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Manitol Salado Agar Uso:

Medio de cultivo selectivo

Fundamentos

Manitol: Es el hidrato de carbono fermentable

Formula

Su fórmula cumple con los requerimientos de la Armonización de Farmacopeas

Aislamiento y diferenciación de estafilococos.

Es un medio altamente selectivo por la alta concentración salina y diferencial debido a la capacidad de fermentación del manitol por los microorganismos

Las bacterias que crecen en un medio con alta concentración de sal y fermentan el manitol, producen ácidos, con lo que se modifica el pH del medio y vira el indicador de pH del color rojo al amarillo

Los estafilococos coagulosa positiva fermentan el manitol y se visualizan como colonias amarillas rodeadas de una zona del mismo color.

Suspender 111 g del polvo en 1 litro de agua purificada

Reposar 5 minutos y calentar con agitación frecuente, llevando a ebullición durante 1 o 2 minutos para disolución total.

Distribuir en recipientes apropiados y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15 minutos.

Enfriar y distribuir en placas de Petri estériles.

microorganismos fermentadores de manitol: colonias de color amarillo rodeadas o no de un halo amarillo

microorganismos no fermentadores de manitol: colonias del color del medio, rojas rodeadas o no de halo rojizopúrpura

Medio de cultivo deshidratado: color beige rosado, homogéneo, libre deslizamiento.

Medio de Cultivo preparado: color rojo.

Almacenamiento:

Medio de cultivo deshidratado a 10-35 ºC

Medio de cultivo preparado a 2-8 ºC

Procedimiento

Siembra: Sembrar en superficie un inóculo denso de la muestra por estría

Incubación: En aerobios, a 35-37 °C durante 18-24 hs. Si a las 24 horas las Placas presentan resultado negativo, incubar otras 24 horas.

Instrucciones

Interpretación de resultados

Características

Incubación durante 3 días a 32 °C, en aerobios.

Mac conkey Agar Uso:

Aislamiento de bacilos Gram negativos

Aerobios y anarobios facultativos

Fundamentos

Las peptonas aportan nutrientes necesarios para el desarrollo bacteriano

La lactosa es el hidrato de carbono fermentable disminuye el PH alrededor de la colonia (Color rojo neutro) Microorganismos no fermentadores de la lactosa producen colonias incoloras

Diferencia bacterias que usan o no lactosa en muestras químicas La mezcla de sales biliares y el cristal violeta inhiben el desarrollo de gran parte de la flora Gram positiva

Formula

Instrucciones

Interpretación de resultados

PH final 7.1 /0.2 Suspender 50 g de polvo por litro de agua destilada

Reposar por 5 min. Y mezclar hasta uniformar

Salmonella incoloras Shigella incoloras

Características

Escherichia coli color rojo con halo turbio Klebsiella pneumoniae color rosadas mucosas Medio preparado: rojo purpura

Almacenamiento:

Medio deshidratado: 10-35°C

Medio preparado: 2-8°C

Procedimiento

Siembra: Sembrar en superficie utilizando técnica de Pour Plate: sembrar 1 ml y agregar aprox. 15 ml de medio de cultivo fundido y enfriado a 45-50 ° C

Incubación: de 18-48 horas a 3537° C. en atmosfera aeróbica

Calentar suavemente y hervir de 1 a 2 min. Hasta disolver. Estelarizar en autoclave 121° C durante 15 min. Proteus mirabilis incolora Enterococus incoloras, diminutas y opacas

B Parker Agar Uso:

Fundamentos

Selectivo y diferencial para el aislamiento y recuento de estafilococos Peptona de caseína y el extracto de carne constituyen la fuente de carbono y nitrógeno

Formula

Instrucciones

Placas listas

Interpretación de resultados

Observar las características de las colonias

Características

Almacenamiento:

Medio de cultivo color amarillo

De 2-8°C

El extracto de levadura aporta vitaminas del complejo B La glicina y el piruvato de estafilococos. El agar es el agente solidificante Adición de la yema de huevo con telurito de potasio,

