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• Marcelo Rigatuzo

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HPLC GUÍA PARA LA SOLUCIÓN DE PROBLEMAS

www.phenomenex.com

COMUNÍQUESE CON PHENOMENEX PARA:

2

n

Columnas HPLC/UHPLC (capilares a preparativas)

n

Columnas de SEC: acuosas (GFC) y no acuosas (GPC)

n

Análisis de aminoácidos

n

Columnas de SFC

n

Columnas de HPLC específicas para el análisis de: n Fármacos básicos, ácidos y anfotéricos



n

Separaciones con pH alto/bajo (pH 1-12)



n

Proteínas y péptidos por fase reversa



n

Biopolímeros: proteínas y ácidos nucleicos por GFC/SEC



n

Polímeros sintéticos



n

Alimentos y bebidas



n

Muestras medioambientales



n

Fármacos en fluidos biológicos

n

Rellenos a granel para HPLC

n

Accesorios para HPLC, tales como: n Filtros para muestras y disolventes



n

Precolumnas SecurityGuard™ Standard



n

Filtros de jeringa



n

Jeringas y viales



n

Horno de columnas



n

Válvulas de inyección para HPLC



n

Tubos y fittings

n

Columnas de GC

n

Accesorios para GC

n

Productos para la Preparación de Muestras (SPE, SLE, precipitación de proteínas, filtros)

n

Soporte para validación y desarrollo de aplicaciones

n

Servicio técnico adicional

Phenomenex

l

WEB: www.phenomenex.com

ÍNDICE

I.

Introducción...................................................................................... 4

II.

Presión anómala............................................................................... 5

III.

Fugas................................................................................................ 7

IV.

Problemas con el cromatograma..................................................... 9

V.

Problemas con el inyector.............................................................. 17

VI.

Problemas detectados por olfato, vista u oído............................... 18

VII.

Principales zonas de problemas y mantenimiento preventivo....... 20

Proteja su columna de HPLC....................................................................... 22 Filtración sencilla previa a la cromatografía................................................. 23

© 2017 Phenomenex, Inc. Todos los derechos reservados. No se puede copiar ninguna parte de este folleto sin el consentimiento previo por escrito de Phenomenex, Inc. USA. Aunque se ha hecho todo lo posible para garantizar la exactitud de la información contenida en esta guía, Phenomenex no asume ninguna responsabilidad por su uso. Aceptamos correcciones o adiciones para incorporarlas en próximas ediciones.

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I. INTRODUCCIÓN LOCALIZACIÓN Y CORRECCIÓN DEL PROBLEMA Para solucionar posibles problemas en su sistema de HPLC, el mejor método es un enfoque sistemático. Esta guía se organiza en cinco categorías principales de síntomas para ayudarle a identificar el origen del problema que está teniendo: • anomalías de presión • fugas • problemas con el cromatograma • problemas con el inyector • otros problemas detectados por olfato, vista u oído Una vez corregido el problema, registre el incidente en el libro de registros del sistema para futuras referencias. PREVENCIÓN Muchos problemas de LC se pueden prevenir con un mantenimiento rutinario preventivo. Por ejemplo, cambiar periódicamente las juntas de la bomba eliminará los fallos de estanqueidad y sus problemas asociados. En la sección VII se enumeran las zonas de fugas más habituales para cada módulo de LC y los procedimientos de mantenimiento preventivo que reducirán su frecuencia. Estas sugerencias deben modificarse para adaptarlas a su modelo específico de LC y, después, incorporarse a la rutina habitual del laboratorio. DÓNDE OBTENER MÁS AYUDA • Phenomenex cuenta con asesores técnicos experimentados que pueden ayudarle con casi cualquier problema. Se puede comunicar por teléfono, fax o correo electrónico. • Debe consultar los manuales del usuario y de servicio del instrumento. Contienen diagramas detallados, procedimientos para solucionar problemas de modelos específicos y los números de referencia que necesita para pedir los recambios. • Quizás otras personas del laboratorio ya hayan tenido que resolver el mismo problema que está teniendo; pueden ser un recurso útil. • El fabricante del instrumento puede ayudarle. La mayoría de los fabricantes de productos de LC ofrecen soporte técnico gratuito a sus clientes. • Phenomenex ofrece seminarios sobre HPLC. • Existen varias fuentes de referencia donde encontrará orientación para solucionar problemas: J.W. Dolan and L.R. Snyder, Troubleshooting LC Systems, Humana Press, NJ (1989). L.R. Snyder and J.J. Kirkland, Introduction to Modern Liquid Chromatography, 2nd ed., Wiley, NY (1979). D.J. Runser, Maintaining and Troubleshooting HPLC Systems - A User’s Guide, Wiley, NY (1981). J.W. Dolan, “LC Troubleshooting”, LC/GC Magazine. Esta es una columna mensual.

