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• Natalia Trujillo Yague

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PROYECTO DE AULA: ANTISEPTICOS Y DESINFECTANTES MICROBIOLOGIA

OBJETIVOS Objetivo general Evaluar la sensibilidad de los microorganismos aislados de cada muestra para comprobar el efecto potencial de los antisépticos y desinfectantes Objetivos específicos 

Evaluar el efecto de desinfectantes utilizados de uso diario sobre el crecimiento microbiano.



Determinar los efectos de la sensibilidad microbiana en los desinfectantes y antisépticos comparando distintas marcas comerciales.



Evaluar el mecanismo de acción de desinfectantes y antisépticos para el control microbiano bajo ciertos efectos.

MATERIALES

          

Agar nutritivo Solución salina Desinfectantes Antisépticos Hisopos o escobillones estériles Sensidiscos de papel filtro estériles Asa bacteriológica Mechero Guantes Pinzas estériles Incubadora

METODOLOGIA Con un hisopo estéril se tomó la muestra frotis vaginal, frotis de garganta, herida tomada del muslo grande que envuelve al fémur en la parte superior de la pierna y en superficies inanimadas como la manija de un taxi, después se transportó la muestra al laboratorio mediante un tubo con solución salina estéril. Luego, se encendió el mechero y se retiró la tapa de la caja de Petri que contenía agar nutritivo. Seguidamente se sembró cada muestra con ayuda de un hisopo mediante la técnica de siembra masiva. Para la muestra de piel, se pasaron las yemas de los dedos sobre las superficies del agar. Después, con la ayuda de la pinza estéril se tomó uno de los sensidisco de papel filtro estéril e impregnó en la solución de cada desinfectante y antiséptico. Se colocó el sensidisco impregnado sobre la superficie del agar. Se incubaron las cajas de Petri en posición invertida a 37°C durante 48 horas.

2

RESULTADOS TABLAS

Medio de cultivo

Muestra

Antiséptico o desinfectante

Resultados macroscópicos

Frotis vaginal

Jabón intimo

Mayor Inhibición

Supragel vencido

Sin Inhibición

Supragel

Mayor Inhibición

Gel antibacterial

Poca Inhibición

Frotis de herida

Isodine solución

Mayor Inhibición

Frotis de garganta

Isodine Bucofaríngea

Mayor inhibición

Frotis de manija

Hipoclorito de sodio

Inhibición

Frotis de piel Agar nutritivo

Tabla 1. Efectos de los antisépticos y desinfectante sobre las muestras .

GRAFICAS

Ilustración 2. Sensibilidad de los microrganismos presentes en la muestra de frotis vaginal con el antiséptico jabón intimo por el anverso

Ilustración 1. Sensibilidad de los microrganismos presentes en la muestra de frotis vaginal con el antiséptico jabón intimo por el reverso.

3

Ilustración 3. Sensibilidad de los microrganismos presentes en la muestra de frotis inanimado con el desinfectante por anverso

Ilustración 5. Sensibilidad de los microrganismos presentes en la muestra de frotis de garganta con el antiséptico por anverso

Ilustración 4. Sensibilidad de los microrganismos presentes en la muestra de frotis inanimado con el desinfectante por reverso

Ilustración 6. Sensibilidad de los microrganismos presentes en la muestra de frotis de garganta con el antiséptico por reverso

4

Ilustración 7. Sensibilidad de los microrganismos presentes en la muestra de frotis de piel con el antiséptico supragel en las dos primeros sensidiscos uno vencido y el otro normal y gel antibacterial por anverso

Ilustración 9. Sensibilidad de los microrganismos presentes en la muestra de frotis de herida con el antiséptico isodine solución por anverso

Ilustración 8. Sensibilidad de los microrganismos presentes en la muestra de frotis de piel con el antiséptico supragel en las dos primeros sensidiscos uno vencido y el otro normal y gel antibacterial por reverso

Ilustración 10. Sensibilidad de los microrganismos presentes en la muestra de frotis de herida con el antiséptico isodine solución por reverso

5

son agentes antimicrobianos que se emplean

ANALISIS DE RESULTADOS

solamente sobre objetos inanimados o El agar nutritivo es un medio de

medios

inertes.

