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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FALCULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO

CATEDRA DE: TÉCNICAS HISTOLÓGICAS

DOCENTE: LIC. IVÁN PEÑAFIEL

GRUPO: N°14 TERCER SEMESTRE

PERIODO ACADÉMICO: OCTUBRE 2015- FEBRERO 2016

RIOBAMBA – ECUADOR

[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES GRUPO N°-14

INTEGRANTES:

N°1 2 3 4

APELLIDOS Y NOMBRES Bonifaz Hidalgo Andrea Fernanda Guaman Guaraca Wilmer Patricio Ruiz Chasi Vanessa Michelle Vela Padilla Jhonatan David

TEMA:

TIPOS DE DESCALCIFICADORES

N°1

25%

50%

2

3

4

75%

PARTICIPACIÓN 100% Observación 100% No hubo inconvenientes al momento de hacer la investigación 100% No hubo inconvenientes al momento de hacer la investigación 100% No hubo inconvenientes al momento de hacer la investigación 100% No hubo inconvenientes al momento de hacer la investigación

Cal. Docente

INTRODUCCIÓN TECNICAS HISTOLOGICAS |

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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES Se denomina decalcificación a la completa eliminación de las sales Calcio presentes en los tejidos tras haber realizado su fijación. Éste procedimiento se realiza de forma sistemática sobre tejidos mineralizados (dientes y huesos= y esporádicamente sobre material anatomopatológico con calcificaciones que puedan dificultar o impedir la observación al microscopio. Solo está desaconsejado decalcificar el tejido en las enfermedades óseas metabólicas donde nos interesa valorar el equilibrio entre síntesis y destrucción de matriz ósea y su grado de calcificación. En éste último caso utilizaríamos un micrótomo motorizado específico para tejidos duros. Los tejidos que contienen elementos duros, como el tejido óseo, no se pueden cortar. Se deben eliminar las sales de carbono de calcio y el fosfato de calcio-flúor de los huesos o de los depósitos calcáreos patológicos. Los tejidos se descalcifican con ácido fuerte, de forma que el CO3H2 es eliminado de sus sales y pasa a formar parte de una sal soluble.

OBJETIVOS OBJETIVO GENERAL

Conocer tipos de descalificadores que se utilizan en anatomía patológica para el ablandamiento de tejidos.

OBJETIVOS ESPECÍFICOS

Determinar las propiedades que deben tener un descalificador para el procesamiento de tejidos. Diferenciar las principales soluciones descalificadores y su composición para emplear realizar los cortes representativos. Conocer el procedimiento para la descalcificación de las piezas anatómica que llega al laboratorio de anatomía patológica. TECNICAS HISTOLOGICAS |

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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES

MARCO TEÓRICO Decalcificación química Los principales agentes decalcificadotes están formados por ácidos fuertes o débiles empleados solos o en conjunción a distintos líquidos fijadores. Los principales reactivos que se utilizan son ácidos inorgánicos fuertes como el ácido nítrico o el clorhídrico y débiles como el ácido sulfuroso y también ácidos orgánicos como el ácido fórmico el acético y el tricloroacético. Todas estas sustancias tiene la ventaja de ser estables, baratas y de fácil disponibilidad. Un líquido descalcificante ideal debe reunir una serie de cualidades. Estas cualidades son las siguientes: 1. Debe producir una eliminación completa de los depósitos cálcicos. 2. No debe provocar efectos indeseables o artefactos sobre los tejidos tratados. 3. No interferir con los procedimientos de tinción que se emplean posteriormente. El agente más rápido y eficaz es el ácido nítrico y se emplea en soluciones del 5 al 7.5%. El problema que tiene es que utilizado a concentración elevada, por encima del 6% es que tiende a producir gran destrucción tisular que se atenúa en disolución alcohólica. NORMAS

QUE

DEBEN

OBSERVARSE

DURANTE

EL

PROCESO

DE

DESCALSIFICACIÓN: 1. Para disminuir las alteraciones que se pueden producir los recalcificantes, la fijación debe haberse completado antes de iniciar el proceso. 2. La concentración del descalcificante debe ser óptima, de manera que se alcance el equilibrio entre la mayor rapidez de las disoluciones más concentradas y el menor efecto de alteración tisular a consecuencia de las soluciones muy diluidas. TECNICAS HISTOLOGICAS |

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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES 3. Se usara un volumen óptimo de líquido descalcificadora y será renovado con frecuencia. 4. Para acelerar el proceso, los bloques se suspenderán en el centro del recipiente de descalcificación, pues en el fondo se acumula la mayor concentración de sales cálcicas solubles. 5. La temperatura será de 25°C. 6. Para acelerar el proceso de descalcificación química se realizaran lavados en soluciones neutralizantes (agua corriente) 7. Es necesario un pre tratamiento de los cortes con solución acuosa de carbonato de litio al 1%, para asegurar la neutralización de los ácidos empleados en la descalcificación. RECOMENDACIONES PARA LA DESCALCIFICACIÓN  Cortar en pequeños fragmentos de mínimo grosor aunque la superficie sea grande.  Se utiliza un cierra de mano de dientes muy fino.  Cambiar frecuentemente el descalcificador y detenerlo cuando sea completa la presencia de Ca en solución descalcificante.  El tipo de descalcificador se elige en función del volumen de la pieza y de la cantidad de elementos que contiene; los huesos compactos y los corticales precisan ácidos fuertes (HCL, Ácido nítrico, ácido sulfúrico).

