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• Victor Perez

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PIPETAS Definición Tipos Tecnicas de pipeteo Pipeteadores MICROPIPETAS Introducción histórica Funcionamiento de la micropipeta Eleccion de las puntas Pautas y técnicas de pipeteo Consejos de pipeteo para diferentes compuestos Evitar la contaminación Enfermedades laborales Calibración de las micropipetas - Exactitud - Precision Tipos de micropipetas, según: - Mecanismo interno de funcionamiento - Regulación de volumen - Nº de canales - Modo de funcionamiento

PIPETAS Definición Tipos Tecnicas de pipeteo Pipeteadores

Definición Aparato volumétrico para transferir volúmenes predeterminados de líquidos. Se diferencia de un dispensador en que la pipeta no tiene una unión fija a un recipiente de reserva. Las primeras herramientas que se usaron para el manejo preciso de líquidos fueron tubos cilíndricos de cristal con uno de los extremos mas estrecho, llamados pipetas. En estas pipetas se aspira el líquido, al principio con la boca, y se dispensa por gravedad Tipos de Pipetas Actualmente las hay de cristal y de plástico y son básicamente de dos tipos: - Aforadas o volumétricas: Pipetas de alta precisión. Tienen una ampolla calibrada para un volumen único. El volumen que contiene la ampolla (hasta la marca de enrase) es el volumen que mide la pipeta. Los volúmenes típicos que pueden medir son 10, 25 y 50 mL. Pueden tener una o dos marcas de enrase. - Graduadas: Son rectas y están calibradas. Pueden medir volúmenes intermedios entre sus volúmenes máximo y mínimo aunque con menos precisión que las pipetas aforadas. A su vez la pipetas graduadas pueden ser de dos tipos: • Mohr: Las marcas de la calibración se extienden solo a lo largo del cilindro sin incluir la punta o estrechamiento del extremo • Serológicas: Las marcas de la calibración se extienden a lo largo de toda la pipeta incluyendo la punta * Pipetas de soplado "Blow out". Se necesita soplar después de pipetear para dispensar el liquido restante, ya que forma parte del volumen a dispensar

- Hay otros tipos de pipetas que se utilizan para transferencia de líquidos de forma no precisa: • Pipetas Pasteur o de transferencia Pipeta sin calibración para transferir pequeños volúmenes. Se usa junto con una pequeña ampolla

• Pipetas de aspiración Pipetas sin calibración que se usan para aspirar líquidos mediante sistemas de vacio PIPETAS - Técnicas de pipeteo Pipetas Volumétricas y Graduadas • Colocar el pipeteador en la boca de la pipeta • Colocar el otro extremo de la pipeta en el líquido que se quiere transferir. Hacerlo subir lentamente por el interior de la pipeta aplicando la presión negativa necesaria a través del pipeteador que estemos usando • Subir el líquido por encima del nivel deseado • Dejar caer el líquido hasta que el fondo del menisco se alinee con el nivel deseado en la pipeta • Tocar con la punta de la pipeta el interior del recipiente de partida para dejar cualquier gota adherida al exterior de la pipeta • Transferir el líquido al segundo recipiente tocando con la punta las paredes del mismo para facilitar la salida del líquido • En las pipetas aforadas • No soplar para sacar el líquido restante de la pipeta. Salvo en pipetas de soplado "blow out" Pipetas Pasteur o de transferencia • Colocar la ampolla en la boca de la pipeta, si no es de plástico. • Presionar la ampolla y colocar el otro extremo de la pipeta en el líquido que se quiere transferir. Hacerlo subir lentamente por el interior de la pipeta aplicando la presión negativa necesaria soltando lentamente la ampolla hasta alcanzar aproximadamente el volumen dispensado • Transferir el volumen de líquido al segundo recipiente el volumen de líquido deseado presionando de nuevo la ampolla de la pipeta