Algunos

son

tóxicos

cultivo no selectivo utilizado para propósitos

celulares protoplasmáticos con capacidad

generales,

para destruir tejidos vivos. (Microbiología

para

el

aislamiento

de

microorganismos con escasos requerimien-

estomatológica)

tos nutricionales. El medio contiene una

Considerando que los antisépticos se

formula en gramos por litro de extracto de

emplean en los tejidos vivos, se realizó la

carne 3.0, pluripeptona 5.0, Cloruro de sodio

prueba

8.0 y agar 15.0 siendo una formula

microorganismos de frotis vaginal, de piel,

suficiente

los

de garganta y de una herida con antisépticos

microrganismos. No contiene inhibidores del

como el jabón íntimo, gel antibacterial,

desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la

supragel, isodine bucofaríngeo e isodine

fuente de desarrolló bacteriano y tiene un pH

solución. Al ser antisépticos comunes y

final de 7.3± 0.2. (Britania)

algunos de estos de uso diario con el fin de

para

el

desarrollo

de

El medio de cultivo en el cual se

de

sensibilidad

de

los

comprobar su efectividad frente a los

sembraron las muestras de cada frotis fue

microorganismos.

Por

agar nutritivo. Se utilizó este medio de

desinfectantes

emplean

cultivo con la intención de que los

inanimados por ello se decidió realizar una

microorganismos de aquella microbiota

muestra de frotis de manija de taxi para ser

transitoria o residente crecieran al tener los

evaluada con el desinfectante hipoclorito de

nutrientes necesarios y no ser inhibidos ya

sodio, el cual es usado frecuentemente en los

que este es un medio de cultivo no selectivo.

hogares.

Los

antisépticos

lado, en

los

objetos

sustancias

Hay que tener en cuenta que en el

empleadas en tejidos vivos, que previenen o

proceso de desinfección no solo participan

impiden el crecimiento o la acción de los

los microorganismos y el agente químico

microorganismos por inhibición de su

(desinfectante), sino que también intervienen

actividad o por la destrucción de ellos.

factores que afectan su actividad: el tipo de

Deben

agente microbiano o infeccioso, el tiempo de

reunir

antimicrobiana

son

se

otro

suficiente y

poseer

actividad una

buena

contacto, la curva de muerte del agente

tolerancia local y general. Los desinfectantes

infeccioso, la temperatura, la concentración, 6

el pH, la formulación o tipo de preparado y

de las agresiones externas, ayuda a controlar

la interferencia de sustancias en el medio

los microorganismos que pueden causar

que actúen como barrera. (Microbiología

infecciones y malos olores, protege de

estomatológica)

hongos o infecciones (Saba, 2014).

De estos factores depende la potencia del efecto de los antisépticos y desinfectantes

El antiséptico jabón íntimo utilizado para analizar dicha muestra se realizó con la intención de comprobar que efecto tenía

Evaluación de la sensibilidad de las

sobre los microorganismos de la microbiota

muestras a los antisépticos

vaginal externa ya que es uno de los 

antisépticos más usados por gran porcentaje

Frotis vaginal:

La muestra de frotis vaginal se inoculo en el

de las mujeres para su aseo personal.

medio de cultivo agar nutritivo por la técnica

se pudo observar un halo de inhibición en

de siembra masiva. Macroscópicamente se

los microorganismos formados, demos-

observaron colonias grandes de color crema

trando que el uso de este jabón en el

y pequeñas de color blanco, ambas de

sensidisco ayudo a la inhibición de los

consistencia cremosa. En cuanto a la

microorganismos. De esta manera mostran-

sensibilidad de los microorganismos al

do la efectividad del jabón íntimo. Este

antiséptico utilizado el cual fue jabón

jabón

íntimo, se apreció la formación de un

Lactobacillus spp, pero al parecer estos no

pequeño halo de inhibición alrededor del

se encontraron en los microorganismos

sensidisco el cual se había impregnado con

aislados porque de otra forma estos hubiesen

el antiséptico.