SOLUCIONES DESCALCIFICANTES 

Ácido clorhídrico:

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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES No es tan rápido como el nítrico pero produce menor agresión tisular y no precisa lavado post-decalcificación. 

Los ácidos orgánicos:

Producen escasos artefactos titulares y apenas interfieren en los resultados finales de la tinción pero actúan muy lentamente y requieren la renovación frecuente del líquido descalcificante. Por eso están indicados exclusivamente cuando la muestra es tejido óseo esponjoso y contiene solo pequeñas espículas calcificadas. En el proceso de decalcificación hay que seguir unas normas que son: 1. Para disminuir en lo posible los efectos alterativos decalcificador, la fijación debe haberse completado antes de iniciar el proceso. 2. La concentración del agente decalcificante debe ser óptima con un volumen de líquido decalcificador mínimo de 1/20 que debe ser renovado con frecuencia. 3. Para acelerar el proceso los bloques deben ser suspendidos en el centro del recipiente porque en el fondo se acumula mayor concentración de sales cálcicas. 4. La temperatura ideal para realizar la decalcificación se encuentra en torno a los 25ºC. Por encima de ésta temperatura el proceso de decalcificación se acelera pero también lo hace el de descomposición del tejido. 5. La agitación suave ya sea manual o mecánica generalmente acelera el proceso. 6. A veces la adicción de alguna resina de intercambio iónico. Al medio de decalcificación acelera el proceso porque atrapa los iones de Calcio liberados por el decalcificador químico. 7. Después de cualquier proceso de decalcificación química donde se haya empleado ácido, el exceso de éste último ha de ser eliminado mediante lavados en soluciones neutralizantes, lo mejor el agua corriente. A veces para disminuir el edema en las fibras colágenas, se da un lavado con una solución de sulfato sódico al 5%.

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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES 8. La coloración de tejidos decalcificados puede ser interferida por un exceso residual de los ácidos empleados para eliminar las sales cálcicas por este motivo a veces se tratan los cortes con una solución acuosa de carbonato de Litio al 1% para asegurar la neutralización completa. 3. Soluciones descalcificantes más usadas: 

SOLUCIÓN ACUOSA DE ACIDO NITRICO:

Ac. Nítrico concentrado……………………………………………………….5 mL Agua destilada………………………………………………..………...…….95 mL El caso de que la solución sea alcohólica la proporción de acido nítrico debe ser del 7.5%. El tiempo medio de decalcificación para un bloque óseo de 5mm de espesor es de 12 a 24 horas. Ventajas: 1. provoca rápida decalcificación 2. Causa baja retracción tisular. 3. Mejor coloración de los núcleos que la solución de formol y nítrico 4. No es necesario neutralizar el agente decalcificante sino que puede pasar directamente el tejido a etanol de 70º para iniciar la deshidratación. Inconvenientes: 1. La prolongación excesiva del tiempo de decalcificación suele anular la fijación previa y alterar progresivamente el tejido. 

FORMULINA - ÁCIDO NÍTRICO:

Formalina…………………………………………………….………………10 mL Ác. Nítrico concentrado………………………………………………………10 mL TECNICAS HISTOLOGICAS |

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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES Agua destilada………………………………………………………………...80 mL Tiempo medio de calcificación para un bloque de tejido óseo de 5 mm de espesor es de 1 a 3 días. Ventajas: 1. Es de acción relativamente rápida. 2. Provoca menos alteraciones titulares que la solución acuosa de acido nítrico. 3. Por su facilidad de manejo es la solución decalcificante más utilizada para técnicas histológicas de rutina. Inconvenientes: 1. Dificulta la tinción nuclear 2. Antes de su procesamiento los tejidos requieren neutralización en sulfato sódico al 5% y un lavado posterior en agua corriente al menos durante 2 horas. 

SOLUCIÓN ACUOSA DE ÁCIDO FÓRMICO:

Acido fórmico al 90%...................................................................................5-10 mL Agua destilada…………………………………………………………….90-95 mL Tiempo medio para un bloque óseo de 5 mm de espesor es de 3 a 7 días. Ventajas: 1. Fija y descalcifica simultáneamente. 2. No dificulta demasiado la coloración nuclear. 3. esta especialmente recomendado para decalcificar bien Inconvenientes: TECNICAS HISTOLOGICAS |