PIPETAS - Pipeteadores Como norma general y básica se recomienda no usar la boca para pipetear. De esta forma se evitan accidentes con sustancias peligrosas. Por este motivo se han usado diferentes tipos de aparatos que permiten manejar la pipeta sin tener contacto con el líquido que hay en su interior Pipeteadores manuales: - Pera de goma

La pipeta se une al aparato a traves del ajuste de la parte inferior (I) Consta de 3(tres) guías, y en cada una se encuentra una válvula la que al presionar se abre y al soltar se cierra. La válvula de la parte superior de la pera permite hacer un vacío y deformar la pera de goma (A), la válvula que se encuentra en la base de la pera, permite comunicar el vacío a la pipeta y de esta forma se puede aspira el líquido (S)y la válvula que se encuentra en la ramificación lateral permite la entrada del aire y la descarga del líquido que sostiene la pipeta (E) - Pipeteadores de plástico con rueda manual y válvula de vaciado

La pipeta se une al aparato a través de un ajuste de goma en la parte inferior (G). Una rueda en la parte superior crea vacío que se transmite a través del ajuste de goma a la pipeta, permitiendo aspirar el líquido (R) Una válvula de vaciado colocada en el lateral de la pipeta permite la entrada de ire y la descarga del líquido (V)

Pipeteadores automáticos

En los pipeteadores automáticos, la aspiración y dispensación de líquidos se realiza de automáticamente, pulsando un botón. De esta forma se consigue agilizar todo el proceso de pipeteado y disminuir la carga de trabajo.

La pipeta se une al aparato a través de un ajuste de silicona. En este ajuste se inserta un filtro hidrofobico para evitar que un accidente en el pipeteo dañe el aparato

La aspiración y el vaciado de la pipeta se consiguen presionando los botones situados en la parte anterior del mango

En la mayoría de los modelos podemos ajustar la potencia de aspiración y vaciado, lo que nos permite un pipeteo mas preciso y rápido

La energía eléctrica necesaria para su funcionamiento se toman de baterías recargables

El bajo peso del aparato es fundamental para un pipeteo cómodo con estos aparatos

MICROPIPETAS Introducción histórica Funcionamiento de la micropipeta Eleccion de las puntas Pautas y técnicas de pipeteo Consejos de pipeteo de diferentes compuestos Evitar la contaminación Enfermedades laborales Calibración de las micropipetas - Exactitud - Precision Tipos de micropipetas, según: - Mecanismo interno de funcionamiento - Regulación de volumen - Nº de canales - Modo de funcionamiento

MICROPIPETAS - Introducción histórica El desarrollo de la investigación biológica, sobre todo en Biología Molecular hizo necesario el manejo de volúmenes muy pequeños de reactivos, del orden de microlitros. El pipeteado de microlitros era un proceso incómodo y engorroso en el que se utilizaban varios tipos de capilares de vidrio y succión con la boca. Un pipeteado preciso requería experiencia y dependía del usuario y de la estructura de la pipeta. Las roturas, la imprecisión, el peligro de aspiración, la esterilidad y la limpieza eran un problema.