crecido en el sensidisco o cerca a esta zona

favorece

el

crecimiento

de

El jabón intimo es un jabón especial para la 

limpieza íntima que está conformado de

Frotis de piel:

ácido láctico que favorece el crecimiento de

La muestra de frotis de piel se inoculo con la

las células de defensa de la vagina llamados

yema de los dedos pasándolos por el medio

lactobacilos y ayuda a mantener la acidez

de

normal de la vagina, ayuda a mantener el pH

picamente

acido óptimo para la zona intima, el pH es el

diferente tamaño de color amarillo, naranja,

grado de acidez que defiende la zona intima

blanco y crema, todas de consistencia 7

cultivo

agar se

nutritivo.

observaron

Macroscócolonias

de

cremosa. Los dos antisépticos utilizados para

evaluar

la

sensibilidad

de

En la práctica de laboratorio se

los

evaluó

el

efecto

gel

antibacterial

frotis de piel fueron el supragel y el gel

presentes

antibacterial. Para evaluar los efectos de la

microorganismos pueden pertenecer a la

duración del producto se utilizó un supragel

microbiota normal o transitoria de la piel ya

vencido y otro en buenas condiciones.

que las manos mantienen en constante

cuanto

a

microorganismos

la

sensibilidad al

gel

de

los

en

los

antiséptico

microorganismos presentes en la muestra

En

con

del

las

microorganismos manos,

estos

contacto con superficies inanimadas. Como

antibacterial

resultado de dicha evaluación

se obtuvo

presento poca inhibición esto quiere decir

poca inhibición de microorganismos en la

que tuvo un pequeño halo de inhibición. Con

zona donde se encontraba el sensidisco en

respecto al antiséptico supragel que se

comparación con los demás desinfectantes,

encontraba vencido en la zona donde se

lo que evidencia que el gel antibacterial no

encontraba el sensidisco creció una colonia

es

encima de este, mientras que en el supragel

microrganismos y/o bacterias, pero, hay

de

otras causa que puede provocar este

buenas

condiciones

se

apreció

la

tan

eficaz

con

cierto

tipo

de

según Cárdenas “Los

formación de un pequeño halo de inhibición

resultado ya que

alrededor del sensidisco el cual se había

geles antibacteriales que contienen menos

impregnado con el antiséptico.

del 60% de alcohol no tienen mucha

Las

personas

utilizan

el

gel

efectividad y algunos pueden llegar a

antibacterial, ya que es un compuesto

estimular la propagación de bacterias”. El

químico portátil, el cual no necesita agua

gel antibacterial usado tenía menos cantidad

para utilizarse y es muy práctico en

de alcohol, al haber menos alcohol menor

cualquier caso cotidiano que se presente.

será la inhibición por lo que el mecanismo

Este producto es un buen antiséptico ya que

de acción del alcohol es disolver lípidos y

elimina en gran porcentaje las colonias de

desnaturalizar las proteínas. Por lo tanto, si

bacterias que habitan en la piel, gracias a sus

se hubiese utilizado un gel antibacterial con

activos que en su mayoría son alcoholes

una concentración de alcohol (60-85%) se

“Los principios activos en la mayoría de los

hubiese evidenciado un halo de inhibición

geles sanitizantes son alcohol isopropílico,

mayor.

etílico o propílico” (Martínez, 2014). 8

El antiséptico supragel es utilizado

Al evaluar el supragel vencido en

especialmente en hospitales tanto para

esta muestra, no se evidencio halo de

visitantes, enfermos, enfermeras

y los

inhibición, ya que según (Universidad

los

Católica de Chile) Los desinfectantes y

microorganismos que existen no lleguen a

antisépticos deben usarse respetando las

heridas abiertas y propaguen enfermedades.