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II. PRESIÓN ANÓMALA Un cambio en la presión de trabajo es señal de un posible problema. Entre las siguientes categorías, elija la que más se aproxime a los síntomas que observa y siga las sugerencias para corregir el problema.

A. Sin lectura de presión, sin flujo POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Equipo apagado

1. Encenderlo

2. Fusible fundido

2. Cambiar el fusible

3. Fallo del controlador o de su configuración

3. a. Comprobar que la configuración sea correcta b. Reparar o cambiar el controlador

4. Pistón roto

4. Cambiar el pistón

5. Aire en el cabezal de la bomba

5. Desgasificar los disolventes; purgar la bomba, cebar la bomba

6. Fase móvil insuficiente

6. a. Rellenar el depósito b. Cambiar la frita de entrada si está obstruida

7. Válvulas check en mal estado

7. Cambiar las válvulas check

8. Fuga grande

8. Apretar o cambiar los fittings

B. Sin lectura de presión, flujo normal POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Medidor en mal estado

1. Cambiar el medidor

2. Transductor de presión en mal estado

2. Cambiar el transductor

C. Alta presión constante POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Flujo demasiado alto

1. Ajustar la configuración

2. Frita de la columna obstruida

2. a. Limpiar la columna en sentido inverso (si está permitido) b. Cambiar la frita* (no recomendable) c. Cambiar la columna

3. Fase móvil inadecuada; solución buffer precipitada

3. a. Utilizar la fase móvil correcta b. Lavar la columna

4. Columna inadecuada

4. Utilizar la columna adecuada

5. Inyector bloqueado

5. Eliminar la obstrucción o cambiar el inyector

6. Temperatura de la columna demasiado baja

6. Incrementar la temperatura

7. Funcionamiento incorrecto del controlador

7. Reparar o cambiar el controlador

8. Precolumna obstruida

8. Retirar o cambiar la precolumna

9. Filtro en línea obstruido

9. Retirar o cambiar el filtro en línea

* Compruebe primero la garantía del fabricante de la columna. La retirada de los fittings de conexión podría invalidar la garantía.

5

II. PRESIÓN ANÓMALA (cont.) D. Baja presión constante POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Flujo demasiado bajo

1. Ajustar el flujo

2. Fuga en el sistema

2. Buscar y corregir

3. Columna inadecuada

3. Utilizar la columna adecuada

4. Temperatura de la columna demasiado alta

4. Reducir la temperatura

5. Funcionamiento incorrecto del controlador

5. Reparar o cambiar el controlador

E. Aumento desmesurado de la presión POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Consultar la sección C

1. Consultar la sección C

F. Caída de presión a cero POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Consultar las secciones A y B

1. Consultar las secciones A y B

G. Caída de la presión, pero no a cero POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Consultar la sección D

1. Consultar la sección D

H. Cambios de presión

6

POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Aire en la bomba

1. a. Desgasificar el disolvente b. Purgar la bomba

2. Válvulas check en mal estado

2. Cambiar las válvulas check

3. Juntas de la bomba en mal estado

3. Cambiar las juntas de la bomba

4. Desgasificación insuficiente

1 a. Desgasificar el disolvente b. Cambiar los métodos de desgasificación

5. Fuga en el sistema

5. Buscar y corregir

6. Utilizar un método con gradiente

6. Los cambios de presión son normales y se deben a los cambios de viscosidad

III. FUGAS Las fugas normalmente se solucionan apretando o cambiando el fitting. Sin embargo, tenga en cuenta que apretar en exceso los fittings de compresión metálicos puede producir fugas, y que las piezas de plástico que se aprietan manualmente pueden desgastarse. Si una fuga en un fitting no cesa al apretarlo un poco, retire el fitting y observe si presenta daños (por ejemplo, férrula deformada o partículas en la superficie de sellado); los fittings dañados deben cambiarse.

