• Author / Uploaded
• Naty Zothy

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You are holding a small plastio tuve some olear liquid in it. You`ve been told that the liquid oontains DNA strands of several different lengths. Your job is to figure out what those lengths are. How will you do it? (press FORWARD to continue). Estás sosteniendo un pequeño plástico con un poco de líquido transparente. Le han dicho que el líquido contiene cadenas de ADN de varias longitudes diferentes. Tu trabajo es descubrir cuáles son esas longitudes. ¿Como lo haras? (Presione ADELANTE para continuar) If the DNA strands were as big as you shoe laces, you could sort them by hand into groups and measure them. (press FORWARD to continue). Si las hebras de ADN fueran tan grandes como los cordones de tus zapatos, podrías clasificarlas a mano en grupos y medirlas. (presione ADELANTE para continuar). But DNA strands are molecules so tiny that you can’t see them even under most microscopes. Is there a way to sort and measure the DNA strands in your tube even though you can’t see or touct them? There is! It’s called gel electrophoresis (pronounced ee-LEK-tro-fo-REE-sis) (press FORWARD to continue). Pero las cadenas de ADN son moléculas tan pequeñas que no se pueden ver ni siquiera bajo la mayoría de los microscopios. ¿Hay alguna manera de clasificar y medir las hebras de ADN en su tubo a pesar de que no puede verlas ni tocarlas? ¡Ahi esta! Se llama electroforesis en gel (pronunciado ee-LEK-tro-fo-REE-sis) (presione ADELANTE para continuar). Scientists use gel electrophoresis whenever they need to sort DNA strands according to length. This technique is also useful for separating other types of molecules, likes proteins. How does this work? (press FORWARD to continue). Los científicos usan electroforesis en gel cuando necesitan clasificar hebras de ADN de acuerdo con la longitud. Esta técnica también es útil para separar otros tipos de moléculas, como las proteínas. ¿Como funciona esto? (presione ADELANTE para continuar). The “gel” is the filter that sorts the DNA strands. It’s like a sponge made of Jell-O® with many small holes in it. (press FORWARD to continue). El "gel" es el filtro que clasifica las cadenas de ADN. Es como una esponja hecha de gelatina con muchos agujeros pequeños.

(presione ADELANTE para continuar). We place DNA samples into holes at one end of the gel. (press FORWARD to continue). Colocamos muestras de ADN en agujeros en un extremo del gel. (presione ADELANTE para continuar). “electrophoresis” is how we push the DNA strands through the gel filter. By adding an electrical current, we can make the DNA move. (press FORWARD to continue). "Electroforesis" es cómo empujamos las hebras de ADN a través del filtro de gel. Al agregar una corriente eléctrica, podemos hacer que el ADN se mueva. (presione ADELANTE para continuar). Short strands move through the holes in the gel more quickly than long strands. Over time, the shorter strands in the sample will move farther away from the starting point than the longer strands. DNA strands of the same length will move at the speed and end up grouped together. In this way, the DNA strands in the simple sort themselves. (press FORWARD to continue). Las hebras cortas se mueven a través de los agujeros en el gel más rápidamente que las hebras largas. Con el tiempo, las hebras más cortas de la muestra se alejarán más del punto de partida que las hebras más largas. Las cadenas de ADN de la misma longitud se moverán a la velocidad y terminarán agrupadas. De esta manera, los filamentos de ADN en el tipo simple sí mismos. (presione ADELANTE para continuar). Staining th sorted groups of DNA makes them visible to the naked eye. Although we can’t see a single DNA strand, we can see large groups of stained DNA strands. These groups show up as bands in the gel. (press FORWARD to continue). La tinción de los grupos de ADN ordenados los hace visibles a simple vista. Aunque no podemos ver una sola cadena de ADN, podemos ver grandes grupos de cadenas de ADN teñidas. Estos grupos aparecen como bandas en el gel. (presione ADELANTE para continuar). Now it’s your turn to “run a gel” (that’s scientist slang for gel electrophoresis!) Follow along with the steps shown above! (press FORWARD to continue). Ahora es tu turno de "correr un gel" (¡esa es la jerga científica para la electroforesis en gel!) ¡Siga los pasos que se muestran arriba! (presione ADELANTE para continuar). Here is what you will need to make a gel. Powdered agarose, buffer, a flask, a microwave, the gel mold and the gel comb.

