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• KAROLSAY ANDREA MONTERO BOLAÑO

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1. ¿Define la curva de crecimiento bacteriano? La curva de crecimiento bacteriano es la representación gráfica de la determinación periódica del número de células viables por mililitro que existen en un líquido inoculado con células microbianas provenientes de un cultivo que ha crecido previamente hasta la saturación, el concepto de este se define como el incremento de una población de una especie microbiana en un cultivo provisto de todas las necesidades del microorganismo. ¿Explica las diferentes fases de crecimiento de las bacterias?  La fase de retraso: cuando se inocula un microorganismo en un medio fresco, este no suele comenzar su crecimiento de inmediato, pues lleva un tiempo adaptarse al nuevo entorno. En esta fase se producen las enzimas necesarias para que los microorganismos puedan crecer en un nuevo entorno, en esta se acelera el metabolismo celular, la duración de esta fase depende directamente de la condición del crecimiento previo del organismo, en esta no hay incremento de las células, pero hay gran actividad metabólica, aumento en el tamaño individual de las células, en el contenido proteico, ADN y peso seco de las células. Cuando un microorganismo se agrega a un medio nutricionalmente pobre se agrega a un medio nutricionalmente rico el organismo puede adaptarse más rápido al nuevo entorno e inicia su división celular sin retraso.  Fase exponencial o logarítmica: es el periodo de la curva de crecimiento en el cual el microorganismo crece exponencialmente, ósea que cuando pasa un cierto tiempo de generación la población se incrementa, su actividad metabólica y el organismo empieza con la replicación del ADN por fisión binaria en un ritmo constante. Bajo condiciones apropiadas la velocidad de crecimiento es máxima. Las condiciones ambientales afectan la velocidad del crecimiento exponencial. La célula única se divide en dos (2) para luego replicarse en cuatro (4), ocho (8), dieciséis (16), treinta y dos (32), sesenta y cuatro (64) y así sucesivamente.  Fase estacionaria: en esta fase como la población bacteriana crece el microorganismo consume los nutrientes del medio de crecimiento para multiplicarse más rápido, esto da como resultado las limitaciones de crecimiento ya sea por agotamiento de algún nutriente esencial, por acumulación de productos tóxicos, porque se alcance el número de células

elevado para el espacio disponible o por combinación de las causas anteriores. Esto cambia el pH y la temperatura del medio provocando un entorno desfavorable para dicho crecimiento bacteriano. Las células divididas son igual al número de células muertas y se detiene la división.  Fase de decadencia o muerte: si la incubación continua después de que la población microbiana alcanza la fase estacionaria, las células pueden continuar vivas y seguir metabolizando, el agotamiento de los nutrientes, la acumulación de desechos metabólicos y materiales tóxicos en el entorno hará comenzar una disminución progresiva en el número de células viables, y cuando esto ocurre se dice que la población ha entrado en la fase de muerte. 2. ¿Qué factores bióticos y abióticos controlan el crecimiento microbiano? 3. ¿Qué otros tipos de métodos directos e indirectos hay para valorar el crecimiento bacteriano? En estos métodos se requieren preparaciones limpias, sin partículas extrañas. 1) Determinación del peso húmedo: se tara un tubo de centrífuga; se centrifuga el cultivo y se elimina el sobrenadante; se determina el peso del sedimento. 2) Determinación del peso seco: como el anterior, pero el sedimento se seca antes de ser pesado (105ºC, toda la noche), hasta peso constante. Las medidas de peso seco suelen representar el 10-15% de los valores de peso húmedo. 3) Determinación del nitrógeno total: técnica de micro-Kjeldahl. 4) Determinación de un componente característico: peptidoglucano, ADN, ARN, proteínas, ATP, clorofilas en organismos fotosintéticos, etc.

MÉTODOS INDIRECTOS

1) Medida de consumo de nutrientes o de producción de algún metabolito por unidad de tiempo . Ejemplos: consumo de oxígeno (QO2) y consumo de carbónico (QCO2), determinados por el respirómetro de Warburg. Producción de ácidos. 2) Métodos turbidimétricos (ópticos). Son muy usados en la práctica cotidiana del laboratorio. La base común de estos métodos consiste en la medición de la cantidad de luz dispersada o transmitida a través de un cultivo bacteriano. a) Espectrofotómetro: Este aparato es de uso habitual en cualquier laboratorio de Microbiología o Bioquímica. Mide la densidad óptica (D.O.), es decir la absorbancia (una medida de la luz transmitida a través de la supensión). Por supuesto, hay que realizar una curva estándar para relacionar los valores de A con la masa bacteriana en una muestra problem b) Nefelómetro: Es un aparato similar al anterior, pero el dispositivo sensor está situado en ángulo recto respecto de la dirección de la luz incidente, y lo que se mide es pues, la luz dispersada directamente por la preparación. Posee mayor sensibilidad que el espectrofotómetro. Responda las siguientes preguntas de acuerdo a la siguiente gráfica.

4. ¿En qué fase de crecimiento se encuentra el cultivo en el punto (a)?

En la fase de crecimiento que se encuentra el cultivo en el punto (a) es en la fase de retraso o de latencia. 5. ¿Qué eventos metabólicos están ocurriendo en las células en el punto (a)? En el punto (a) los eventos metabólicos que están ocurriendo son aumento en el tamaño individual de las células, en el contenido proteico, ADN y peso seco de las células. 6. Proponga una hipótesis del porque el número de microorganismos no aumenta en el punto (c). En el punto (c) el numero de microorganismos no aumenta porque ellas células que se dividen es igual al número de células muertas debido a que el microorganismo consume todos los nutrientes del entorno de crecimiento para su multiplicación y deja la acumulación de materiales de desecho, metabolitos tóxicos y compuestos inhibidores como antibióticos en el medio, y cambia la temperatura, pH y crea un entorno desfavorable que no permite que el numero de microorganismos no aumente. 7. ¿A qué se debe la disminución del número de microorganismo en el punto (d)?. Justifique su respuesta La disminución del numero de microorganismos en el punto (d) se debe a que esta en la fase de muerte debido a el agotamiento de los nutrientes, la acumulación de productos de desechos metabólicos y de otros materiales tóxicos, hicieron que el numero de microorganismos decayeran en la fase de muerte. 8. ¿Qué tipo de cultivo permite que el microorganismo pase por las cuatro fases de crecimiento? Justifique su respuesta.