A. Fittings que fugan POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Fitting flojo

1. Apretar

2. Fitting rayado

2. Cambiar

3. Fitting excesivamente apretado*

3. a. Aflojar y volver a apretar b. Cambiar

4. Fitting sucio

4. a. Desmontar y limpiar b. Cambiar

5. Los recambios no coinciden

5. Utilizar todos los recambios del mismo fabricante

B. Fugas en la bomba POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Válvulas check sueltas

1. a. Apretar la válvula check (no apretar demasiado) b. Cambiar la válvula check

2. Fittings flojos

2. Apretar los fittings (no excesivamente)

3. Juntas del mezclador en mal estado

3. a. Cambiar la junta del mezclador b. Cambiar el mezclador

4. Juntas de la bomba en mal estado

4. Reparar o cambiar

5. Fallo del transductor de presión

5. Reparar o cambiar

6. Fallo del amortiguador de pulsaciones

6. Cambiar el amortiguador de pulsaciones

7. Fallo de la válvula dosificadora

7. a. Comprobar los diagramas; cambiar en caso de fugas b. Comprobar si hay daños en los fittings; cambiar

8. Válvula de purga

8. a. Apretar la valvula b. Cambiar la válvula de purga

* Use fittings de conexión que se aprieten manualmente para evitar problemas de sellado y la necesidad de utilizar llaves

7

III. FUGAS (cont.) C. Fugas en el inyector POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Juntas del rotor en mal estado

1. Volver a montar o cambiar el inyector

2. Loop obstruido

2. Cambiar el loop

3. Junta del puerto de inyección floja

3. Ajustar

4. Diámetro de la aguja de inyección inadecuado

4. Utilizar la jeringa correcta

5. Sifón del conducto de residuos

5. Mantener el conducto de residuos por encima de la superficie de los residuos

6. Obstrucción del conducto de residuos

6. Cambiar el conducto de residuos

D. Fugas en la columna POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Fitting de conexión flojo

1. Apretar el fitting de conexión

2. Relleno de la columna en la férrula

2. Desmontar, limpiar la férrula y volver a montar

3. Grosor de frita inadecuado

3. Utilizar la frita adecuada (consulte el cuadro de debajo)

E. Fugas en el detector POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Junta de la celda en mal estado

1. a. Evitar un exceso de presión b. Cambiar la junta

2. Ventanas de la celda resquebrajadas o rayadas

2. Cambiar las ventanas

3. Fugas en los fittings

3. Apretar o reemplazar

4. Conducto de residuos obstruido

4. Cambiar el conducto de residuos

5. Celda de flujo obstruida

5. Volver a montar o reemplazar

Guía de selección del tamaño de poro de la frita CUANDO EL TAMAÑO DE PARTÍCULA DEL RELLENO ES:

2 - 4 µm

5 - 20 µm

8

EL TAMAÑO DE PORO DE LA FRITA DEBE SER:

0.5 µm

2 µm

IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA Muchos problemas en el sistema de LC se manifiestan como cambios en el cromatograma. Algunos de estos cambios se pueden solucionar realizando cambios en el equipo; sin embargo, otros requieren modificar el método analítico. Para una “buena cromatografía”, es fundamental seleccionar el tipo de columna y la fase móvil apropiados.

A. Picos con cola (tailing) POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Frita de entrada de la columna obstruida

1. a. Limpiar la columna en sentido inverso (si está permitido) b. Cambiar la frita de entrada* c. Cambiar la columna

2. Columna con void o espacios vacios

2. Llenar espacios vacíos*

3. Otro pico coeluido

3. a. Utilizar una columna más larga b. Cambiar la fase móvil y/o la selectividad de la columna

4. pH de fase móvil incorrecto

4. Ajustar el pH. En compuestos básicos, un pH menor suele proporcionar picos más simétricos

5. Reacción de la muestra con sitios activos

5. a. Agregar un par iónico o un modificador volátil básico b. Cambiar la columna

Normal

Problema

PICOS CON COLA (TAILING)

B. Picos con hombro POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Baja temperatura

1. Aumentar la temperatura de la columna

2. Disolvente de muestra incorrecto

2. Utilizar fase móvil para el disolvente de inyección

3. Sobrecarga de muestra

3. Reducir la concentración de la muestra

4. Columna incorrecta

4. Consultar A.1. y A.2.

C. Picos partidos POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Contaminación en la entrada de la precolumna o de la columna analítica

1. Retirar la precolumna y reintentar el análisis. Cambiar la precolumna si es necesario

* Compruebe primero la garantía del fabricante de la columna. La retirada de los fittings de conexión podría invalidar la garantía.