Making an electrophoresis gel is a lot like making Jell-o®. but you don’t want toe at this type of gel! (press FORWARD to continue). Esto es lo que necesitará para hacer un gel. Agarosa en polvo, tampón, un matraz, un microondas, el molde de gel y el peine de gel. Hacer un gel de electroforesis es muy parecido a hacer Jell-o®. ¡pero no quieres usar este tipo de gel! (presione ADELANTE para continuar). STEP 1: MAKE THE GEL put a small amount of agarose into the flask. Agarose is a dried powder similar to gelatin but made from seaweed. Add some liquid buffer to the flask. The buffer is a salt wáter solution that will let electrical charges flow through the gel. We’ve loosely placed plastic wrap over the top of the flask to prevent the liquid from boiling over. Open the microwave by pressing the “open” button. Place the flask containing the buffer and agarose mixture inside the microwave. Heat the mixture until agarose melts into the buffer. We’ve removed the plastic wrap rom the top of the flask. Pour the melted agarose mixture into the mold. Notice that the mold has tape in each end to hold in the melted agarose. Place the comb into the gel on one end. The notches in the gel mold hold it in place. Let the gel cool and solidify. This usually takes about half an hour, but we’ll speed up the clock for you. As the gel oools, tiny holes will from in it. (press FORWARD to continue). Carefully remove the comb, leaving empty Wells for the DNA samples. Your gel is now ready to run! Ponga una pequeña cantidad de agarosa en el matraz. La agarosa es un polvo seco similar a la gelatina pero hecha de algas. Agregue un poco de tampón líquido al matraz. El tampón es una solución de agua salada que permitirá que las cargas eléctricas fluyan a través del gel. Colocamos holgadamente una envoltura de plástico sobre la parte superior del matraz para evitar que el líquido hierva. Abra el microondas presionando el botón "abrir". Coloque el matraz que contiene el tampón y la mezcla de agarosa dentro del microondas. Calienta la mezcla hasta que la agarosa se derrita en el tampón. Hemos quitado la envoltura de plástico de la parte superior del matraz. Vierta la mezcla de agarosa derretida en el molde. Observe que el molde tiene cinta adhesiva en cada extremo para retener la agarosa derretida. Coloque el peine en el gel en un extremo. Las muescas en el molde de gel lo mantienen en su lugar. Deje que el gel se enfríe y solidifique. Esto generalmente demora aproximadamente media hora, pero aceleraremos el reloj por usted.

A medida que el gel se enfría, pequeños agujeros saldrán de él. (presione ADELANTE para continuar). Retire con cuidado el peine, dejando pozos vacíos para las muestras de ADN. ¡Tu gel ya está listo para correr! STEP 2: SET UP THE GEL APPARATUS Now it’s time to set up the electrophoresis box You will need the gel you just made, an electrophoresis box and another bottle of buffer (press FORWARD to continue). Pour the buffer into the electrophoresis box. Ahora es el momento de configurar la caja de electroforesis Necesitará el gel que acaba de hacer, una caja de electroforesis y otra botella de tampón (presione ADELANTE para continuar). Vierta el tampón en la caja de electroforesis. STEP 3: LOAD THE DNA SAMPLE INTO THE GEL Place the gel, still in the mold, into the electrophoresis boxx. We have removed the tape rom the ends of the gel mold. The gel should be just barely submerged in the buffer. The buffer conducts the electical ourrent from one end of the gel to the other. It will also keep the gel from drying out during the experiment. You’re ready to load the DNA sample into the gel. Here’s what you’ll need: loading buffer, the tuve of DNA, the DNA size standard, a micropipettor, the electrophoresis box containing buffer and the gel, and pipette tips. (press FORWARD to continue). With a clean pipet tip, use the micropipettor to suck up some loading bufer, then add it to the DNA simple. DNA samples are prepared in a clear liquid solution that would be hard to see if you tried to load it directly into a well. The loading buffer contains a dye that makes the simple easy to see. It’s also slightly goopy. This makes the DNA sample thicker, so that lt will drop into the well instead of floating away. The DNA size standard already contains loading buffer. Next, you will use the micropipettor to transfer the DNA simple from the tuve into the well of the gel. First, suck up some off the DNA simple into the pipet tip. Eject the DNA sample from the pipet into the frist well of the gel. Nice job! In real life, loading the sample into the Wells takes some practice, so don’t be disappointed if you miss your target the first few times. (press FORWARD to continue). Using a clean pipet tip, use the micropipettor to suck up DNA size standard. Transfer the DNA size standard into next empty well.

