinza, los ápices a otro vidrio reloj que contenía ácido clorhídrico al 10%, durante 8 minutos. 3. Se colocó los ápices en un vidrio reloj que contenía agua para lavar, por 5 minutos. 4. Se depositó los ápices en un vidrio reloj que contenía Acetocarmín, durante 18 minutos. 5. Con la ayuda de una pinza, se depositó los ápices en una placa portaobjetos y se cubrió con una placa cubreobjetos. 6. Se procedió de la misma forma que en los pasos 6 y 7 del procedimiento 1.

5.

RESULTADOS Metafase

Foto 1: metafase en las células de cebolla paiteña observada en 40x

Telofase

Foto 2: telofase en las células de cebolla paiteña observada en 40x

Anafase

Foto 3: anafase en las células de la cebolla paiteña observada en 40x

Anafase

Profase

Foto 4: anafase y profase en las células de la cebolla paiteña observadas en 40x

6.

DISCUSIÓN DE RESULTADOS



En la metafase de la mitosis los cromosomas se han desplazado a lo largo del micro túbulo del huso hasta el ecuador de la célula. En la foto 1 se observa los cromosomas ubicados en la parte ecuatorial de la célula de la cebolla lo que nos indica que esta célula se encuentra en metafase. (Audesirk, 2004) En la telofase dos núcleos hijos se forman en la célula. En la foto 2 se observa en una sola célula dos núcleos redondos lo que nos indica que está célula está apunto de dividirse es decir en telofase. (Campbell, 2007) Cuando ocurre la anafase los cromosomas hijos emigran a los polos de la célula. En la foto 3 se observa los cromosomas ubicados en los lados opuestos de la célula es decir sus polos entonces por ello deducimos que la célula se encuentra en anafase. (Abate, 1999) En la profase el núcleo celular desaparece y se logra ver los cromosomas. En la foto 4 se observan los cromosomas regados por la célula sin ninguna disposición específica q nos indique que es metafase, anafase o profase; al lograr distinguirlos en toda la célula deducimos que es profase. (Monge, 2005)





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7.

CONCLUSIONES



Se logró identificar y diferenciar mediante observación microscópica las fases de la mitosis. Se identificó los cambios morfológicos en cada una de las fases de la mitosis en base a bibliografía científica. Se logró distinguir correctamente los cromosomas y su disposición dentro de cada fase de la mitosis.

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8.

RECOMENDACIONES



El portaobjetos debe estar absolutamente limpio.



Realizar la tinción en los tiempos indicados.



Evitar romper el crisol al calentar los reactivos.

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Observar con cuidado la disposición de los cromosomas para identificar las fases de mitosis.



Presionar firmemente el cubreobjetos sobre el ápice para lograr observar las células.

9.

BIBLIOGRAFÍA

Campbell, Reece, 2007.Biología. Editorial medica panamericana. Séptima edición. España Tomado de (21/02/15): https://books.google.com.ec/books?id=QcU0yde9PtkC&pg=PA221&dq=fases+de+la+mito sis&hl=es&sa=X&ei=1gnpVNDjJMKqNtm9gCA&redir_esc=y#v=onepage&q=fases%20de% 20la%20mitosis&f=false Audesirk, Byers, 2004.Biología ciencia y naturaleza. Pearson Pretice Hall. Primera edición. México. Tomado de (21/02/15): https://books.google.com.ec/books?id=YNxwYAkhaqsC&pg=PA184&dq=fases+de+la+mit osis&hl=es&sa=X&ei=1gnpVNDjJMKqNtm9gCA&redir_esc=y#v=onepage&q=fases%20de %20la%20mitosis&f=false Abate, 1999. Biología Aplicada. Editorial Universidad Estatal a distancia San José. Primera edición. Costa Rica. Tomado de (21/02/15): https://books.google.com.ec/books?id=aD2gd1K88CoC&pg=PA151&dq=fases+de+la+mit osis&hl=es&sa=X&ei=1gnpVNDjJMKqNtm9gCA&redir_esc=y#v=onepage&q=fases%20de %20la%20mitosis&f=false Monge, Gómez, Rivas. 2005.Biología General. . Editorial Universidad Estatal a distancia San José. Primera edición. Costa Rica. Tomado de (21/02/15): https://books.google.com.ec/books?id=x7Pjp233nJ0C&pg=PA132&dq=fases+de+la+mitos is&hl=es&sa=X&ei=1gnpVNDjJMKqNtm9gCA&redir_esc=y#v=onepage&q=fases%20de%2 0la%20mitosis&f=false