continúa en la siguiente página

9

IV. PROBLEMS WITH THE CHROMATOGRAM (cont.) C. Picos partidos (cont.) POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

Normal

Problema

Si la columna analítica está obstruida, limpiar en sentido inverso. Si el problema continúa, es posible que la columna se haya ensuciado con contaminantes altamente retenidos. Utilizar el procedimiento de limpieza apropiado. Si el problema continúa, probablemente la entrada esté bloqueada. Cambiar la frita o la columna

PICOS PARTIDOS

2. Disolvente de la muestra incompatible con la fase móvil

2. Cambiar el disolvente. Siempre que sea posible, disolver las muestras en fase móvil

D. Distorsión de los últimos picos POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Sobrecarga de muestra

1. Disminuir la cantidad de muestra

E. Distorsión de los primeros picos POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Disolvente de inyección incorrecto

1. a. Reducir el volumen de inyección b. Utilizar un disolvente de inyección más débil

F. Los primeros picos con más colas (tailing) que los últimos POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Efectos ajenos a la columna

1. a. Cambiar los tubos del sistema (tubos más cortos y estrechos) b. Utilizar una celda del detector de menor volumen

G. Las colas aumentan a medida que aumenta el valor de k’ POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Interacciones secundarias, en fase reversa

1. a. Agregar trietilamina (muestras básicas) b. Agregar acetato (muestras ácidas) c. Agregar sal o solución buffer (muestras iónicas) d. Probar con una columna diferente

2. Interacciones secundarias, en fase normal

2. a. Agregar trietilamina (compuestos básicos) b. Agregar ácido acético (compuestos ácidos)

continúa en la siguiente página

10

IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (cont.) G. Las colas aumentan a medida que aumenta el valor de k’ (cont.) POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

2. Interacciones secundarias, en fase normal

2. c. Agregar agua (compuestos polifuncionales). Solo para métodos de fase normal que utilizan disolventes miscibles con agua. d. Probar un método de LC diferente

3. Interacciones secundarias, par iónico

3. Agregar trietilamina (muestras básicas)

H. Colas (tailing) en picos ácidos o básicos POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Buffer inadecuado

1. a. Utilizar una solución buffer con una concentración de 50‑100 mM. b. Utilizar una solución buffer con pKa igual al pH de la fase móvil

I. Picos adicionales POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Otros componentes de la muestra

1. Normal

2. Picos del análisis anterior que se retienen mucho

2. a. Aumentar el tiempo de análisis o la pendiente del gradiente b. Aumentar el flujo

3. Picos fantasma

3. a. Comprobar la pureza de la fase móvil b. Utilizar fase móvil como disolvente de inyección c. Reducir el volumen de inyección

4. Contaminación

4. Filtrar la muestra

J. Cambios en el tiempo de retención POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Control de la temperatura incorrecto

1. Termostatizar la columna

2. Cambios en la fase móvil

2. Prevenir los cambios (evaporación o reacción, entre otros)

3. Equilibrado de la columna incorrecto

3. Dejar más tiempo para el equilibrado de la columna entre análisis

K. Cambios bruscos en el tiempo de retención POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Cambios en el flujo

1. Restablecer el flujo

2. Burbujas de aire en la bomba

2. Purgar la bomba

3. Fase móvil inadecuada

3. a. Cambiar por la fase móvil adecuada b. Establecer la mezcla de fase móvil adecuada en el controlador

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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (cont.) L. Deriva de la línea base POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Fluctuación de la temperatura de la columna (Incluso pequeños cambios producen subidas y caídas cíclicas de la línea base. En su mayoría, suelen afectar a los detectores de índice de refracción y de conductividad, o a los detectores de UV en alta sensibilidad o en modo fotométrico directo).

1. Controlar la temperatura de la columna y de la fase móvil; utilizar un intercambiador de calor antes del detector Normal

Problema

DERIVA DE LA LÍNEA BASE

2. Fase móvil no homogénea. (La deriva suele deberse a una mayor absorbancia y no a un patrón cíclico debido a la fluctuación de la temperatura).

2. Utilizar disolventes de calidad HPLC y sales y aditivos de gran pureza. Desgasificar la fase móvil antes de utilizarla; utilizar Helio

3. Acumulación de contaminación o aire en la celda del detector

3. Purgar la celda con metanol u otro disolvente fuerte. Si fuera necesario, limpiar la celda con 1N HNO3 (nunca con HCI).