The DNA size standard contains DNA strands of known lengths. Running it on the gel will give you a reference by which to estimate the lengths of DNA strands in your sample. Coloque el gel, todavía en el molde, en la caja de electroforesis. Hemos quitado la cinta de los extremos del molde de gel. El gel debe estar apenas sumergido en el tampón. El tampón conduce al conductor eléctrico de un extremo del gel al otro. También evitará que el gel se seque durante el experimento. Estás listo para cargar la muestra de ADN en el gel. Esto es lo que necesitará: tampón de carga, el ADN del ADN, el estándar de tamaño de ADN, una micropipeta, la caja de electroforesis que contiene el tampón y el gel, y puntas de pipeta. (presione ADELANTE para continuar). Con una punta de pipeta limpia, use el micropipeteador para absorber un poco de tampón de carga, luego agréguelo al ADN simple. Las muestras de ADN se preparan en una solución líquida transparente que sería difícil de ver si intentara cargarla directamente en un pozo. El búfer de carga contiene un tinte que hace que lo simple sea fácil de ver. También es un poco pegajoso. Esto hace que la muestra de ADN sea más gruesa, por lo que caerá en el pozo en lugar de flotar. El estándar de tamaño de ADN ya contiene tampón de carga. A continuación, usará el micropipeteador para transferir el ADN simple del tuve al pozo del gel. Primero, aspire un poco del ADN simple en la punta de la pipeta. Expulse la muestra de ADN de la pipeta en el primer pozo del gel. ¡Buen trabajo! En la vida real, cargar la muestra en los pozos requiere algo de práctica, así que no se decepcione si pierde su objetivo las primeras veces. (presione ADELANTE para continuar).  Con una punta de pipeta limpia, use la micropipeta para absorber el estándar de tamaño de ADN. Transfiera el estándar de tamaño de ADN al siguiente pozo vacío. El estándar de tamaño de ADN contiene cadenas de ADN de longitudes conocidas. Ejecutarlo en el gel le dará una referencia para estimar las longitudes de las cadenas de ADN en su muestra STEP 4: HOOK UP THE ELECTRICAL OURRENT AND RUN THE GEL It’s time to turn on the electricity and run your gel! When you turn on the power, the black end will generate a negative charge. The red will generate a positive charge. Together, they will pass the current through the gel. DNA has a negative charge. To move the DNA through the gel, you must putt he black cord-the negative charge- closest to the Wells. (press FORWARD to continue). Plug the black cord from the electrophoresis box into the matching outlet on the power supply. Click the location on the power supply where you want to plug in the black cord. That’s right! Now click the location on the power supply where you want to plug in the red cord. Turn on the power supply. Your gel is off and running! Let’s look into the gel box to see what’s happening. Check for tiny air bubbles coming out of the electrodes at both ends of the electrophoresis box. (press FORWARD to continue). ¡Es hora de encender la electricidad y usar el gel!

Cuando enciende la alimentación, el extremo negro generará una carga negativa. El rojo generará una carga positiva. Juntos, pasarán la corriente a través del gel. El ADN tiene una carga negativa. Para mover el ADN a través del gel, debe colocar el cable negro, la carga negativa, más cerca de los pozos. (presione ADELANTE para continuar). Conecte el cable negro de la caja de electroforesis a la toma de corriente correspondiente en la fuente de alimentación. Haga clic en la ubicación de la fuente de alimentación donde desea enchufar el cable negro. ¡Así es! Ahora haga clic en la ubicación de la fuente de alimentación donde desea enchufar el cable rojo. Encienda la fuente de alimentación. ¡Tu gel está apagado y funcionando! Echemos un vistazo a la caja de gel para ver qué está pasando. Compruebe si salen pequeñas burbujas de aire de los electrodos en ambos extremos de la caja de electroforesis. (presione ADELANTE para continuar). STEP 5: STAIN THE GEL AND ANALYZE THE RESULTS Repelled by the negative charge, the DNA moves through the gel toward the positive charge at the other end. Short DNA strands move through the holes in the gel more quickly tan long strands. Over time, the shorter DNA strands will migrate farther from the starting point tan the longer strands. We can’t actually see the migrating DNA bands (grey), buy we can see the blue dye from the loading buffer as it migrates. (press FORWARD to continue). You’ve finished running yuor gel. We’ve taken the gel mold with the gel in it out o the electrophoresis box. The time has come to analyze your simple and estimate the length of the DNA strands! (press FORWARD to continue). First you need to stain the DNA in your gel using DNA staining solution. The stain is a Chemical called ethidium bromide, which binds to DNA and showa up under fluorescent light. Although we can’t see single DNA strands, we can see large groups of stained DNA strands. These groups will show up as bands in the gel. (press FORWARD to continue). Drag the gel out of the mold and put it into the DNA staining solution. Because ethidium bromide binds to DNA, it can damage the DNA in your cells. If you stain a gel in real life, wear gloves and avoid direct contact with the staining solution. It takes about half an hour to stain the DNA in the gel. We’ll speed up the clock or you. (press FORWARD to continue). Remove the gel from the staining solution and place it in the UV (ultraviolet) light box. Turn on the UV box. Ultraviolet (UV) light from the box can damage your eyes. If you do this in real life, be sure to wear protective goggles! Now you can determine the appoximate lengths of the DNA strands in your simple! Compare the bands from the DNA simple with the bands of known length from the DNA size standard. Enter the estimated length, in base pairs (bp), for each band in your DNA simple. Electrophoresis cannot tell us the exact DNA lenfths of DNA strands, jus a good estimate. So, give it your best guess base don the DNA size standards. Press FORWARD when you are finished to check your answers. PASO 5: MANCHA EL GEL Y ANALIZA LOS RESULTADOS

