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Rosco Diagnostica Diatabs™- Instrucciones para uso Revisión: DBV0008A Fecha de publicación: 01.10.2003 Idioma: Español

Diatabs™ Para la identificación bacteriana Fabricante ROSCO Diagnostica A/S, Taastrupgaardsvej 30, DK-2630 Taastrup, Dinamarca, www.rosco.dk Uso previsto En procedimientos cualitativos para la detección in vitro de propiedades microbianas en la identificación de microorganismos. Diatabs se utiliza en los ensayos de identificación en forma de tabletas individuales. Principios del procedimiento Diatabs está disponible en dos modalidades: Diatabs para utilizar en placas de agar y Diatabs para disolver en líquido. La mayoría de las Diatabs permiten una ejecución rápida del ensayo utilizando reacciones enzimáticas cromogénicas y ensayos convencionales modificados. Las Diatabs para placas de agar detectan los patrones de sensibilidad naturales o los requisitos de factores de crecimiento. Tras la incubación, se examinan las placas y se mide el diámetro de las zonas de inhibición alrededor de la tableta comprimido para su interpretación con la tabla de zonas (sensibles/resistentes) de cada tableta. Los Diatabs para líquido están basados en las propiedades enzimáticas de los microorganismos detectados mediante diferentes sistemas de indicador. 1 Para más información sobre las Diatabs de identificación bacteriana, consulte la Guía de usuario Diatabs 2 en www.rosco.dk. Instrucciones de conservación 1) 2) 3)

A la recepción del producto consulte el símbolo de temperatura que figura en la etiqueta. Las Diatabs con un símbolo en la etiqueta de 2 °C - 8 °C deben conservarse en frigorífico y las Diatabs con un símbolo de 25 °C como temperatura máxima deben conservarse a temperatura ambiente. Si las Diatabs se conservan en el frigorífico, deberá dejarse que los viales alcancen la temperatura ambiente (durante 30 - 60 minutos) antes de proceder a su apertura para evitar así la formación de condensación en los mismos. Las Diatabs deben conservarse en los viales bien protegidos de la luz directa y de una humedad elevada. Si se suministra con material absorbente de la humedad (cápsula desecante), este deberá conservarse en el vial.

La fecha de caducidad de los viales sólo es válida si se conservan los viales cerrados a la temperatura prescrita. Reactivos Los Diatabs son tabletas de 6 ó 9 mm que se suministran en viales de 15, 25 ó 50 unidades. Las tabletas de 9 mm llevan impresos en ambas caras un código único de 5 caracteres. Las tabletas de 6 mm para su uso en agar presentan un código de color mientras que los Diatabs para disolver en líquido no llevan código. El usuario deberá registrar el contenido del tubo de ensayo cuando utilice más de una Diatabs. Precauciones Respetar las instrucciones para uso. Ninguno de las tabletas están previstas para uso en ensayos de sensibilidad. El rendimiento de las Diatabs depende no sólo del tipo específico de Diatabs sino también del inóculo y del tiempo de incubación utilizados así como de la interpretación del diámetro de la zona o del cambio de color. Los productos deberán ser manejados exclusivamente por técnicos que dispongan de la formación adecuada. Utilizar unas pinzas para manejar las Diatabs. Deberán tomarse precauciones frente a los riesgos microbiológicos esterilizando adecuadamente las tabletas, los recipientes, los medios y los tubos de ensayo tras su uso. Los productos Diatabs, tubo y las placas de agar con posibles patógenos se eliminan como residuos microbiológicos.

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Rosco Diagnostica Muestras Las muestras deben recogerse y manejarse de acuerdo con las directrices recomendadas y, además, deben ser un cultivo puro totalmente típico de la especie que se desea identificar.

Procedimiento Materiales suministrados: Diatabs del tipo indicado en la etiqueta del envase. Materiales necesarios pero no suministrados: Medios de cultivo, tubos de ensayo, reactivos, medios de control de calidad y equipos de laboratorio necesarios para realizar la identificación (p. ej., ansas para inoculación, bastoncitos de algodón, pipetas y recipientes para recogida).