instrucciones del fabricante respecto a

Es un antiséptico en gel para manos que

duración del producto, condiciones de

combina el poder de los dos microbicidas

conservación, tiempo de contacto y dilución.

más usados y reconocidos en antisepsia de

Lo anterior quiere decir que el antibiótico

manos, la Clorhexidina y el Alcohol

deja de tener sus efectos potenciales al pasar

Isopropílico, junto con agentes emolientes y

la duración del producto por ello su

humectantes

para

mecanismo de acción no se hace eficaz.

microbicida

superior

mismos

médicos,

para

que

brindar

eficacia

cuidando



y

Frotis de herida:

manteniendo la integridad de la piel. su

La muestra de herida fue tomada de

mecanismo de acción se basa en la

un paciente en el hospital universitario con

destrucción y precipitación de la membrana

un hisopo y se transportó con una solución

celular

de

salina hacia el laboratorio. Esta muestra se

Clorhexidina, por otro lado, también se basa

inoculo mediante la técnica de siembra

en

masiva en agar nutritivo luego se impregno

la

por

su

alto

contenido

desnaturalización

de

proteínas

celulares y en la disolución de lípidos esto es

el

gracias al contenido de alcohol, por lo tanto,

Macroscópicamente se observó viraje en el

es un bacteriostático (Cárdenas, 2014)

medio de cultivo agar nutritivo cambio de

En el caso del antiséptico supragel en

sensidisco

con

isodine

solución.

amarillo a verde grisáceo al igual que las

buenas condiciones (aun no vencido) se

colonias.

presentó un halo de inhibición, esto debido a

Pseudomonas

que el supragel tiene un rápido efecto del

microscópicamente

espectro del antimicrobiano del alcohol

resultado una (Gram Negativa). Al observar

isopropilico, además del mecanismo de

la zona donde se encontraba el sensidisco

acción de la clorhexidina, por ello se

impregnado del antiséptico isodine solución,

evidencio la eficacia del antiséptico al

se apreció que no había colonias cerca al

evaluarlo con el frotis de piel. 9

Mostrando spp,

la

una cual

posible fue

mostrando

vista como

sensidisco, como tal no se observó un gran

por bacterias Gram positivas y Gram

halo.

negativas, algunos virus y hongos. Además, Uso en piel o mucosa, (isodine

brinda una acción antiséptica inmediata

solución antiséptica iodopovidona) es un

como: auxiliar en aftas, higiene bucal y

microbicida

y

halitosis por alcohol o tabaco. Es una

prolongada contra bacterias, virus, hongos y

solución microbicida de acción inmediata

protozoarios. Es un microbicida universal de

que

acción inmediata que se inicia 15 segundos

estructurales

después de haberse aplicado y destruye

microbianas. Y prolongada, auxiliar en la

bacterias (Gram positivas y gramnegativos)

desinfección de boca y garganta causada por

(BOEHRINGER, S.A).

bacterias, algunos virus y hongos. Su acción

de

acción

inmediata

destruye

por

oxidación

y enzimáticas

de

proteínas células

se inicia en 15 segundos y ayuda a destruir los microorganismos que se encuentran 

Frotis de garganta:

comúnmente en boca y garganta (Informed

La muestra de garganta se inoculo en

S.A). Teniendo en cuenta que se rego una

el medio de cultivo agar nutritivo por la masiva.