En 1956, un joven médico, Heinrich Schnitger, se incorporó al grupo de Theodor Bücher en el Instituto de Bioquímica de la Universidad de Marburgo, en Alemania. Schnitger empezó inmediatamente a encontrar pegas al micropipeteado. Acabó desapareciendo del laboratorio un par de días y regresó con una jeringuilla de cristal modificada que iba equipada con un pistón accionado por resortes y un tope regulable para establecer el volumen de fluido. La aguja de la jeringuilla fue sustituida por una punta de plástico extraíble, obtenida de tuberías de ese material. Un amortiguador de aire separaba el fluido del pistón de la jeringuilla que confinaba el fluido a la punta de plástico. Para pipetear otra solución, sólo había que sustituir la punta fácilmente extraíble por otra, evitando así el lavado y las contaminaciones. Esta función fue una gran innovación que acabaría catapultando a la micropipeta como instrumento de uso mundial. En los meses siguientes, Schnitger desarrolló el dispositivo experimental y lo convirtió en un prototipo de micropipeta. Se adoptaron medidas para garantizar el movimiento hermético del pistón y se añadió un segundo resorte coaxial, que permitía empujar el pistón con mayor resistencia y rebasar así el punto de salida para expulsar el fluido residual de la punta. De este modo se aseguró un pipeteado preciso y fácilmente reproducible de pequeños volúmenes. Con el nuevo instrumento, el personal poco experimentado podía manejar microlitros de soluciones con facilidad y exactitud. En 1957, sólo seis meses después de haber fabricado el primer prototipo, Schnitger solicitó una patente alemana titulada: Dispositivo para un pipeteado rápido y preciso de pequeños volúmenes líquidos, que se concedió formalmente en 1961. La patente describía la función esencial al completo, que todavía se encuentra en versiones recientes de la micropipeta. La patente fue concedida en exclusiva a la empresa de equipos de laboratorio Eppendorf, de Hamburgo, que modificó la obra original de Schnitger para su fabricación en masa. Fue de especial importancia la mejora de la punta de plástico extraíble, que fue el elemento más revolucionario de la micropipeta. En una primera fase, Schnitger diseño las puntas para que se hicieran de teflón; presentaban una menor retención de líquidos y permitían un pipeteado muy preciso, pero habían de ser limpiadas y reutilizadas debido a su coste. En los años sesenta, con la llegada del polipropileno traslúcido, Eppendorf presentó la punta de polipropileno (PEP). Era barata y desechable, podía codificarse por colores para diferentes rangos de volumen, y no tardó en convertirse en la punta estándar. Como adición importante, Eppendorf creó las cubetas de centrífuga de PEP de 1,5 mililitros y 0,75 mililitros con tapón a presión como recipientes apropiados para transferir fluidos con la micropipeta (tubos "eppendorf"), lo cual impresionó rápidamente a laboratorios de todo el mundo. Aunque el invento de Schnitger eliminó la succión con la boca de micro cantidades,

varios problemas quedaban sin resolver. El principal es que los científicos tenían que usar pipetas separadas para cada volumen.

Fig: Micropipetas de las primeras series de producción en 1957-1960 Aprovechando esta laguna, Warren Gilson con la ayuda de otros inventores (Eric Marteau d'Autry) diseñó en 1972 la pipeta ajustable que revolucionó el campo de las ciencias de la vida (Patente U.S.A 3827305, 1974). En realidad, la modificación que dio lugar a este nuevo dispositivo, se basó en un aparato previo realizado por la compañía de Warren Gilson (Gilson Medical Electronics), el respirómetro de Warburg modificado. Una máquina utilizada para medir volúmenes respiratorios que utilizaba un control digital que fue adaptado para usarse en la nueva pipeta Referencias: - When a common problem meets an ingenious mind. Martin Klingenberg (EMBO J.,6: 797-800). Traducido en: EL PAÍS, miércoles 21 de marzo de 2007 The Art of the Pipet. Jay A. Martin (BioMedNet: Posted April 13, 2001 · Issue 100) MICROPIPETAS - Funcionamiento de la micropipeta La micropipeta puede ser de dos tipos según su funcionamiento: - De desplazamiento de aire. La pipeta estándar. El pistón no está en contacto con el liquido, sino que queda una cámara de aire entre el pistón y el liquido

AccuTel Laboratories © Fig: Esquema del interior de una pipeta de desplazamiento de aire donde entre otros se distingue claramente el pistón y la cámara de aire.

