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• Barbara Cayupan Rodriguez

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BIOQUIMICA CLINICA 2012 PROTEINURIA La proteinuria es probablemente el signo más frecuente de que existe una enfermedad renal. En la actualidad, se usan tiras reactivas para detectar proteínas cualitativamente, como un screening y si resulta positivo, se debe cuantificar proteínas por el método de Exton-Rose e informar en g/L o en g/24 hrs. ANALISIS CUANTITATIVO: MÉTODO DE EXTON-ROSE. FUNDAMENTO: Las proteínas en presencia de ácido sulfosalicílico precipitan. La turbidez es proporcional a la cantidad de proteínas presentes en la orina. Reactivos necesarios : Acido sulfosalicílico 3 %

250 mL

NaCL 0.9 %

1000 mL

Estándar seroalbúmina 1 g/L

100 mL

Curva de calibración del método: a.

Diseñar y realizar una curva de calibración para proteína, de 5 puntos, en que las concentraciones varíen entre 0,1 y 1 g de proteína por litro, a partir de un estándar de albúmina de 1 g/L. Volumen de muestra = 0,5 mL.

b.

Graficar : x = concentración de proteínas en g/L y = Absorbancia a 660 nm

c.

Calcular el factor de calibración ( pendiente) en g de proteínas por litro .

Curva de calibración para proteínas. Método Exton-Rose Tubo: Estándar seroalbúmina 1g/L mL Suero fisiológico mL Acido sulfosalicílico 3 % mL Agitar. Esperar 10 min a t0 ambiente. Leer Absorbancia a 660 nm Concentración de proteína en g/L

Blanco ---0.5 2.5

1

2

3

4

5

2.5

2.5

2.5

2.5

----2.5

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

Una vez obtenido el valor del Factor de calibración K ( pendiente de la recta ), calcular la concentración de proteína de la muestra de orina (proteinuria) Concentración de proteína en la muestra = Absorbancia de la muestra / K

Curva de calibración con mitad de volumen.

BIOQUIMICA CLINICA 2012 Se usará para el práctico la mitad de los volúmenes calculados para la Curva de Calibración Tubo: Estándar seroalbúmina 1g/L mL Suero fisiológico mL Acido sulfosalicílico 3 % mL Agitar. Esperar 10 min a t0 ambiente.

Blanco ---0.25 1.25

1

2

3

4

5

1.25

1.25

1.25

1.25

----1.25

0

0.2

0.4

0.6

0.8

1.0

Leer Absorbancia a 660 nm Concentración de proteína en g/L

Procedimiento para proteinuria (con mitad de volumen En cada uno de dos tubos, (muestra problema; blanco de la reacción) colocar los siguientes reactivos :

Orina mL Suero fisiológico ( NaCL 0.9 %) mL Acido sulfosalicílico 3 % mL Agitar. Esperar 10 min a t0 ambiente.Leer Absorbancia a 660 nm

Blanco ---0.25 1.25

Muestra 0.25 ---1.25

Agitar por inversión, esperar 10 min. y leer la absorbancia del tubo problema a 660 nm, ajustando el cero del espectrofotómetro con el blanco de la reacción.

Si la orina es muy

coloreada se prepara un blanco de muestra de acuerdo a la siguiente técnica: 0.25

mL de orina

1.25

mL de suero fisiológico

Continuar con la técnica descrita anteriormente.