• Author / Uploaded
• Estefany Damian Saavedra

• Categories
• Estoma
• Microscopio
• Papel
• Agua
• Hoja

Citation preview

EVALUACION MACROSCOPICA Y MICROSCÓPICA DE PREPARADOS HERBALES. Los preparados herbales se clasifican de acuerdo a las características sensoriales, macroscópicas y microscópicas. Una evaluación al determinar estas características es el primer paso para establecer la identidad y el grado de pureza de tales materias. Siempre que sea posible se deberá contar con muestras auténticas que pueden servir como referencia. La inspección visual proporción los medios más sencillos y rápidos por el cual se establecen la identidad, pureza y calidad. Se basa en la observación del color, olor, sabor, forma, tamaño, textura, etc., sin embargo se debe tener precaución de la variabilidad en la evaluación de persona a persona o de la sustitución y/o adulteración con materiales muy similares al genuino. Por lo tanto es necesario e indispensable corroborar los hallazgos con microscopia y/o análisis fisicoquímico. I.

Evaluación visual

Las hojas, flores y hierbas arrugadas y contraídas podrían ser suavizadas y estiradas. A través de un tratamiento preliminar. Procedimientos recomendados.  



Tamaño: una regla graduada en milímetros es adecuada para medir la longitud, anchura y espesor de los materiales crudos. Color: examine la muestra bajo la luz natural del día difusa, el color de las muestras deben ser comparadas con la muestra de referencia. Características superficiales de textura y fractura: examine la muestra no tratada, si es necesario bajo una lente de 6X a 10X. toque el material para determinar si es blanda o dura; doblando y rompiendo se puede obtener la información sobre la



 II.

fragilidad y la aparición del plano de fractura, si es fibrosa, lisa, rugosa, granular. Olor: si e material es inocuo. colocar una pequeña porción de la muestra en la palma de la mano o en vaso de precipitado de tamaño adecuado y lentamente y repetidamente inhalar el aire sobre el material. si no hay otro olor distinto, aplastar entre el dedo pulgar y el dedo índice o entre las palmas de las manos. en primer lugar determinar la fuerza del olor (ninguno, débil, fuerte) y luego la sensación del olor (aromático, afrutado, rancio, moho, etc). Sabor: se realiza solo si es requerido. Inspección por microscopia:

a. Equipos:  microscopio con lentes con amplia gama de amplificación y objetivos con amplificación de 4X, 10X y 40X, filtros de vidrio esmerilado.  instrumentos de disección botánica. b. Tratamiento preliminar:  seleccionar una muestra representativa del material.  las partes secas pueden requerir ablandamiento antes de la preparación para las microscopias por colocación en un medio húmedo o por inmersión en agua. A. Ablandamiento de polvo herbal: para pequeñas cantidades de material.  colocar un algodón hidrófilo humedecido con agua en el fondo de un tubo de ensayo, seguido de un pedazo de papel filtro.  colocar el material que está siendo examinado sobre el papel filtro, tapar el tubo y dejar reposar toda la noche o hasta que el material este suave y adecuado para el corte. B. Ablandamiento de materiales densos y duros.  el material botánico necesita ser remojado en agua o en partes iguales de agua: etanol: glicerol hasta que sean lo suficientemente suaves para e corte.

 cualquier contenido soluble puede eliminarse por la inmersión de las células en agua, los granos de almidón pueden ser gelatinizados por calentamiento en agua, en ciertos casos puede ser humedecido durante pocos minutos. Tratamiento de 12 horas.

Polvo herbal

Papel filtro

Tratamiento de 2 horas

Remojar el polvo herbal en partes iguales de: Agua: EtOH: glicerol.

Algodón empapado de agua

c. Preparación de muestras: Muestras herbales en polvo:  colocar 1 o 2 gotas de agua o glicerol/etanol o hidrato de cloral TS en un portaobjetos.  humedecer la punta de una aguja y sumergir en el polvo herbal.  transferir una pequeña cantidad del materia que se adhirió a la aguja en las gotas del portaobjetos, homogenizar.  sellar con un cubreobjetos, retirar el exceso del líquido con papel filtro. Tejidos superficiales de hojas y flores:  tomar las piezas botánicas de un tercio a la mitad de distancia desde la base de la hoja y deben incluir la nervadura central, además de cortar 1 o 2 fragmentos de las orillas.  colocar los fragmentos en un tubo de ensayo que contenga hidrato de cloral TS y hervir hasta que se vuelvan transparentes.  transferir los fragmentos al portaobjetos, añadir hidrato de cloral TS y cubrir con portaobjetos. Secciones:

 seleccionar piezas representativas del material y se corta en secciones transversales y longitudinales con una cuchilla de afeitar.  transferir las secciones con un cepillo húmedo con etanol (15%) a frasco que contenga la misma solución. d. Clarificación de partículas microscópicas. Las secciones botánicas en su mayoría suelen ser no translucidas y oscuras, entonces se requiere la clarificación de las células para observar el contenido celular como granos de almidón, aleurona, plásticos, grasas y aceites. De modo que se revelen detalles de las estructuras. Los agentes de clarificación más frecuentes se describen a continuación:  Hidrato de cloral TS: disuelve los granos de almidón, de aleurona, plástidos y aceites volátiles, se expande en el tejido colapsado sin causar hinchazón excesiva de las paredes celulares o la distorsión de los tejidos. de mucha utilidad para observar los cristales  Lactofenol TS: permite la observación de granos de almidón y aleurona, los cristales de oxalato de calcio brillan con claridad con luz polarizada. e. Detección histoquímica contenidos:

de

las

paredes

celulares

y

Los reactivos se pueden aplicar a una muestra en polvo o a una sección botánica en un portaobjetos de las siguientes formas:  Añadiendo directamente sobre ellos gotas del reactivo y en seguida aplicar el cubre-objetos, retirar el excedente con papel filtro.  Al cubrir la muestra o sección botánica con un cubreobjetos, añadir por uno de los bordes el reactivo y por el borde opuesto dejar succionar con tiras de papel filtro.

a) Células con paredes de celulosa: añadir 1º 2 gotas de cloruro de zinc/yodado, dejar reposar durante unos minutos, añadir alternativamente 1 gota de yodo, dejar reposar un minuto, retirar el exceso con tiras de pape filtro, añadir una gota de acido sulfúrico, las paredes celulares se tiñen azul a azul-violeta. b) Paredes celulares lignificadas: humedecer el polvo o sección sobre un portaobjetos con un pequeño volumen de floroglucinol TS, y dejar reposar por 2 minutos o hasta que este casi seco, añadir una gota de acido clorhídrico 42%, colocar el cubre-objetos, las paredes lignificadas se observaran de color rosa a rojo cereza. c) Granos de aleurona: añadir gotas de yodo TS/etanol. Los granos se observan color marrón amarillento. d) Carbonato de calcio: los cristales se disuelven lentamente con efervescencia al añadir con acido acético (0,6%) o acido clorhídrico (0.7%). e) Oxalato de calcio: son insolubles en acido acético (0.6%), pero si se disuelven en acido clorhídrico (0.7%) sin efervescencia. f) Grasas, aceites grasos, aceites volátiles y resinas: añadir sudan dejar reposar durante unos minutos o calentar suavemente, las grasas se tiñen de color rojo anaranjado a rojo. Determinación estomas:

del

índice

de

Tipos de estoma: por la disposición de las células circundantes, se tienen os siguientes cuatro tipos: a. Anomocitico o tipo ranunculaceous : rodeado por un numero variable de células. b. Anisocitico o tipo cruciferous: rodeado por tres o cuatro células subcidirias, unode los cuales es notablemente mas pequeño que los demás.

c. Diacitico o tipo caryophyllaceous: acompañdo de dos celuas subcidiarias las cuales forman un angulo recto con el eje del estoma. d. Paracitico o tipo rubiaceous: rodeado de dos células subcidiarias, los ejes largos son paralelos al eje del estoma. *los fragmentos de 5x5mm de tamaño, en un tubo que contenga 5ml de hidrato de cloral TS, colocados en baño maria durante unos 15 minutos hasta que se vuelvan transparentes, observar en un microscopio con un objetivo de 40 aumentos y un ocular de 6X, en una hoja de dibujo marcar una cruz para cada celula epidérmica y un circulo para cada estoma, calcular el índice de estoma de la siguiente manera: Índice de estomas = S + 100 E+S

Donde: S: numero de estomas E: número de células epidérmicas (incluyendo tricomas) DIAFANIZACION