Fig: Esquema del funcionamiento de una pipeta de desplazamiento de aire 1: Para aspirar líquido se baja el pistón a su posición más baja y se introduce la punta de la pipeta en el líquido que se quiera aspirar 2 y 3: Se sube el pistón hasta la posición determinada para la cantidad a pipetear. Detrás de la cámara de aire el líquido sube en la misma proporción que ha subido el pistón. 4: Se dispensa en el recipiente de dispensación volviendo a bajar el pistón, con lo cual se desplaza la cámara de aire y a su vez se hace salir el liquido aspirado anteriormente - De desplazamiento positivo: Para líquidos viscosos o volátiles. El pistón contacta directamente con el líquido

Fig: Esquema del funcionamiento de una pipeta de desplazamiento positivo 1: Para aspirar líquido se baja el pistón a su posición más baja. Al bajar el pistón de la pipeta, bajamos el pistón de la punta. Se introduce la punta de la pipeta en el líquido que se quiera aspirar 2 y 3: Se sube el pistón hasta la posición determinada para la cantidad a pipetear. Detrás del pistón de la punta el líquido sube en la misma proporción que ha subido el pistón y en contacto con él. 4: Se dispensa en el recipiente de dispensación volviendo a bajar el pistón de la pipeta, con lo cual se baja el pistón de la punta y a su vez se hace salir el liquido aspirado anteriormente MICROPIPETAS - Elección de la punta La punta es el accesorio imprescindible y fundamental de la micropipeta tal como hemos visto en la introducción histórica. Micropipeta y punta forman el sistema completo. La elección de la punta es por tanto crucial para obtener una media exacta y precisa con la pipeta. A la hora de elegir una punta no podemos quedarnos con las apariencias. Defectos como deformaciones, arañazos, burbujas de aire, curvaturas, impurezas pueden influir en los resultados del pipeteo. Por ejemplo, usar una punta curvada puede provocar por si solo un error del 10% en la exactitud del pipeteo. Si el orificio de la punta no está bien centrado, la dispensación del líquido puede verse afectado significativamente. Si no se usa polipropileno puro de grado Premium o el molde y el procesamiento no cumplen con los mas altos estándares, parte del líquido queda retenido en la punta como gotitas, con lo que se originan errores en los resultados del pipeteo. Guía para la selección de puntas: - Ajuste perfecto a la base de la micropipeta - Fabricadas con polipropileno virgen de alta calidad

- Libre de impurezas o partículas - Uniformes en tamaño y forma - Orificio centrado - Libre de metales, como cadmio - Libre de defectos o deformaciones - Resistentes a productos químicos - Estables térmicamente - Autoclavables - Trazables. Nº de lote e identificación del molde en cada punta - Compuestos a pipetear MICROPIPETAS - Pautas generales y Técnicas de pipeteo Pautas generales - Revisar la pipeta al inicio del día de trabajo para retirar suciedad y polvo - Ajustar el volumen en el rango especificado para la pipeta - Sujetar la pipeta de forma que el reposamanos de la pipeta descanse sobre el dedo índice - Para maximizar exactitud, la pipeta, la punta y el líquido deben estar a la misma temperatura - Comprobar que las puntas son las adecuadas para la pipeta - Usar las puntas una sola vez - Enjuagar la punta varias veces en el liquido a pipetear antes del pipeteo para mejorar la exactitud - No volver la pipeta del revés, de forma que el liquido de la punta afecte al interior de la pipeta - Evitar contaminaciones de las puntas usando el eyector y los guantes - Guardar las pipetas hacia arriba - Calibrar las pipetas de forma regular, al menos una vez al año Técnicas de pipeteo - Pipeteo Normal (forward pipetting) Recomendada para soluciones acuosas como tampones, ácidos diluidos y bases

1. Regular el volumen y presionar el émbolo hasta el primer tope Introducir verticalmente la punta en el líquido. Ver la profundidad adecuada en la siguiente tabla Volumen (μL)

Profundidad óptima de inmersión (mm)