I. Diatabs en agar Para la identificación puede ser útil la sensibilidad de los microorganismos aislados en muestras clínicas frente a agentes antimicrobianos o de otro tipo. Los microorganismos se pueden identificar y diferenciar midiendo el diámetro de la zona tras el cultivo con un inóculo estandarizado aplicado a un agar específico. I.1. Preparación del inóculo Suspender varias colonias morfológicamente similares de una placa de agar cultivada durante 18-24 h (no selectiva) en 4-5 ml de solución de NaCl al 0,9 % para obtener una turbidez similar a la del patrón McFarland 0,5. I.2. Inoculación Al cabo de 15 minutos, introducir un bastoncito de algodón estéril en la suspensión ajustada y eliminar el resto de inóculo del bastoncito presionando firmemente contra el interior del tubo. Al cabo de 15 minutos utilizar los bastoncitos para inocular el agar especificado en la Tabla 1. Inocular la superficie seca de la placa de agar pasando el bastoncito por toda la superficie. Dejar secar la superficie durante 3-5 minutos y como máximo 15 minutos antes de aplicar las Diatabs en la superficie del agar. I.3. Incubación y lectura de las placas Transcurridos 15 minutos, colocar el agar hacia arriba e incubar las placas según la especie (aerobios, anaerobios o en CO2 al 5-10% ) de acuerdo con la Tabla 1. Examinar las placas tras incubar durante toda la noche, salvo que se indique lo contrario en la Tabla 1. Medir los diámetros de las zonas de inhibición completa observadas mediante inspección visual. Las zonas se miden con una precisión de un milímetro. RESULTADOS: Comparar el diámetro de zona registrado con los de la Tabla 1. Los resultados para una muestra específica se registran como Sensible (S) o Resistente (R) de acuerdo con las zonas de interpretación. Utilizar la Tabla 1 para realizar una identificación preliminar de la cepa bacteriana.

II. Diatabs para líquidos II.1. Preparación del inóculo El microorganismo que se desea analizar debe tener entre 18 y 24 horas y ser un cultivo puro. Los aislados de crecimiento lento pueden analizarse con un cultivo de 48 horas. Preparar en un tubo una suspensión fuerte (como mínimo patrón McFarland 4) del microorganismo analizado en 0,25 ml de solución salina. Puede inocularse una batería de Diatabs con un mismo inóculo. II.2. Inoculación Añadir una Diatabs al tubo. Algunas Diatabs requieren, además, la adición al tubo de 3 gotas de aceite de parafina estéril (especificado en la Tabla 2).

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Rosco Diagnostica II.3. Incubación y lectura de los tubos Cerrar el tubo e incubar a 35-37 °C durante 4 horas, durante la noche o según lo especificado en la Tabla 2. Tras la incubación observar el viraje de color. En algunas Diatabs es necesario añadir un reactivo antes de leer el color y algunas Diatabs pueden presentar dos reacciones. Tras la interpretación del color de la primera reacción, añadir un reactivo y leer el nuevo color (especificado en la Tabla 2). RESULTADOS: Los Diatabs para líquido se clasifican según la reacción de color. En la Tabla 2 se muestran las reacciones de color para las cepas negativas y positivas. Anotar la puntuación en un formulario adecuado.

III. Diatabs para otros procedimientos Oxidasa Colocar un papel de filtro grueso en una placa de Petri vacía y colocar la tableta de Diatabs sobre ella. Añadir una gota de solución salina sobre la parte superior del comprimido, esperar 60 segundos y añadir otra gota de solución salina sobre dicha parte superior. Cuando el papel de filtro esté húmedo, frotar la colonia sobre el papel de filtro húmedo aprox. a 3-8 mm del borde del comprimido utilizando un ansa de plástico. Realizar la lectura al cabo de 2 minutos. Pueden analizarse varios aislados con la misma Diatabs y el mismo papel de filtro. Factores X, V y X+V Para diferenciar Haemophilus spp. se utilizan tabletas con el factor de crecimiento X (hemina), con el factor V (NAD) o con ambos factores (X+V). Los tres comprimidos se colocan en el agar, los del factor X y el factor V separados entre sí 2 cm y el del factor X+V más alejado de ellos. Utilizar únicamente un medio libre de los dos factores de crecimiento (p. ej., agar TSA). Incubar por la noche a 35-37 °C durante 18-24 horas y observar si existe o no crecimiento en las proximidades de la tableta. Si el microorganismo sólo requiere el factor X, crecerá solamente en las proximidades de las tabletas de factor X y X + V; si el microorganismo sólo requiere el factor V, crecerá solamente en las proximidades de las tabletas de factor V y X + V y si requiere ambos factores X y V, crecerá solamente en las proximidades de las tabletas de factor X + V.1 CONTROL INTERNO DE CALIDAD Para monitorizar el rendimiento de los comprimidos deberá utilizarse un procedimiento de control de calidad con cepas ATCC o cepas positivas o negativas conocidas. El control de calidad deberá realizarse de acuerdo con los procedimientos de control de calidad de laboratorio reconocidos. En las Tablas se presentan las reacciones de color negativas y positivas así como las cepas sensibles o resistentes que indican el correcto rendimiento de todo el procedimiento. Si se observan resultados de calidad aberrantes, no deberán registrarse los resultados. LIMITACIONES DEL MÉTODO 1. 2.