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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES 1. Acción muy lenta. 2. Requiere neutralización previa a la inclusión en sulfato sódico al 5% 3. Lavado en agua posteriormente durante 18 horas. Existen también soluciones fijadoras con poder decalcificante. Entre los más utilizados son los de los líquidos de Bouin, Bouin Hollander, y Zenker. Todo ellos poseen una débil capacidad decalcificadota por la cual se emplea casi exclusivamente como decalcificantes de los cilindros biópsicos de medulas óseas, están constituidos sobre todo por esponjosas y para eliminar pequeñas calcificaciones distróficas. Decalcificación con quelantes químicos Los quelantes químicos son sustancias capaces de combinarse con iones metálicos en solución o estabilizados en forma de sales o constituir nuevos compuestos generalmente solubles en agua. El quelante que se utiliza normalmente que es el ácido etilén-dianinotetracético. La sustracción de iones cálcicos que procura el EDTA se realiza de forma muy lenta pero posee la ventaja de no inducir artefactos. Esta solución se comercializa y se prepara: Sal disódica de EDTA………………………………………………………….5.5 gr. Formalina neutra al 10%................................................................................100.0 mL El tiempo medio de decalcificación para un bloque de 5mm de espesor de esponjosa ósea de 1 a 3 semanas y para un bloque de hueso cortical entre 6 y 8 semanas. La decalcificación química, puede acelerarse con el empleo de ultrasonidos. El método se fundamenta en someter el aumento una vez inmerso en la solución decalcificación a la acción de ondas ultrasónicas en un baño líquido. De esta forma se induce una vibración molecular sobre el material calificado favorece la formación de sales entre los iones desprendidos y los ácidos o querantes usados durante el proceso.

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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES Decalcificación electrolítica Se basa en el empleo de una corriente eléctrica para provocar la ionización de la solución salina o descalcificante en que se encuentra sumergido el tejido de esta manera las sales insolubles de calcio presentes en el tejido son desplazadas hacia el electrodo negativo y los radicales ácidos hacia el polo electropositivo. Este proceso suele realizarse entre 30 y 45ºC y para especímenes pequeños. Se completa entre 45 y 60 minutos a pesar de las ventajas del procedimiento no se utiliza de forma rutinario en la mayoría de los laboratorios de anatomía patológica.

Pruebas de control sobre el grado de decalcificación tisular El control exacto del tiempo óptimo de decalcificación tisular es importante porque una duración mayor provoca maceración y destrucción celular y un acortamiento provoca el que no se puedan secciones microtómicas adecuadas. Por eso se precisan mecanismo de control que permitan establecer el control en el que el proceso sea el completado. Existen 3 tipos de métodos: 1. Físicos: que se basan en la experiencia del técnico para detectar mediante el tacto el grado de dureza y calcificación tisular, Histológicamente es muy subjetivo y puede dañar el tejido durante la manipulación por lo cual no son aconsejables. 2. Radiológicas: bastante sensibles pero requieren instrumento complejo y son costosos. 3. Químicos: son normalmente de elección y se basan en la detección de iones cálcicos en el líquido de calcificante. Cuando en los sucesivos recambios de líquido dejan de encontrarse iones cálcicos se considera que el proceso ha finalizado. La prueba más utilizada es el Oxalato Cálcico. Decalcificación de bloques titulares incluidos en parafina.

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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES Durante el proceso de corte de los bloques incluidos en parafina, aparecen a menudo calcificaciones no detectadas. En estos casos graves desperfectos en la cuchilla que pueden llegar a impedir que se realicen las secciones necesarias. Este problema puede subsanarse sumergiendo el bloque en líquido de PERENYI o en el ácido fórmico al 50%. Antes de realizar el corte o bien empleando el método de LENDRUM que consiste en exponer la superficie de corte a la acción de una solución de ácido clorhídrico al 2% durante varias horas. Ácido nítrico al 10%.....40 mL Etanol absoluto….30 mL Ácido crómico al 0.5% en agua destilada……30 mL Centrar inmediatamente antes de su uso, el tiempo medio de decalcificación para un bloque óseo de 5 mm de espesor es de 2 a 6 días. Ventajas:  Prepara adecuadamente la tinción nuclear.  Apenas provoca maceración tisular.  No requiere neutralización previa a la intrusión tisular. Inconvenientes: 1. Actúa lentamente, por lo que no puede emplearse para trabajos de urgencia. (1)

CONCLUSIONES Conocimos los diferentes tipos de descalificadores que se utilizan en el laboratorio de anatomía patológica para el procesamiento de tejidos.

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[]TIPOS DE DESCALCIFICADORES

Cada uno de los descalificadores utilizados tienen sus propiedades con las cuales ellos pueden realizar dicho proceso por lo cual deben tener volúmenes previamente indicados. Reconocimos que para realizar la descalcificación de una pieza anatómica primero debe llegar bien fijada. RECOMENDACIONES Antes de aplicar la sustancia descalcificadora se debe conocer las propiedades de la sustancia. Se debe utilizar una cierra de mano de dientes finos Tener en cuenta el tiempo en q se le deja en la solución ya que esto puede eliminar la fijación previa.

BIBLIOGRAFÍA

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SITIOS WEB 1. http://html.rincondelvago.com/decalcificacion.html.

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