El teolurito de potasio y el cloruro de litio inhiben el desarrollo de la flora acompañante

Nutritivo Agar Uso:

Aislamiento y recuento de microorganismos con escasos requerimientos nutricionales.

análisis de alimentos, aguas y otros materiales de importancia sanitaria

Medio de cultivo nutritivo no selectivo

Fundamentos

el extracto de carne constituyen la fuente de carbono, nitrógeno y aportan nutrientes para el desarrollo bacteriano

El agregado de cloruro de sodio mantiene el balance osmótico y el agar es el agente solidificante,

permite una clara visualización de las reacciones de hemólisis,

Instrucciones

Colocar los frascos cerrados en baño maría y llevar a ebullición para fundir el medio de cultivo sólido contenido en los mismos.

Una vez que se ha fundido el medio de cultivo, retirar cuidadosamente los frascos del baño maría y dejar enfriar. Cuando alcanzan temperatura 45-50 ºC, abrirlos y distribuir aproximadamente 15 ml en placas de Petri estériles.

Preparación de agar Sangre: agregar 5-10 % de sangre ovina desfibrinada estéril (ReF Britasheep) al medio esterilizado, fundido y enfriado a 45-50 ºC. Homogeneizar y distribuir en placas de Petri estériles.

Interpretación de resultados

Hemólisis alfa: lisis parcial de los glóbulos rojos. Se observa un halo de color verdoso alrededor de la colonia en estudio. Es debido a la oxidación de la hemoglobina a metahemoglobina (compuesto de color verdoso) por el peróxido de hidrógeno generado por los microorganismos

Hemólisis beta: lisis total de los glóbulos rojos. Se observa un halo claro, brillante alrededor de la colonia en estudio

Hemólisis gamma: ausencia de lisis de los glóbulos rojos. El medio de cultivo no presenta modificaciones de color y aspecto alrededor de la colonia en estudio.

Características

Medio de cultivo color ámbar claro.

En caso de ser suplementado con sangre ovina: color rojo cereza.

Almacenamiento:

Medio de cultivo listo para usar en frascos a 10-35 ºC.

Medio de cultivo listo para usar en placas a 2-8 ºC

Procedimiento

En superficie: inocular directamente la muestra por estría.

En profundidad: inocular una alícuota de la muestra directa o de su dilución. Verter un volumen del medio de cultivo fundido y enfriado a 40-45°C. Homogeneizar mediante movimientos de vaivén y rotación. dejar solidificar

Formula

Incubación El tiempo, la temperatura, y la atmósfera de incubación, dependerán del microorganismo que se quiera recuperar

EMB Agar Uso:

Aislamiento de bacilos Gram positivos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales Es nutritivo por la presencia de peptona

Desarrollo de familias de las especies enterobacteriacae Los indicadores eosina y azul de metileno ejercen un efecto inhibitorio sobre una amplia variedad de bacterias Gram positivas

Instrucciones

Suspender 36 g de polvo en un litro de agua purificada

Calentar y llevar ebullición hasta su disolución total

Interpretación de resultados

Crecimiento de colonias con brillo metálico característico de E. coli

Crecimiento y colonias de color rosado: Microorganismo entérico Gram negativo Lactosa positivo.

Características

Cultivo deshidratado: color purpura

Cultivo preparado: color purpura vinoso

Almacenamiento:

Medio de cultivo deshidratado: 10-35°C

Medio de cultivo preparado:2-8°C

Procedimiento

Siembra: Estriado directo a partir de la muestra

Profundidad: Desarrollo de clamidosporas

Fundamentos

Pueden crecer especies de candida de color rosado y son puntiformes

Formula

Estilizar en autoclave 121° C DURANTE 15 Min. Distribuir en cajas de Petri estériles Crecimiento y colonias incoloras o ligeramente amarillas: Microorganismo entérico gram Negativo lactosa negativo