3. 4. 5.

Deberán utilizarse cultivos puros de microorganismos ya que una población microbiana mixta daría lugar a resultados aberrantes. El uso de Diatabs para la identificación de microorganismos y la interpretación de los resultados requiere la presencia de un técnico experto en métodos microbiológicos generales que sepa manejar de forma razonable conocimientos, experiencias, información sobre muestras así como otros procedimientos pertinentes antes de establecer la identidad del aislado. Los resultados de ensayos adicionales pueden afectar al resultado de la identificación final. Las tabletas no están previstas para su uso en procedimientos de ensayo de sensibilidad. La exactitud de las Diatabs está basada en las propiedades microbianas in vitro conocidas para especies bacterianas específicas clínicamente relevantes1. Si se observan resultados atípicos o incoherentes se recomienda repetir el ensayo. Un resultado imprevisto debe ser notificado, pudiéndose enviar los aislados a laboratorios de referencia para su posterior análisis.

REFERENCIAS: 1) 2)

Murray P.R. et al. 2003. Manual of Clinical Microbiology, 8th ed., ASM, Washington DC. Diatabs User's Guide 5th ed. 2000. www.rosco.dk

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Rosco Diagnostica Tabla 1. Interpretación de los resultados de Diatabs (en agar) Revisión: Fecha de publicación: Idioma: DIATABS (Principios activos por tableta) Bacitracin low 0.4 U

Ø Código* mm

Procedimiento

Zona mm > 15

6

BaL

9

BORON

Brilliant Green 100 µg

6

BrG

Standard II

≥ 10

C-390 40 µg

9

C-390

Standard I

≥ 12

Colistin 10 µg

9

Co.10

Standard II

9

CL500

9

CYC15 Standard I en

Boronic Acid 250 µg

Standard I en agar de sangre TSA

Interpretación Sensible Estreptococos betahemolíticos Grupo A

Zona mm < 14

DBV0009F 30.11.2006 Español

Cepa CC Resistente Otros estreptococos

Sensible

Resistente

S. pyogenes ATCC 12344

S. bovis ATCC 15351

B. fragilis ATCC 25285

F. necrogenes ATCC 25556

Detección de AmpC Beta-lactamasas mediadas por plásmidos.

(Research use only)

(Colistin sulphate)

Cloxacillin 500 µg (Research use only) Cycloheximide 15 µg

agar Shadomy modificado

(Cycloheximide < 0.02 %)

Deferoxamine 250 µg

9

DEFRX Standard I a

6

≥ 25 ≥ 16

Ver texto

6

(Hemin chloride 260 µg)

S. aureus ATCC 25923

C. glabrata < 25 C. albicans C. krusei C. pseudotropicalis C. lusitaniae S. epidermidis Otros estafilococos ≤ 14 S. hominis S. lutrae H. influenzae: Se requieren ambos factores X y V. Crecimiento alrededor del factor X+V y entre el factor X y el factor V. H. parainfluenzae: Sólo se requiere el factor V. Crecimiento alrededor del factor V y del factor X+V.

C. albicans ATCC 64548

C. krusei ATCC 6258

S. epidermidis ATCC 12228

S. aureus ATCC 25923

B. fragilis ATCC 25285

E. coli ATCC 25922

G. vaginalis ATCC 14018

E. coli ATCC 25922

Factor X + V

6

Metronidazole 5 µg

9

MTR.5 Standard II

≥ 15

Bacterias anaerobias

Metronidazole 50 µg

9

MTR50 Standard III

≥ 12

Gardnerella vaginalis

DBV0009F

Fusobacterium spp.