4. Tubo de salida bloqueado después del detector. (La alta presión resquebraja la ventana de la celda y produce líneas de base con ruido).

4. Desconectar o reemplazar el tubo. Consultar el manual del detector para reemplazar la ventana

5. Problema de mezcla de la fase móvil o cambios en el flujo

5. Corregir la composición o el flujo. Para evitarlo, monitorizar periódicamente la composición y el flujo

6. Equilibrado insuficiente de la columna, especialmente cuando cambia la fase móvil

6. Lavar con un disolvente de fuerza media, pasar de 10 a 20 volúmenes de columna de una fase móvil nueva antes del análisis

7. Fase móvil contaminada, deteriorada o preparada con materiales de baja calidad

7. Comprobar la composición de la fase móvil. Utilizar reactivos de gran pureza y disolventes de calidad HPLC

8. Los materiales muy retenidos en la muestra (valor de k’ alto) pueden eluirse como picos muy anchos y parecer que son una línea base que se eleva. (Los análisis en gradiente pueden agravar el problema).

8. Utilizar precolumna. Si fuera necesario, lavar la columna con un disolvente fuerte entre las inyecciones o periódicamente durante el análisis

9. La fase móvil se ha reciclado pero el detector no se ha ajustado

9. Resetear la línea base. Utilizar una fase móvil nueva cuando se sobrepase el rango dinámico del detector

10. El detector (UV) no se ha seleccionado en el máximo de absorbancia sino en la pendiente de la curva

10. Cambiar la longitud de onda al máximo de absorbancia UV

continúa en la siguiente

12

IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (cont.) M. Ruido en la línea base (normal) POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Aire en la fase móvil, celda de detector o bomba

1. Desgasificar la fase móvil. Purgar el sistema para eliminar el aire de la celda del detector o de la bomba

2. Fuga

2. Consultar la sección III. Comprobar si hay fittings flojos en el sistema. Comprobar si hay fugas, acumulación de sal o ruidos inusuales en la bomba. Cambiar las juntas de la bomba si fuera necesario

Normal Problema RUIDO EN LA LÍNEA BASE

3. Deficiente mezcla de la fase móvil

3. Mezclar la fase móvil a mano o utilizar un disolvente menos viscoso

4. Efecto de la temperatura (columna a alta temperatura, detector sin calentar)

4. Reducir el diferencial o incorporar un intercambiador de calor

5. Otro equipo electrónico en la misma línea

5. Aislar el módulo de LC, el detector o el ordenador para determinar si el problema es externo. Corregir según sea necesario

6. Pulsos de la bomba

6. Incorporar un amortiguador de pulsos en el sistema

N. Ruido en la línea base (irregular) POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Fuga

1. Consultar la sección III. Comprobar si hay fittings flojos. Comprobar si hay fugas, acumulación de sal o ruidos inusuales en la bomba. Cambiar las juntas si fuera necesario. Comprobar si hay fugas en la celda de detector

Normal Problema RUIDO EN LA LÍNEA BASE

2. Fase móvil contaminada, deteriorada o preparada con materiales de baja calidad

2. Comprobar la composición de la fase móvil

3. Disolventes de la fase móvil inmiscibles

3. Seleccionar y utilizar únicamente disolventes miscibles

4. Electrónica del detector u ordenador

4. Aislar el detector y el ordenador electrónicamente. Consultar el manual de instrucciones para corregir el problema

5. Aire atrapado en el sistema

5. Purgar el sistema con un disolvente orgánico compatible

6. Burbujas de aire en el detector

6. Purgar el detector. Instalar un dispositivo de presión después del detector

continúa en la siguiente página

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IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (cont.) N. Ruido en la línea base (irregular) (cont.) POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

7. Celda de detector contaminada (incluso pequeñas cantidades de contaminantes pueden causar ruidos)

7. Lavar la celda con 1N HN03 (nunca con HCI).

8. Lámpara del detector con poca potencia

8. Cambiar la lámpara

9. Fuga de sílica o de relleno de la columna

9. Cambiar la columna

10. Mezclador de fase móvil defectuoso o en mal estado

10. Reparar o reemplazar el mezclador o mezclar previamente si es isocrático

O. Picos anchos POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Cambio en la composición de la fase móvil

1. Preparar una nueva fase móvil

2. Flujo de la fase móvil demasiado bajo

2. Ajustar el flujo

3. Fugas (especialmente entre la columna y el detector)

3. Consultar la sección III. Comprobar si hay fittings flojos. Comprobar si hay fugas, acumulación de sal o ruidos inusuales en la bomba. Cambiar las juntas si fuera necesario