0,1 - 1

1

1- 100

2-3

101 - 1000

2-4

1001 - 10000

3-6

2. Soltar lentamente el émbolo hasta su posición inicial. Sacar la punta del líquido tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de líquido del exterior de la punta 3. Dispensar el líquido en el recipiente presionando el embolo hasta el primer tope y después hasta el segundo. De esta forma vaciamos totalmente la punta 4. Sacamos la punta del recipiente tocando las paredes del mismo y dejamos el émbolo en su posición inicial - Pipeteo Reverso (reverse pipetting) Esta técnica se usa para pipetear soluciones con una gran viscosidad o tendencia a formar espuma. Sólo se puede realizar con pipetas de desplazamiento de aire

1. Regular el volumen y presionar el émbolo hasta el segundo tope Introducir verticalmente la punta en el líquido. Ver la profundidad adecuada en

la siguiente tabla Volumen (μL) 0,1 - 1

Profundidad óptima de inmersión (mm) 1

1- 100

2-3

101 - 1000

2-4

1001 - 10000

3-6

2. Soltar lentamente el émbolo hasta su posición inicial. Sacar la punta del líquido tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de líquido 3. Dispensar el líquido en el recipiente presionando el embolo hasta el primer tope. Este volumen es el volumen ajustado. Mantener el émbolo fijo en esta posición. Quedará algún liquido en la punta que no se debe dispensar. 4. El líquido restante en la punta se puede devolver al contenedor inicial o tirarlo junto con la punta. 5. Dejamos el émbolo en su posición inicial - Pipeteo Repetitivo (Repetitive Pipetting) Esta técnica está especialmente indicada para pipeteo repetido del mismo volumen.

1. Regular el volumen y presionar el émbolo hasta el segundo tope Introducir verticalmente la punta en el líquido. Ver la profundidad adecuada en la siguiente tabla Volumen (μL)

Profundidad óptima de inmersión (mm)

0,1 - 1

1

1- 100

2-3

101 - 1000

2-4

1001 - 10000

3-6

2. Soltar lentamente el émbolo hasta su posición inicial. Sacar la punta del líquido tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de líquido 3. Dispensar el líquido en el recipiente presionando el émbolo hasta el primer tope. Este volumen es el volumen ajustado. Mantener el émbolo fijo en esta posición. Quedará algún liquido en la punta que no se debe dispensar. Este líquido se

puede echar en el recipiente original o desechar con la punta. 4. Repetimos los pasos 2 y 3 - Pipeteo de muestras heterogéneas Esta técnica está especialmente indicada para pipeteo de muestras viscosas en las que no se puede lavar previamente la punta con la muestra y se necesita pipetear el volumen total disponible. Por ejemplo, sangre o suero

1.

Regular el volumen y presionar el émbolo hasta el primer tope Introducir verticalmente la punta en el líquido. Ver la profundidad adecuada en la siguiente tabla

2.

Volumen (μL) 0,1 - 1

Profundidad óptima de inmersión (mm) 1

1- 100

2-3

101 - 1000

2-4

1001 - 10000

3-6

Soltar lentamente el émbolo hasta su posición inicial

3+4 No sacar la punta del líquido. Volver a presionar el émbolo hasta el primer tope y dejar que vuelva a su posición inicial. Sacar la punta del líquido tocando las paredes del recipiente para dejar los excesos de líquido 5.

Dispensar el líquido en el recipiente presionando el émbolo hasta el segundo tope vaciando completamente la punta

6.

Dejamos el émbolo en su posición inicial

MICROPIPETAS - Consejos de pipeteo para diferentes compuestos Solución/Compuest o

Muestras

Pipeta

Punta

Técnica Comentario de s pipeteo

Solución acuosa

Tampones, soluciones Desplazamient Estándar salinas o de aire diluidas

Normal

Solución viscosa

Soluciones Desplazamient Estándar ó de

Revers Pipetear

de o de aire orificio ancho o proteínas y Desplazamient Desplazamient ácidos o positivo o positivo nucleicos, glicerol, Tween 20/40/60/8 0