Repelido por la carga negativa, el ADN se mueve a través del gel hacia la carga positiva en el otro extremo. Las hebras cortas de ADN se mueven a través de los agujeros en el gel más rápidamente que las hebras largas. Con el tiempo, las cadenas de ADN más cortas migrarán más lejos del punto de partida que las cadenas más largas. En realidad no podemos ver las bandas de ADN en migración (gris), pero podemos ver el tinte azul del búfer de carga a medida que migra. (presione ADELANTE para continuar). Has terminado de usar tu gel. Hemos sacado el molde de gel con el gel dentro de la caja de electroforesis. ¡Ha llegado el momento de analizar su simple y estimar la longitud de las cadenas de ADN! (presione ADELANTE para continuar). Primero debe teñir el ADN en su gel usando una solución de tinción de ADN. La mancha es un químico llamado bromuro de etidio, que se une al ADN y aparece bajo luz fluorescente. Aunque no podemos ver cadenas de ADN individuales, podemos ver grandes grupos de cadenas de ADN teñidas. Estos grupos aparecerán como bandas en el gel. (presione ADELANTE para continuar). Arrastre el gel fuera del molde y colóquelo en la solución de tinción de ADN. Debido a que el bromuro de etidio se une al ADN, puede dañar el ADN en sus células. Si mancha un gel en la vida real, use guantes y evite el contacto directo con la solución de tinción. Se tarda aproximadamente media hora en teñir el ADN en el gel. Aceleraremos el reloj o tú. (presione ADELANTE para continuar). Retire el gel de la solución de tinción y colóquelo en la caja de luz UV (ultravioleta). Encienda la caja UV. La luz ultravioleta (UV) de la caja puede dañar sus ojos. Si haces esto en la vida real, ¡asegúrate de usar gafas protectoras! ¡Ahora puede determinar las longitudes aproximadas de las cadenas de ADN en su simple! Compare las bandas del ADN simple con las bandas de longitud conocida del estándar de tamaño de ADN. Ingrese la longitud estimada, en pares de bases (pb), para cada banda en su ADN simple. La electroforesis no puede decirnos las longitudes exactas de ADN de las cadenas de ADN, solo una buena estimación. Entonces, déle su mejor base de conjetura con los estándares de tamaño de ADN. Presione ADELANTE cuando haya terminado para verificar sus respuestas. All of your estimations are correct! The estimated length (in base pairs) of each band in your DNA simple is base don how they line up with the bands of known lwngth in the DNA size standard. The top band is approximately 6000 base pairs, the second is approximately 3500 base pairs and the third is approximately 1500 base pairs. Congratulations! You have just run your own DNA gel electrophoresis experiment! Press FORWARD to start over. ¡Todas sus estimaciones son correctas! La longitud estimada (en pares de bases) de cada banda en su ADN simple es la base de cómo se alinean con las bandas de longitud conocida en el estándar de tamaño de ADN. La banda superior es de aproximadamente 6000 pares de bases, la segunda es de aproximadamente 3500 pares de bases y la tercera es de aproximadamente 1500 pares de bases. ¡Felicidades! ¡Acaba de realizar su propio experimento de electroforesis en gel de ADN! Presione ADELANTE para comenzar de nuevo.