P. aeruginosa ATCC 27853

(b-Nicotinamide adenine dinucleotide sodium 175 µg)

Factor X

< 10

Otros Pseudomonas Ninguna P. aeruginosa S. maltophilia ATCC 13637 spp. y no zona fermentadoras P.ej. grupo B. fragilis d E. coli ATCC 25922 P. ej., Fusobacterium Ninguna ≥ 10 d zona spp. Detección de AmpC Beta-lactamasas mediadas por plásmidos.

(Deferoxamine mesylate)

Factor V

Bacteroides spp.

Ninguna zona < 12

Bacterias aerobias y microaerofílicas Lactobacilos Corinebacterias

H. influenzae ATCC 49247 H. parainfluenzae ATCC 7901

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Rosco Diagnostica DIATABS (Principios activos por tableta) O/129 150 µg

Ø Código* mm

Procedimiento

Interpretación Zona mm ≥ 16

9

O/129

Standard b

6

OPT

>9

P.ej. Porphyromonas spp. d

(2,4-Diamino-6,7-diisopropylpteridine phosphate salt)

Optochin 10 µg

≥ 18 (CO2)

6

OXG

Standard TSA con 5 % sangre. Incubado +/CO2 Standard II

9

PSAE

Standard I c

≥ 18

6

SPS

Standard III

≥ 10

6

TEL

Standard I

> 15

(Ethylhydrocuprein HCl)

Oxgall 1000 µg

(1,10 Phenanthroline)

S.P.S. 1000 µg

Vibrio spp. Plesiomonas

Zona mm < 16

Cepa CC Resistente

Sensible

Resistente

Aeromonas Enterobacteriaceae

Kocuria rhizophila ATCC 9341 E. coli ATCC 25922

Otros estreptococos no hemolíticos

S. pneumoniae ATCC 49619

S. bovis ATCC 15351

P. ej. grupo Bacteroides fragilisd

S. aureus ATCC 25923

B. fragilis ATCC 25285

Otras Pseudomonas ≤ 14 spp., no fermentadoras y Enterobacteriaceae Gardnerella vaginalis

P. aeruginosa

E. coli ATCC 25922

P. aeruginosa ATCC 27853

G. vaginalis ATCC 14018

Kocuria rhizophila ATCC 9341

Estreptococos y la mayoría de enterococos

E. faecalis

S. bovis ATCC 15351

E. faecalis ATCC 29212

S. pneumoniae

≥ 20 (aerob)

(Oxgall)

Ps. aeruginosa Screen 80 µg

Sensible

< 16 (CO2) < 18 (aerob) Ninguna zona

(Sodium polyanethol sulfonate)

Tellur 500 µg (Potassium tellurite)

< 12

* El código en negrita figura impreso en los comprimidos. Procedimiento: Standard I: El ensayo se realiza con un inóculo equivalente a McFarland 0,5 en agar Mueller Hinton incubado aeróbicamente a 35-37 °C durante la noche si en la tabla no se especifica el agar o las condiciones de incubación. Standard II: El ensayo se realiza con un inóculo equivalente a McFarland 0,5 en FAA+sangre incubados aeróbicamente a 35-37 °C durante 24-48 horas si en la tabla no se especifica el agar o las condiciones de incubación. Standard III: El ensayo se realiza con un inóculo equivalente a McFarland 0,5 en agar Mueller Hinton + sangre incubado a 35-37 °C con CO2 al 5-10 % durante la noche si en la tabla no se especifica el agar o las condiciones de incubación. a) b) c) d)

Medir en la zona las colonias de tamaño normal y descartar las colonias semiinhibidas. No utilizar agar con sangre. Utilizar medio básico de agar-sangre (Oxoid) con NaCl al 0,5%. Incubar durante 24 horas. La resistencia adquirida frente al trimetoprim también lo será frente a O/129. Medir únicamente la zona clara. Puede utilizarse para separar los principales grupos de bacterias anaerobias habituales.