4. Parámetros del detector incorrectos

4. Ajustar los parámetros

5. Efectos ajenos a la columna: a. Columna sobrecargada b. Tiempo de respuesta del detector o volumen de celda demasiado altos c. Tubería entre la columna y el detector demasiado larga o d.i. demasiado grande d. Tiempo de respuesta del software demasiado alto

5. a. Inyectar un volumen menor (por ejemplo, 10 µL en vez de 100 µL) o muestras diluidas 1:10 y 1:100 b. Reducir el tiempo de respuesta o utilizar una celda más pequeña c. Utilizar el tubo más corto posible con un d.i. de 0.005-0.007 pulg. d. Reducir el tiempo de respuesta

Normal

Problema

PICOS ANCHOS

continúa en la siguiente página

14

IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (cont.) O. Picos anchos (cont.) POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

6. Concentración de la solución buffer demasiado baja

6. Aumentar la concentración

7. Precolumna contaminada o gastada

7. Cambiar la precolumna

8. Columna contaminada o gastada. Bajo número de platos

8. Cambiar la columna por una del mismo tipo

9. Espacio vacío o void en la entrada de la columna

9. Reemplazar la columna

10. El pico es en realidad dos o más compuestos con poca resolución

10. Cambiar el tipo de columna para mejorar la separación

11. Temperatura de la columna demasiado baja

11. Aumentar la temperatura. No superar los 60 °C a menos que el fabricante de la columna acepte temperaturas más altas

12. Constante de tiempo del detector demasiado alta

12. Utilizar una constante de tiempo menor

P. Pérdida de resolución POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Fase móvil contaminada o deteriorada (lo que provoca cambios en el tiempo de retención)

1. Preparar una nueva fase móvil

2. Precolumna o columna analítica obstruida

2. Retirar la precolumna y reintentar el análisis. Cambiar la precolumna si es necesario. Si la columna analítica está obstruida, limpiar en sentido inverso. Si el problema continúa, es posible que la columna se haya ensuciado con contaminantes altamente retenidos. Utilizar el procedimiento de limpieza apropiado. Si el problema continúa, probablemente la entrada esté bloqueada. Cambiar la frita o la columna*

Normal

Problema PÉRDIDA DE RESOLUCIÓN

* Compruebe primero la garantía del fabricante de la columna. La retirada de los fittings de conexión podría invalidar la garantía.

continúa en la siguiente página

15

IV. PROBLEMAS CON EL CROMATOGRAMA (cont.) Q. Todos los picos son demasiado pequeños POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Atenuación del detector demasiado alta

1. Reducir la atenuación

2. Constante de tiempo del detector demasiado alta

2. Utilizar una constante de tiempo menor

3. Tamaño de inyección demasiado pequeño

3. a. Aumentar la concentración de la muestra b. Aumentar el volumen de inyección, si el tamaño de la columna lo permite

4. Conexión del software inadecuada

4. Utilizar la conexión correcta

R. Todos los picos son demasiado grandes

16

POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Atenuación del detector demasiado baja

1. Utilizar una atenuación mayor

2. Tamaño de inyección demasiado grande

2. a. Reducir la concentración de la muestra b. Disminuir el volumen de inyección, utilizar un loop de muestra menor o un loop de relleno parcial

3. Conexión del software inadecuada

3. Utilizar la conexión correcta

V. PROBLEMAS CON EL INYECTOR Estos problemas suelen detectarse mientras se usa la válvula de inyección. En la sección III (Fugas) se tratan las fugas en las válvulas de inyección.

