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ESCUELA POLITÉCNICA DEL EJÉRCITO CARRERA INGENIERÍA AGROPECUARIA SANTO DOMINGO

Asignatura: Microbiología

Nivel:

Tercero

Estudiante:

Renato Andrade Cevallos

Docente:

Ing. Gustavo Núñez

Fecha: Miércoles 3 de abril del 2013

Práctica No.3

1. TEMA Observación y conteo de esporas de hongos aislados del ambiente aire, suelo, agua. 2. OBJETIVO GENERAL Adiestrarse en técnicas de observación y conteo de esporas 3. OBJETIVOS ESPECÍFICOS Adiestrarse en técnicas de conteo de esporas. Aprender a realizar un conteo en cámara Neubauer.

4. REVISIÓN DE LITERATURA Los hongos son organismos eucariotas, constituyen uno de los mayores grupos de seres vivos, hasta ahora se han descrito unas 80000 especies pero se estima que el número real llega al millón y medio de especies, hay muchas especies que no presentan diferencias morfológicas, sino que son genéticamente diferentes. (Cubas, 2007) La micología es la ciencia que se encarga del estudio de los hongos, tradicionalmente ha sido una disciplina de la botánica, a pesar de que los análisis filogenéticos indican que los hongos están más relacionados con los animales que con las plantas. Sin embargo, los hongos producen esporas sexuales o asexuales para su reproducción y multiplicación, lo que no ocurre en animales. (Cubas, 2007) Esporas son los elementos de perpetuación de la especie. De acuerdo a la morfología reciben distinto nombre: alantospora con forma de banana, aleuriospora con base plana, dictiospora con septos longitudinales y transversales, didimospora con un tabique, equinulada como un erizo, escolescospora como un gusano, estaurospora como una estrella, feospora de color obscuro, fragmospora con tabiques transversales, fusiforme como un huso, helicospora como una espiral, hialospora de color claro y translúcido, planospora móvil, verrucosa con verrugas, zoospora con flagelos. Las balistosporas son proyectadas violentamente una vez maduras. Las hipnosporas son aquéllascapaces de permanecer con vida latente por largo tiempo. (Carrillo, 2003) Las esporas pueden ser de origen asexuado (mitosporas) o sexuado (meiosporas), y por su ubicación relativa internas oexternas. Las mitosporas seoriginan en las estructuras anamórficas y las meiosporas en las teleomórficas. (Carrillo, 2003) Esporas o conidios más bien grandes, multicelulares, con tabiques transversales y longitudinales. La forma de los conidios es característica, varía de claviforme a elipsoidal y frecuentemente presentan un apéndice apical simple o dividido (de longitud hasta 20 µm). Paredes gruesas con la superficie lisa o verrugosa, de color marrón pálido

u oscuro. A menudo con una pequeña cicatriz en la base. El número de células de los conidios varía según la especie. (Carrillo, 2003) La cámara de recuento o cámara de Neubauer es un apárato de precisión hecho de vidrio óptico especial. Se utiliza para contar células u otras partículas en suspensiones bajo el microscopio. Las cámaras de recuento se utilizan principalmente para el análisis de sangre (recuento de leucocitos, eritrocitos, trombocitos) y recuento de células en el liquor. Además las cámaras de recuento sirven para contar bacterias, esperma y esporas de hongo. (Marienfield, 2007) 5. EQUIPOS Microscopio compuesto Estufa de incubación 6. MATERIALES Placas cubreobjeto Vasos de precipitados Aguja de disección Varilla de vidrio Sacabocados Pipeta automática Platos petri conteniendo medio de cultivo Caja Neubauer 7. PROCEDIMIENTO Se colocó 100 ml de agua en un vaso de precipitación, se tomó una muestra de hongos de un medio de cultivo que fue extraída con el sacabocados y se la colocó en el agua, se la agitó con la varilla durante 5 minutos para procurar que queden las esporas en suspensión en el agua. Se colocó el cubre objetos tapando parcialmente la caja Neubauer y con la pipeta automática cogemos una muestra de la suspensión y la colocamos cuidadosamente en la caja, donde por efecto de capilaridad el fondo de la cámara se llena antes de que la solución pueda desbordarse. Llevamos la caja Neubauer a observación en el microscopio, donde primeramente ubicamos la caja con el lente de aumento 5x, luego con el de 10x observamos el cuadro central, y con el lente de 40x procedimos a hacer el conteo de las esporas.

8. RESULTADOS Cuadros seleccionados para el conteo: c 5x

10x

Cuadro superior izquierdo

11x25mmx100mmx100 = 2,75x106

Cuadro inferior izquierdo

13x25mmx100mmx100 = 3,25x106

Cuadro superior derecho

9x25mmx100mmx100 = 2,25x106

40x

Cuadro inferior derecho

12x25mmx100mmx100 = 3x106

Cuadro Central

8x25mmx100mmx100 = 2x106

Promedio total = 2,65x106 9. CUESTIONARIO ¿Señale con que lente (aumentos) hace la observación de hongos? Con el lente de 40x ¿Cuál es la estructura de la pared celular de los hongos? Su pared celular contiene quitina que es un polisacárido nitrogenado y almacenan glucógeno en sus células como sustancia de reserva. 10. CONCLUSIONES Se pudo establecer un promedio de esporas en suspensión en los 100 ml de agua. El método de recuento en la caja de Neubauer es muy efectivo para establecer un promedio en este caso de esporas. 11. RECOMENDACIONES Al mezclar la muestra de cultivo en el agua procurar revolverla bien para que esta libere todas las esporas que se encuentran en ella. Tener cuidado al colocar el agua en la caja Neubauer para que esta no se desborde.

Establecer qué cuadros se van a contar, preferiblemente los de las esquinas y centro para que sea al azar. 12. BIBLIOGRAFÍA Carrillo, L. (2003). Los hongos de los alimentos y forrajes. Jujuy, Argentina. Cubas, P. (2007). Botánica. Recuperado el 10 de abril de 2013, de Hongos: http://www.aulados.net/Botanica/Curso_Botanica/Hongos/31_hongos_general_texto.pd f Marienfield. (2007). Cámara de recuento.

ANEXOS