Compuestos volátiles

Metanol, hexano

despacio para evitar la formación de burbujas

Pipetear rápido para evitar la evaporación Desplazamient . Con filtro o de aire Puntas con Desplazamient Normal Desplazamient filtros de o positivo o positivo carbono evitan que el vapor entre en las pipetas

Para ADN genómico puntas de orificio ADN Desplazamient Con filtro o de ancho se Soluciones de genómico, o de aire orificio ancho Normal pueden usar nucleótidos productos Desplazamient Desplazamient para de PCR o positivo o positivo evitar roturas por presión mecánica MICROPIPETAS - Evitar la contaminación - De la pipeta a la muestra Una pipeta contaminada o puntas contaminadas pueden causar la contaminación de las muestras. Prevención: • Usar puntas o puntas con filtro esterilizadas. Si es posible autoclavar la pipeta • Cambiar la punta después de pipetear cada muestra - De la muestra a la pipeta Las muestras o los aerosoles de las muestras pueden contaminar la base de puntas de la pipeta. Prevención:

• Mantenerla pipeta en posición vertical mientras se pipetea para evitar que el líquido entre en el cuerpo de la pipeta. • Soltar el émbolo lentamente • Para evitar contaminación por aerosoles, usar puntas con filtro o pipeta y puntas de desplazamiento positivo • Guardar la pipeta en posición vertical - De muestra a muestra (contaminación cruzada) Las restos de la muestra A se pueden mezclar con la siguiente muestra en ser pipeteada y dar lugar a falsos resultados.Prevención: • Cambiar la punta después de cada muestra • Si se sospecha que la pipeta está contaminada, autoclavar o limpiar la pipeta MICROPIPETAS - Enfermedades laborales En aquellas personas que pipetean manualmente de forma habitual aparecen con cierta frecuencia dolores en brazos y manos. Estos dolores está ocasionados fundamentalmente por dos patologías: el síndrome del túnel carpiano y tendovaginitis: - Síndrome del túnel carpiano: Durante el pipeteo se usan diversos músculos para de los dedos, mano y antebrazo para mover el émbolo y el eyector de puntas. Estos músculos trasmiten el movimiento a través de tendones que corren a través de un estrecho túnel, el túnel carpiano. Por este tunel accedn a la mano, ademas de los tendones que mueven los dedos, vasos sanguíneos y nervios. Los tendones se pueden inflamar debido a un exceso de trabajo con la mano o a un trabajo realizado de forma inadecuada. De esta forma presionan al nervio contra el ligamnento, provocando dolor en los dedos, especialmente en el pulgar. Esta es una patología muy seria, ya que está muy extendida entre los trabajadores de los laboratorios con un coste en tratamiento medico de aproximadamente 25.000$ por persona y año.

© 2009 Nucleus Medical Art, In - Tendovaginitis Es una enfermedad con síntomas parecida a los del síndrome del túnel carpiano. Pero en este caso la inflamación es del tendón y de la vaina que lo protege. - Molestias en el hombro y en las vértebras lumbares Son ocasionadas por una mala posición durante el pipeteo que provoca posiciones forzadas

Medidas preventivas - Utilizar una pipeta adecuada • Ligera • Con Funcionamiento muy suave, que no necesite excesiva presión en el embolo ni en el eyector de puntas para funcionar • Ergonómica • Mango diseñado para permitir que los dedos mantengan una disposición curva y flexible, permaneciendo relajados • Apoyo suave y cómodo de la pipeta sobre el dedo índice que permite relajar la mano en los momentos que no se esté pipeteando - Organizar el puesto de trabajo • Altura de la silla adecuada frente a la superficie de trabajo que permita trabajar con el codo apoyado en la mesa • Procurar que la mano siempre trabaje por debajo de los hombros • Colocar los utensilios de forma que el movimiento que se necesite hacer sea el mínimo posible - Alternar el pipeteo con otros trabajos - Tomar descansos breves que permitan relajar las manos y brazos