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Rosco Diagnostica Tabla 2. Interpretación de los resultados de Diatabs (en líquido) DIATABS (Principios activos por tableta) Acetamide Hydrolysis

Código

Procedimiento

ACM

Standard

ADO

Standard

Alk P

Standard

(Acetamide 1.5 mg)

Adonitol (Adonitol 3 mg)

Alkaline Phosphatase

Tiempo de incubación (4 h) o durante la noche 4h o durante la noche 4h

(p-Nitrophenyl-Phosphate 0.1 mg)

Alpha-Fucosidase

α-FUC Standard

(p-Nitrophenyl-α-L-Fucosidase 0.2 mg) α-GAL Standard Alpha-Galactosidase (p-Nitrophenyl- α-D-Galactopyranoside 0.3 mg) α-GLU Standard Alpha-Glucosidase (p-Nitrophenyl-α-D-Glucopyranoside 0.3 mg)

Alpha-Mannosidase

α-MAN Standard

(p-Nitrophenyl-α-Mannopyranoside 0.3 mg)

Arginine Dihydrolase

ADH

Standard+oil

(L-Arginine HCl 3 mg)

Beta-Fucosidase

ß-FUC Standard

(p-Nitrophenyl-ß-L-Fusosidase 0.2 mg)

Beta-Glucosidase

β-GLU Standard

(p-Nitrophenyl-ß-D-Glucopyranoside 0.3 mg)

Beta-Glucuronidase (PGUA)

PGUA Standard

(p-Nitrophenyl- ß -D glucuronic acid 0.3 mg) Standard

Beta-Lactamase (Acido) (Penicillinprocaine 4 mg, Penicillin G sodium 4 mg)

Beta-N-Acetylglucosaminidase

β-NAG Standard

(p-Nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminide 0.2 mg)

Beta-Xylosidase

β-XYL Standard

(p-Nitrophenyl ß-D-xylopyranoside 0.3 mg)

Bile Esculin

BE

Standard

CIT

Standard

(Esculin 2 mg, Oxgall 9 mg)

Citrate

4h o durante la noche 4h o durante la noche 4h o durante la noche 4h o durante la noche 4h o durante la noche 4h o durante la noche 4h o durante la noche 4h o durante la noche 15-20 min. y hasta 4 h 4h o durante la noche 4h o durante la noche 4h o durante la noche 18-24 h

Interpretación Positivo Negativo

Control de calidad Positivo Negativo

Rojo

Amarillo, naranja P. aeruginosa ATCC 27853

E. coli ATCC 25922

Amarillo, amarillo anaranjado Amarillo intenso Amarillo

Rojo, rojo anaranjado

K. pneumoniae ATCC 13883

E. coli ATCC 25922

Incoloro, amarillo claro Incoloro

E. coli ATCC 25922

S. haemolyticus ATCC 29970

B. fragilis ATCC 25285

E. coli ATCC 25922

Amarillo

Incoloro

E. coli ATCC 25922

P. aeruginosa ATCC 27853

Amarillo

Incoloro

S. maltophilia ATCC 13637

P. aeruginosa ATCC 27853

Amarillo

Incoloro

L. monocytogenes ATCC 19115

E. coli ATCC 25922

Rojo

Amarillo

P. aeruginosa ATCC 27853

K. pneumoniae ATCC 13883

Amarillo

Incoloro

S. intermedius ATCC 27335

E. coli ATCC 25922

Amarillo

Incoloro

K. pneumoniae ATCC 13883

Morganella morganii ATCC 25830

Amarillo

Incoloro

E. coli ATCC 25922

K. pneumoniae ATCC 13883

S. aureus ATCC 29213

S. aureus ATCC 25923

P. aeruginosa ATCC 27853

S. aureus ATCC 25923

K. pneumoniae ATCC 13883

E. coli ATCC 25922

Amarillo Violeta (o marronáceo) Amarillo Incoloro intenso Amarillo Incoloro Negro, gris Rojo

Incoloro, E. faecalis ATCC 29212 gris claro Amarillo, naranja P. aeruginosa ATCC 27853

S. pneumoniae ATCC 49619 Proteus vulgaris ATCC 13315

(Citrate 2 mg)

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Rosco Diagnostica DIATABS (Principios activos por tableta) d-Xylose

Código

Procedimiento

XYL

Standard

4h o durante la noche

ESC

Standard

4 h (o hasta 24 h)

(d-Xylose 2 mg)

Esculin Hydrolysis

Tiempo de incubación

Interpretación Positivo Negativo Amarillo, amarillo anaranjado Negro, gris

(Esculin 2 mg)

Gamma-Glutamyl Aminopeptidase

γ-GLU Standard+I

(Gamma-Glutamyl-β-Naphthylamide 0.2 mg)

Glucose

GLU

Standard

HIP

Standard+IV

4h

IAC

Standard

4h o durante la noche

INU

Standard

4h o durante la noche

LAC

Standard

4h o durante la noche

ARA

Standard

4h o durante la noche

LDC/

Standard+oil Leer en primer lugar LDC y después +IIa Standard+I

3-4 h (o hasta 24 h)

