• Author / Uploaded
• Bertario Ríos García

Citation preview

Instituto Politécnico Nacional; Escuela Nacional de Ciencias Biológicas Informe del laboratorio de Bioquímica y Biología Molecular Profesores: María Elena Carbajal Juárez, Verónica, Saúl; Integrantes: Mancera Solis Jessica, García Bernabé Amado Jovanni, Grupo: 3IM2 ; Fecha: 12 junio 2015 Sección: 3

Obtención de glucógeno a partir del hígado de rata y su caracterización química y cromatografía

Introducción: el glucógeno es un carbohidrato similar al almidón, de color blanco, que se encuentra en el hígado y en los músculos. Es una sustancia de reserva que en el momento de ser utilizada por el organismo, se transforma en glucosa, al ser degradada por medio de una serie de enzimas como el alfa-amilasa (en saliva y jugo pancreático). Al igual que el almidón, es un polímero ramificado de alfa-glucosa, las ramificaciones aparecen cada 8 a 12 residuos de glucosa. El glucógeno puede aislarse de los tejidos animales dirigiéndose con disoluciones caliente de KOH en las que los enlaces no reductores alfa 1-4 y alfa 1-6 son estables. Objetivo: Aplicar una estrategia para aislar, purificar y caracterizar al glucógeno. Resultados: Glucógeno sin hidrolizar prueba observación molish (+) biuret (-) ninhidrina (-) lugol (+) rojo (-)para seliwanoff cetosas fehling (-) Glucógeno hidrolizado prueba

HCl 4N

Amilasa Testigo conc.

seliwanoff (-) (-) (lugol )amarillo (-)

Amilasa 1:2

(+) (-) ()amarillo (-)

fehling (-) (-) (-) (-) Discusiones: Al darnos el glucógeno positiva la prueba de Molish y negativa para Biuret y Ninhidrina, confirmamos que se trata de un carbohidrato y que no existía la presencia de algún aminoácido o proteína por lo cual decimos que la

muestra se encontraba pura. Para Fehling se obtuvo un resultado negativo seguramente a algún tipo de error en el procedimiento, aunque teóricamente se tendría que presentar una prueba positiva para hidrólisis ácida y enzimática, pero con diferente intensidad en la coloración, esto se debe a que mientras mayor es el grado de hidrólisis de la muestra mayor es el número de azúcares reductores. El lugol es una solución que contiene yodo, esta prueba nos dice el tipo de estructura que posee un polisacárido, en este caso nos dio negativa para los dos tipos de hidrólisis (enzimática y ácida) a que al romperse los enlaces pierde su forma y con esto la capacidad de retener el yodo; dio positiva con un tono rojo para el glucógeno sin hidrolizar indicándonos que es de una estructura sumamente ramificada. Con la prueba de Seliwanoff todos los tubos dieron negativos para cetosas pero en nuestro caso uno dio positivo para aldosas, lo cual tuvo que ocurrir en todos los tubos pero por cuestiones de tiempo no se pudieron quedar el tiempo necesario. Algo importante de mencionar es que para la prueba del lugol después de hidrolizar nos da un color amarillo lo cual no demuestra con exactitud que los enlaces de las cadenas ramificadas hubieran sido rotos, sin embargo esto se podría relacionar pues al no ser hidrolizado el glucógeno el color que se obtuvo fue rojo lo que indica la presencia de cadenas ramificadas. Conclusiones: concluimos que es glucógeno pues nos indica que es un polisacárido ramificado, es una aldosa, tiene poco poder reductor, proviene del hígado, es poco soluble (esto se vio desde que se tomó la muestra, su tonalidad), no tiene sabor.

Bibliografía: Bioquim.blogspot.mx; Nelson D.L Cox MM., “Lehniger. Principios de bioquímica” 3a. Ed. Omega