MICROPIPETAS - Calibración de las micropipetas General - Equilibrar la temperatura de la pipeta con la temperatura de la sala de calibración dos horas antes de calibrar - Calibrar en el volumen máximo y en el volumen mínimo o en un volumen 10% menor que el máximo - Realizar 10 pipeteos con ambos volúmenes. - Calcular la exactitud y la precisión usando las formulas apropiadas - Comprobar que los resultados están entre los límites dados por el fabricante de la pipeta Pipetas multicanales - Realizar los 10 pipeteos con los dos canales de los extremos Fórmulas para analizar los resultados de las medidas Conversión de masa a volumen V= ( w + e ) x Z V= volumen (mL) w=peso (weight) (mg) e= perdida por evaporación (mg) z= factor de conversión para mg/mL Nota: La pérdida por evaporación puede ser significante con pequeños volúmenes. Para determinar la pérdida de masa, dispensar agua en el recipiente de pesado, tomar nota de la lectura y empezar a tomar el tiempo con un cronómetro. Comprobar cuanto decrece la lectura en 30 segundos. Comparar esto con el tiempo de pipeteo. Normalmente, la duración de un pipeteo son 10 segundos y las masa perdida 2 μg. Si se usa una trampa de evaporación o una tapa, no es necesario realizar la corrección de evaporación Exactitud: Error Sistemático La exactitud es la diferencia entre el volumen dispensado y el seleccionado en una pipeta A=

- VS

A= Exactitud (accuracy) =Volumen medio Vs=volumen seleccionado En un certificado de calibración la exactitud se expresa como un valor relativo ACC%= 100% x A/Vs Precisión: Error Aleatorio La precisión se refiere a la repetitibilidad de los pipeteos. Se expresa como

desviación estándar (s) o coeficiente de variación (cv). Además de por la propia pipeta, la práctica en el laboratorio, y la experiencia del usuario son también factores importantes que afectan a la precisión.

Tablas de conversión

Precision y exactitud

Exacto, pero no preciso: El volumen medio se corresponde con el valor esperado, pero los diferentes pipeteos varían mucho entre sí. Preciso, pero no exacto: El volumen medio difiere del esperado, pero los diferentes pipeteos tienen poca variación entre sí Exacto y preciso: El volumen medio se corresponde con el valor esperado y los diferentes pipeteos no varían entre sí MICROPIPETAS - Tipos de micropipetas Según mecanismo interno de funcionamiento: - Pipetas de desplazamiento de aire - Pipetas de desplazamiento positivo Según la posibilidad de regulación del volumen - Pipetas de volumen fijo: Solamente pueden dispensar un volumen determinado - Pipetas de volumen variable: Se puede ajustar el volumen a dispensar Nota: Las micropipetas pueden dispensar un intervalo de volúmenes de 0,1mL a 5,0mL. Este rango se suele dividir en al menos 4 intervalos. Para cada uno de esos intervalos se utiliza una micropipeta: 0,5-10 uL 10-100 uL

100-1000 uL 1-5mL Según el número de canales de dispensación: - Pipetas de volumen fijo: Solamente pueden dispensar un volumen determinado - Pipetas de volumen variable: Se puede ajustar el volumen a dispensar • 8 canales: para trabajar con placas de 96 pocillos • 12 canales: para trabajar con placas de 384 pocillos • 16 canales: para trabajar con placas de 1536 pocillos • 48 canales (16x3): para trabajar con placas de 1536 pocillos, microarrays • 64 canales (16x4): para trabajar con placas de 1536 pocillos, microarrays Según el modo de funcionamiento: - Manual: El ajuste del volumen, la aspiración y la dispensación se hacen manualmente - Electrónicas: El ajuste del volumen, la aspiración y la dispensación se hacen de forma electrónica • Permiten realizar todas las técnicas de pipeteo, incluido el repetitivo de forma cómoda y precisa • La fuerza necesaria para el manejo es mínima • Los errores de pipeteo disminuyen