(D-Glucose monohydrate 2 mg)

Hippurate Hydrolysis

4ho Durante la noche 4h o durante la noche

(Hippuric acid Sodium-salt 3 mg)

Indoxyl Acetate (Indoxyl acetate 5 mg)

Inulin (Inulin 3 mg)

Lactose (Lactose monohydrate 3 mg)

l-Arabinose (L-Arabinose 3 mg)

LDC/Indole (L-Lysine 3 mg, L-Tryptophane 0.7 mg)

IND

Leucine Aminopeptidase

LAP

(L-Leucine-β-naphthylamide-HCL 20 µg)

l-Rhamnose

RHAM Standard

(L-Rhamnose 3 mg)

Lysine Decarboxylase (LDC)

LDC

Standard+oil

MAL

Standard

(L-Lysine 3 mg)

Maltose (Maltose monohydrate 3 mg)

DBV0009F

4ho Durante la noche 4h o durante la noche 4h o hasta 24 h 4h o durante la noche

Naranja rojizo Rojo Amarillo, amarillo anaranjado Fucsia oscuro, azul Sedimento azul, verde Amarillo, amarillo anaranjado Amarillo, amarillo anaranjado Amarillo, amarillo anaranjado Azul, violeta

Rojo, rojo anaranjado

Control de calidad Positivo Negativo E. coli ATCC 25922

Morganella morganii ATCC 25830

Incoloro, K. pneumoniae ATCC 13883 gris claro Amarillo P. aeruginosa ATCC 27853 Amarillo, naranja Rojo, P. aeruginosa ATCC 27853 rojo anaranjado

E. coli ATCC 25922

Incoloro, amarillo claro Sobrenadante sin color, ligeramente coloreado Rojo, rojo anaranjado

S. pyogenes ATCC 12344

S. agalactiae ATCC 12386

E. coli ATCC 25922 A. lwoffii ATCC 9957

Campylobacter jejuni ATCC 33291 E. faecalis ATCC 51299 S. mutans ATCC 25175

E. coli ATCC 25922

Rojo, rojo anaranjado

E. coli ATCC 25922

Proteus vulgaris ATCC 13315

Rojo, rojo anaranjado

E. coli ATCC 25922

S. aureus ATCC 25923

Amarillo, verde, gris

E. coli ATCC 25922 (LDC pos., IND pos.)

Proteus vulgaris ATCC 13315 (LDC neg., IND pos.)

Rojo

Amarillo

Naranja rojizo Rojo Amarillo, amarillo anaranjado Azul, violeta Violeta fuerte Amarillo, amarillo anaranjado

Amarillo S. bovis ATCC 15351 Amarillo, naranja Rojo, K. pneumoniae ATCC 13883 rojo anaranjado Amarillo, verde, gris, azul claro Rojo, rojo anaranjado

K. pneumoniae ATCC 13883 (LDC pos., IND neg.) Aerococcus viridans ATCC 700406 Proteus vulgaris ATCC 13315

K. pneumoniae ATCC 13883

Enterobacter cloacae ATCC 13047

E. coli ATCC 25922

Morganella morganii ATCC 25830

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Rosco Diagnostica DIATABS (Principios activos por tableta) Mannitol

Código

Procedimiento

MAN

Standard

4h o durante la noche

MSE

Standard

4h o durante la noche

MEL

Standard

4h o durante la noche

NO3

Standard+V

4h o durante la noche 4h o durante la noche 3-4 h (para no fermentadoras 1824 h)

(D-Mannitol 3 mg)

Mannose (D-Mannose 3 mg)

Melibiose (D-Melibiose 3 mg)

Nitrate Reduction (Sodium Molybdate 40 µg, Potassium nitrate 4 mg)

ONPG (Beta-Galactosidase)

ONPG Standard

(o-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside 0.4 mg)

ONPG/PYR (o-Nitrophenyl-β-D-Galactopyranoside 0.4 mg, L-pyrrolidonyl-ß-naphthylamide 0.2 mg)

Ornithine Decarboxylase (ODC)

ONPG/ Standard Leer en primer lugar PYR ONPG y después +1 ODC Standard+oil

(L-Ornithine HCl 3 mg)

Oxidase

OXI

Ver texto

(Tetramethyl-p-Phenylenediamine 0.7 mg)