gota de isodine bucofaríngea en el medio de

Macroscópicamente se observaron colonias

cultivo agar nutritivo donde se encontraba la

pequeñas de color amarillo. En cuanto a la

muestra de frotis de garganta el resultado

sensibilidad

microorganismos

obtenido es que presento un halo de

presentes en la muestra de frotis de garganta

inhibición mayor que los demás antisépticos

al antiséptico isodine bucofaríngeo, se

y

apreció la formación de un gran halo de

bucofaríngeo cumplió con su efectividad de

inhibición

del

antiséptico frente a la muestra tomada de

antiséptico. Hay que tener en cuenta que una

una de las compañeras con problemas en la

gota del antiséptico alcanzo a caer en el

garganta, cumplió su mecanismo de acción

medio de cultivo por ello se presentó un halo

oxidando las proteínas estructurales de los

de ese tamaño y no se utilizó el sensidisco,

microorganismos

por el exceso de antiséptico.

destruyéndolos. La concentración y la

técnica

de

de

siembra

los

alrededor

de

la

gota

desinfectante

usados.

allí

El

isodine

presentes

y

cantidad fueron un factor determinante para

Isodine Bucofaingeo es auxiliar en la

presenciar un halo de este tamaño.

desinfección de boca y garganta, causadas 10

ácido o neutro es un oxidante fuerte y destruye a las bacterias” (Láñes, 1998).

Evaluación de la sensibilidad de la muestra al desinfectante

En la práctica del laboratorio se 

evaluó el hipoclorito de sodio sobre los

Frotis de manija de taxi:

La muestra del objeto inanimado (manija de

microorganismos presentes en esta muestra

la puerta de taxi) se inoculo en el medio de

de frotis de manija de la puerta de un taxi;

cultivo agar nutritivo por la técnica de

como

siembra masiva. Macroscópicamente se

mantiene en constante contacto tanto con la

observaron colonias de color amarillo,

piel como polvo, etc. Lo que da a lugar que

naranja y crema, todas de consistencia

en él se encuentre microbiota transitoria y

cremosa. Para evaluar la sensibilidad de los

por ello en el agar se halla observado

microorganismos presentes en la muestra del

crecimiento de colonias.

sabemos

este

objeto

inanimado

objeto inanimado se utilizó el desinfectante

Según Estrela y Cols “las acciones

hipoclorito de sodio. A pesar de que no se

del hipoclorito de sodio operan mediante

vio un halo de inhibición, se evidencio en la

tres mecanismos: saponificación, donde

placa que las colonias no crecieron alrededor

actúa como un solvente orgánico que

del sensidisco lo que quiere decir que el

degrada los ácidos grasos hacia sales ácidas

hipoclorito hizo efecto.

grasosas (jabón) y glicerol (alcohol), reduce la

Según una investigación realizada

tensión

superficial

de

solución

por la ONU las manos son la parte del

remanente.

cuerpo más contaminada, y estas entran en

hipoclorito de sodio neutraliza aminoácidos

contacto con las perillas a diario, lo que

formando agua y sal. Cloraminación, la

provoca

bacterias

reacción entre el cloro y el grupo amino

transitorias, la mayoría de personas utilizan

forma cloraminas que interfieren en el

el hipoclorito para desinfectarlas, pero, ¿que

metabolismo celular. El cloro posee una

permite al hipoclorito ser tan eficaz? Según

acción antimicrobiana inhibiendo enzimas

el

esenciales de las bacterias por medio de

que

se

microbiólogo

localicen

Láñez

“El

efecto

Neutralización,

la

donde

el

oxidación.

desinfectante se debe a la liberación de cloro libre (Cl2); a su vez, el Cl2 reacciona con el

Al evaluar el efecto del desinfectante

agua para dar ácido hipocloroso, que a pH

hipoclorito de sodio comúnmente llamado 11

cloro sobre la muestra se observó que no se

la siembra de frotis de manija de taxi se hizo

hizo un halo de inhibición, simplemente las

por la técnica de siembra masiva.

colonias no crecieron cerca al sensidisco. La presencia de cloro en el ácido hipocloroso interfiere en el metabolismo celular siendo responsable de la acción bactericida que se evidencio al no crecer colonias cerca de la zona del sensidisco teniendo en cuenta que

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