A. Inyector manual, difícil de girar POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Junta del rotor dañada

1. Volver a montar o reemplazar la válvula

2. Rotor demasiado apretado

2. Ajustar la tensión del rotor

B. Inyector manual, difícil de cargar POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Válvula desalineada

1. Alinear

2. Loop obstruido

2. Cambiar el loop

3. Jeringa sucia

3. Limpiar o reemplazar la jeringa

4. Tubos obstruidos

4. Limpiar o reemplazar los tubos

C. Autoinyector, no gira POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Sin presión (o alimentación)

1. Suministrar la presión adecuada (alimentación)

2. Rotor demasiado apretado

2. Ajustar

3. Válvula desalineada

3. Alinear

D. Autoinyector, otros problemas POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Obstrucción

1. Limpiar o reemplazar la parte obstruida

2. Mecanismo atascado

2. Consultar el manual de servicio

3. Controlador en mal estado

3. Reparar o cambiar el controlador

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VI. PROBLEMAS DETECTADOS POR OLFATO, VISTA U OÍDO Debe poner todos los sentidos para identificar los problemas de LC. Debe acostumbrarse a dedicar unos minutos al día en poner todos sus sentidos (¡excepto el gusto!) en el sistema de LC para entender como funciona normalmente. Esto le ayudará a localizar los problemas rápidamente. Por ejemplo, normalmente olerá una fuga antes de verla. La mayoría de los problemas se identifican por la vista; muchos de ellos están incluidos en la sección anterior.

A. Olor a disolvente POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Fuga

1. Consultar la sección III

2. Derrame

2. a. Comprobar si el contenedor de residuos se ha desbordado b. Localizar y limpiar el derrame

B. Olor a quemado POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Sobrecalentamiento del módulo

1. a. Comprobar si la ventilación es adecuada; ajustar b. Comprobar los parámetros de la temperatura; ajustar c. Apagar el módulo; consultar el manual de servicio

C. Lecturas de medida anómalas POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Anomalías de presión

1. Consultar la sección II

2. Problema en el horno de la columna

2. a. Comprobar los parámetros; ajustar b. Consultar el manual de servicio

3. Fallo de la lámpara del detector

3. Cambiar la lámpara

D. Luces de advertencia

18

POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Límite de presión excedido

1. a. Comprobar si hay una obstrucción b. Comprobar la configuración del límite; ajustar

2. Otras luces de advertencia

2. Consultar el manual de servicio

VI. PROBLEMAS DETECTADOS POR OLFATO, VISTA U OÍDO (cont.) E. Alarmas de advertencia POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Fuga o derrame de disolvente

1. Buscar y corregir

2. Otras alarmas de advertencia

2. Consultar el manual de servicio

F. Ruidos y chirridos POSIBLE CAUSA

SOLUCIÓN

1. Rodamientos en mal estado

1. Consultar el manual de servicio

2. Lubricación insuficiente

2. Lubricar según sea necesario

3. Desgaste mecánico

3. Consultar el manual de servicio

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VII. PRINCIPALES ZONAS DE PROBLEMAS Y MANTENIMIENTO PREVENTIVO El siguiente cuadro muestra los problemas más habituales que se producen en cada módulo de LC. En la columna de la derecha se enumeran los procedimientos de mantenimiento preventivo que pueden reducir la cantidad de fallos. El número entre paréntesis es el plazo de mantenimiento recomendado. Los manuales del usuario y de servicio de su LC pueden contener otras sugerencias para el mantenimiento preventivo de su modelo específico.

Depósito de disolventes PROBLEMA

MANTENIMIENTO PREVENTIVO

1. Frita de entrada obstruida

1. a. Cambiar los filtros de la botella (3 a 6 meses) b. Filtrar la fase móvil con filtro de 0.5 µm

2. Burbujas de gas

2. Desgasificar la fase móvil

Bomba PROBLEMA

MANTENIMIENTO PREVENTIVO

1. Burbujas de aire

1. Desgasificar la fase móvil

2. Juntas de la bomba en mal estado

2. Cambiar (3 meses)

3. Fallo de la válvula check

3. Filtrar la fase móvil, utilizar un filtro en línea en el conducto de entrada. Guardar un juego de refacción

Inyector PROBLEMA

MANTENIMIENTO PREVENTIVO

1. Desgaste de la junta del rotor

1. a. No apretar en exceso b. Filtrar las muestras

Columna PROBLEMA

MANTENIMIENTO PREVENTIVO

1. Frita de entrada obstruida

1. a. Filtrar la fase móvil b. Filtrar las muestras c. Utilizar un filtro en línea o una precolumna

2. Espacio vacío o void en el cabezal de la columna

2. a. Evitar fases móviles con un pH > 8 (para la mayoría de las columnas de base sílica) b. Utilizar precolumna c. Si trabaja con pH alto, use una columna adecuada como Gemini® o Kinetex® EVO

Gemini y Kinetex son marcas comerciales registradas de Phenomenex. Gemini y Kinetex EVO son patentados por Phenomenex. U.S. Patent No 7,563,367 y 8,658,038 y equivalentes extranjeras.