PGUA/Indole (p-Nitrophenyl-β-D-Glucoronic acid 0.4 mg, L-Tryptophane 1 mg)

Porphyrin (d-Ala)

Tiempo de incubación

4h o hasta 24 h Realizar la lectura al cabo de 2 minutos. 3-4 h (o hasta 24 h)

PGUA/ Standard Leer en primer lugar IND PGUA y después +IIa ALA Standard+IIb 4-6 h (o hasta 24 h)

(d-Aminolevulinic acid 0.1 mg)

Proline Aminopeptidase

PRO

Standard+I

PZA

Standard a

PYR

Standard+I

RAF

Standard

(L-proline ß-Naphthylamide-HCl 80 µg)

Pyrazinamidase (Pyrazinamide 0.9 mg)

Pyrrolidonyl Aminopeptidase (L-Pyrrolidonyl-ß-Naphthylamide 0.2 mg)

Raffinose (D-Raffinose pentahydrate 3 mg)

DBV0009F

4ho Durante la noche 4h o durante la noche 4ho Durante la noche 4h o durante la noche

Interpretación Positivo Negativo Amarillo, amarillo anaranjado Amarillo, amarillo anaranjado Amarillo, amarillo anaranjado Rojo, rosa

Control de calidad Positivo Negativo

Rojo, rojo anaranjado

E. coli ATCC 25922

Proteus vulgaris ATCC 13315

Rojo, rojo anaranjado

E. coli ATCC 25922

Proteus vulgaris ATCC 13315

Rojo, rojo anaranjado

E. coli ATCC 25922

Proteus vulgaris ATCC 13315

E. coli ATCC 25922

S. saprophyticus ATCC 15305

Amarillo

Incoloro, rosa claro Incoloro

E. coli ATCC 25922

S. aureus ATCC 25923

Amarillo

Incoloro S. haemolyticus ATCC 29970 (ONPG neg., PYR pos.)

Proteus vulgaris ATCC 13315 (ONPG neg., PYR neg.)

Rojo

Amarillo, naranja

Azul, violeta Violeta fuerte Azul, fucsia

Amarillo, verde, gris, azul claro Sin cambio de color

E. coli ATCC 25922

K. pneumoniae ATCC 13883

P. aeruginosa ATCC 27853

E. coli ATCC 25922

Amarillo

Incoloro

E. coli ATCC 25922 (PGUA pos., IND pos.)

Enterobacter cloacae ATCC 13047 (PGUA neg., IND neg.)

Rojo

Amarillo

Rojo, rosa en la fase acuosa inferior Naranja rojizo Rojo Naranja, rojo

Incoloro fase acuosa

Proteus vulgaris ATCC 13315 (PGUA neg., IND pos.) H. parainfluenzae ATCC 7901

H. influenzae ATCC 49247

P. aeruginosa ATCC 27853

Cl. perfringens ATCC 12917

E. coli ATCC 25922

S. aureus ATCC 25923

Naranja rojizo Rojo Amarillo, amarillo anaranjado

Amarillo Amarillo, naranja Incoloro, amarillo claro Amarillo Amarillo, naranja Rojo, rojo anaranjado

Enterobacter cloacae ATCC 13047 E. coli ATCC 25922 Enterobacter cloacae ATCC 13047 E. coli ATCC 25922

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Rosco Diagnostica DIATABS (Principios activos por tableta) Sorbitol

Código

Procedimiento

SOR

Standard

4h o durante la noche

SUC

Standard

4h o durante la noche

IND

Standard+IIa 4 h o durante la noche

TDA

Standard+III

TTR

Standard

TRE

Standard

TRIB

Standard

4h o durante la noche

TRYP

Standard+I

URE

Standard

URE/

Standard Leer en primer lugar URE y después +IIa Standard Leer en primer lugar URE y después +III Standard+VI

4ho Durante la noche 4h o durante la noche 4h o durante la noche

(D-Sorbitol 2mg)

Sucrose (Saccharose 3 mg)

TDA or Indole: Indole (L-Tryptophane 1 mg)

TDA or Indole: TDA (L-Tryptophane 1 mg)

Tetrathionate Reductase (Tetrathionate 2 mg)

Trehalose (D-Trehalose dihydrate 2 mg)

Tributyrin (Tributyrin 2 mg)

Trypsin (Na-Benzoyl-DL-Arginine-ß-Naphthylamide 0.2 mg)

Urease (Urea 8 mg)

Urease/Indole (Urea 4 mg, L-Tryptophane 1 mg)

IND

Urease/TDA

URE/

(Urea 4 mg, L-Tryptophane 1 µg)

Voges-Proskauer (Sodium Pyruvate 2 mg, Creatine 0.1mg)

DBV0009F

Tiempo de incubación

TDA VP

4h o durante la noche 4h o durante la noche 4h o durante la noche

4h o durante la noche

4h

Interpretación Positivo Negativo Amarillo, amarillo anaranjado Amarillo, amarillo anaranjado Rojo (fucsia, rosa) color de la capa superficial Marrón, rojo

Control de calidad Positivo Negativo

Rojo, rojo anaranjado

E. coli ATCC 25922

Proteus vulgaris ATCC 13315

Rojo, rojo anaranjado

Enterobacter cloacae ATCC 13047 Morganella morganii ATCC 25830

Amarillo

Proteus vulgaris ATCC 13315

K. pneumoniae ATCC 13883

Amarillo, naranja Proteus vulgaris ATCC 13315

K. pneumoniae ATCC 13883

Amarillo

Naranja rojizo

Proteus vulgaris ATCC 13315

E. coli ATCC 25922

Amarillo, amarillo anaranjado Amarillo, amarillo anaranjado Naranja rojizo Rojo Rojo/fucsia b

Rojo, rojo anaranjado

E. coli ATCC 25922

Morganella morganii ATCC 25830

Rojo

P. aeruginosa ATCC 27853

E. coli ATCC 25922

Amarillo S. maltophilia ATCC 13637 Amarillo, naranja Amarillo, naranja Proteus vulgaris ATCC 13315

Rojo, fucsia

Amarillo

Rojo

Amarillo, naranja

Rojo, fucsia

Amarillo

Rojo, marrón Rojo, rosa

Amarillo, naranja Incoloro (sin Enterobacter cloacae ATCC 13047 E. coli ATCC 25922 cambio de color)

E. coli ATCC 25922 E. coli ATCC 25922

Morganella morganii ATCC 25830 (URE pos., IND pos.) K. pneumoniae ATCC 13883 (URE pos., IND neg.)

E. coli ATCC 25922 (URE neg., IND pos.)

Proteus vulgaris ATCC 13315 (URE pos., TDA pos.) K. pneumoniae ATCC 13883 (URE pos., TDA neg.)

E. coli ATCC 25922 (URE neg., TDA neg.)

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Rosco Diagnostica Procedimiento: Standard: Preparar en un tubo una suspensión bacteriana (como mínimo McFarland 4) de una placa incubada durante la noche en 0,25 ml de solución salina. Añadir una Diatabs, cerrar el tubo e incubar a 35-37 °C. Standard+oil: Preparar en un tubo una suspensión bacteriana (como mínimo McFarland 4) de una placa incubada durante la noche en 0,25 ml de solución salina. Añadir una Diatabs y 3 gotas de aceite de parafina, cerrar el tubo e incubar a 35-37 °C. a) Preparar la suspensión bacteriana en agua destilada. Después de la incubación añadir una gota de solución de sulfato ferroso de amonio al 5% w / v en agua purificada (recién preparada y almacenada a -20ºC ). Para Corinebacterias utilizar el inóculo McFarland 8. b) En caso de incubación durante la noche solamente el rojo fuerte o el fucsia fuerte son positivos. Reactivos que deben añadirse tras la incubación: I. Añadir 3 gotas de reactivo de aminopeptidasa (Rosco #92231) y leer la reacción de color a los 5 min. IIa. Añadir 3 gotas de reactivo de Kovacs (Rosco #92031), agitar y leer la reacción de color de la capa superficial a los 3 min. IIb. Añadir 4 gotas de reactivo de Kovacs (Rosco #92031), agitar y esperar 10 min. III. Añadir 2 gotas de solución de cloruro férrico al 10% y leer la reacción de color a los 5 min. IV. Añadir 5 gotas de solución de ninhidrina al 3,5% (Rosco #91731), cerrar el tubo y volver a incubar durante 10 min. Leer a los 5 min. V. Añadir 1 gota de N,N-dimetil-α-naftilamina y 1 gota de solución sulfanílica. Leer a los 2 min. VI. Añadir 2 gotas de solución de alfa-naftol (5% en etanol) y a continuación 1 gota de KOH al 40% y agitar.

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