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VII. PRINCIPALES ZONAS DE PROBLEMAS Y MANTENIMIENTO PREVENTIVO (cont.) Detector PROBLEMA

MANTENIMIENTO PREVENTIVO

1. Fallo de la lámpara; menor respuesta del detector; mayor ruido del detector

1. Cambiar (6 meses) o tener una lámpara de reemplazo

2. Burbujas en la celda

2. a. Mantener la celda limpia b. Utilizar un restrictor después de la celda c. Desgasificar la fase móvil

General PROBLEMA

MANTENIMIENTO PREVENTIVO

1. Daños por corrosión o abrasión

1. Limpiar el buffer del equipo cuando no esté en uso

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ADVERTENCIA: LOS CONTAMINANTES PUEDEN CAUSAR • Alta presión • Picos desdoblados • Picos anchos • Ruido en la línea base • Deriva de la línea base

• Pérdida de resolución • Daños irreversibles en la columna • Daños en el sistema

Proteja su columna de HPLC y sus resultados Un sistema de precolumnas universal para HPLC diseñado para proteger de forma eficaz sus valiosas columnas analíticas, así como los resultados, de los efectos perjudiciales de los contaminantes. Atrape los contaminantes sin alterar su cromatografía.

Encontrará más información en www.phenomenex.com/securityguard Protección de Columnas HPLC

Cómo funciona:

Vista transversal que muestra el cartucho; se puede examinar fácilmente la presencia de contaminantes

Conexión universal para columnas de HPLC que se aprieta manualmente; no se necesitan llaves

Desde el inyector

compuestos de interés contaminantes

Holder

Columna de HPLC

Conector universal: Gracias a su diseño patentado, SecurityGuard Standard puede acoplarse a las conexiones de prácticamente cualquier fabricante.

Si el sistema de precolumna por cartuchos SecurityGuard Standard no funciona tan bien o mejor que su actual sistema de precolumna de fase y dimensiones similares, envíenos sus datos comparativos en un plazo de 45 días y conserve el SecurityGuard Standard de manera GRATUITA.

Diseño patentado

SecurityGuard es marca comercial de Phenomenex. SecurityGuard está patentado por Phenomenex. U.S. Patent Nº 6, 162, 362. PRECAUCIÓN: Esta patente solo se aplica al holder de cartucho de protección de tamaño analítico; no se aplica a los holders SemiPrep, PREP o ULTRA, ni a ningún cartucho.

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FILTROS DE JERINGA PHENEX™ Para la filtración de muestras y disolventes previa a la cromatografía • Menos tiempo de inactividad del sistema • Resultados más constantes y reproducibles • Mayor vida útil de las columnas

Phenex ofrece: • Baja adsorción de proteínas • Amplia compatibilidad química • Nivel de extraíbles mínimo • Excelente flujo

• Gran rendimiento total • Bajo volumen de retención • Calidad certificada • Integridad 100 % comprobada

BUSCADOR DE FILTROS DE JERINGA Herramienta diseñada para ayudarle a encontrar el filtro de jeringa adecuado para eliminar las partículas de su matriz de muestra en 3 pasos sensillos: www.phenomenex.com/SFfinder

• Uso bidireccional

TIPOS DE MEMBRANA

RC (Celulosa regenerada)

NY (Nylon)

PTFE, Teflon® (Politetrafluoroetileno)

CA (Acetato de celulosa)

PES (Polietersulfona)

GF (Fibra de vidrio)

PVDF (Fluoruro de polivinilideno)

Por encima de la jeringa, los filtros no son estériles. La carcasa está fabricada con polipropileno (PP) de calidad médica.

Si los filtros Phenex no funciona tan bien o mejor que sus filtros actuales de membrana, diametro y tamaño de poro similares, envíenos sus datos comparativos en un plazo de 45 días y conserve sus filtros Phenex de manera GRATUITA.

Consejo: Pruebe un paquete de muestra. La mejor manera de determinar si una membrana Phenex determinada es adecuada para su aplicación. Solicite ya el suyo por teléfono o visite www.phenomenex.com/sample

Póngase en contacto con su asesor técnico o distribuidor de Phenomenex para solicitar asistencia o consultar la disponibilidad.Se pueden realizar compras de grandes cantidades con un ahorro importante. Phenex es marca comercial de Phenomenex. Teflon es marca registrada de E.I. du Pont de Nemours and Co.

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