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PROCEDIMIENTO NORMALIZADO DE OPERACIÓN (PNO)

Datos generales del PNO Contenido

EQUIPO 5

Nombre del PNO: Hemocultivo

Elaboración y/o actualización del PNO: Responsable: analista Frecuencia: anual

Fecha de emisión: sábado, 11 de diciembre de 2010

Vigente a partir de: lunes, 13 de diciembre de 2010

Departamento ó Área Bacteriología

Frecuencia de aplicación del PNO: Cada que se recibe y procesa una muestra para hemocultivo

Próxima revisión: martes, 13 de diciembre de 2011 página

CONTENIDO............................................................................................................................................................................................1

1.0 Autorizaciones.........................................................................................................................................1 2.0 Objetivo.....................................................................................................................................................2 3.0 Alcance.....................................................................................................................................................2 4.0 Responsabilidades..................................................................................................................................2 5.0 Definiciones. Se obtuvieron de una única fuente bibliográfica (10.2.2).............................................4 6.0 Seguridad..................................................................................................................................................5 7.0 Equipo, materiales y reactivos...............................................................................................................6 PROFESIONAL ANALISTA.............................................................................................................................................................................9 PROFESIONAL ANALISTA ............................................................................................................................................................................9 PROFESIONAL ANALISTA.............................................................................................................................................................................9

9.0 Criterios de aceptación.........................................................................................................................11 10.0 Referencias bibliográficas..................................................................................................................11 11.0 Formatos y anexos..............................................................................................................................12

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1.0 Autorizaciones Elaboró: Nombre:

Puesto:

Firma:

Fecha: Página 1 de 17

N° de revisión:

“Hemocultivo ”

Antonio de Jesús Solórzano Calvario

Laboratorio de Bacteriología

lunes, 13 de diciembre de 2010

Estudiante

Revisó y Aprobó: Nombre: Q.F.B. Juan Antonio Flores Cornejo

Puesto:

Firma:

Profesor de la Materia control de calidad farmacéutico y biológico

Fecha: lunes, 13 de diciembre de 2010

Revisó y Autorizó: Nombre:

Puesto: Firma: Responsable del MQC. Lorena Laboratorio de vinculación Berenice Godoy Mejía Análisis clínicos y Bacteriológicos MQC. Ma. Dolores Díaz de León

Responsable del area de Bacteriología.

Fecha: lunes, 13 de diciembre de 2010

lunes, 13 de diciembre de 2010

2.0 Objetivo Indicar los métodos adecuados para la correcta toma y procesamiento de muestras para Hemocultivo. Describir la técnica de siembra de hemocultivo para el aislamiento de bacterias causantes de infecciones del torrente sanguíneo. 3.0 Alcance Se aplica para el aislamiento bacteriano a partir de hemocultivos en el diagnóstico bacteriológico de infecciones del torrente sanguíneo. Método para la toma de la muestra, conservación y transporte de la misma. 4.0 Responsabilidades 4.1 Es responsabilidad del jefe del laboratorio: 4.1.1 Planificar las acciones, organizar, controlar y capacitar al personal para cumplir las disposiciones contenidas en el presente PNO 4.1.2 Asegurar el control interno de la calidad, la idoneidad del personal, equipos, materiales, reactivos e instalaciones. 4.1.3 Asegurar la correcta disposición de los RPBI´s 4.1.4 Asegurar la confiabilidad de los resultados emitidos por los analistas Página 2 de 16

N° de revisión:

4.2 4.2.1 4.2.2 4.2.3 4.2.4

“Hemocultivo ”

Laboratorio de Bacteriología

Es responsabilidad del profesional analista encargado, prestadores de servicio social y practicantes profesionales: Seguir los pasos y recomendaciones indicados en este PNO al realizar un hemocultivo Trabajar con higiene y cuidado para evitar contagios innecesarios Manejar con precaución las muestras biológico-infecciosas Mantenerse actualizado y capacitado en la realización de un hemocultivo

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N° de revisión:

“Hemocultivo ”

Laboratorio de Bacteriología

5.0 Definiciones. Se obtuvieron de una única fuente bibliográfica (10.2.2) 5.1 Absceso: Acumulación localizada de pus en un tejido u órgano. Aeróbico: Un organismo que requiere oxígeno o aire atmosférico para su crecimiento y 5.2 reproducción. Aglutinación: Reacción por la que se provoca la agrupación de partículas, bacterias y 5.3 células suspendidas en un medio líquido. 5.4 Aislamiento primario: Desarrollo inicial de microorganismos a partir de una muestra clínica 5.5 Antimicrobiano: Agente biológico o químico que inhibe el crecimiento de microorganismos 5.6 Asepsia: Desinfección de un tejido vivo o piel. Bacteria: Microorganismo unicelular microscópico perteneciente a los procariotes que se 5.7 multiplica por fisión binaria y carece de clorofila. Se diferencian por la coloración de Gram. Bacteria Gram negativa: Aquellas bacterias que no retienen el colorante primario (violeta 5.8 de genciana o cristal violeta) en el método de Gram son decoloradas por el alcohol y toman el color del colorante contraste (safranina o fucsina) dando un color rojizo. Bacteria Gram positiva: Aquellas bacterias que retienen el colorante primario del método 5.9 de Gram, resisten la decoloración por el alcohol y no son coloreadas por el colorante de contraste reteniendo el color azul púrpura inicial. Bacteriemias: presencia de bacterias en la sangre. Las bacteriemias no demostradas son frecuentes y por lo general desaparecen espontáneamente. El diagnóstico se realiza por 5.10 hemocultivo; cuando se instaura el tratamiento antibiótico debe ser específico para el organismo detectado y para la localización de la infección de comienzo. Bioseguridad: Conjunto de medidas preventivas para proteger la salud y la seguridad 5.11 humana y del ambiente frente a diferentes riesgos producidos por agentes biológicos, físicos, químicos o mecánicos. Cepa bacteriana: Cultivo puro de bacterias formada por los descendientes de un solo 5.12 aislamiento. Colonia: Crecimiento visible de microorganismos, generalmente en medios sólidos, 5.13 originado por la multiplicación de un solo organismo. Todos son la progenie de una única bacteria preexistente. Coloración Gram: Método de tinción basado en la propiedad de retener o no el colorante 5.14 cristal violeta en la pared celular bacteriana debido a su composición bioquímica después de ser sometido a un tratamiento de decoloración Desinfección: Destrucción de las formas vegetativas de las bacterias en objetos 5.15 inanimados. Se realiza con agentes químicos en estado líquido o con agua a temperaturas superiores a 75 °C. 5.16 Desinfectante: Agente químico utilizado para el proceso de desinfección. Esterilización: Proceso validado que permite la eliminación de toda forma de vida 5.17 microbiana incluyendo endosporas bacterianas. Puede conseguirse por medio de métodos químicos, físicos o gaseosos. Hemólisis: Presencia de restos de eritrocitos lisados alrededor de una colonia desarrollada 5.18 en una placa de sangre de carnero.

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“Hemocultivo ”

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Hemólisis alfa: Las colonias están rodeadas por una destrucción parcial de los eritrocitos y 5.19 pérdida de algo de hemoglobina en el agar lo que resulta en una coloración verde (hemólisis incompleta). Hemólisis beta: Las colonias están rodeadas por una zona de hemólisis completa (clara, 5.20 transparente) debido a una destrucción total de los eritrocitos. Incubación: Mantenimiento de cultivos bacterianos en condiciones favorables para su 5.21 desarrollo y multiplicación. Infección: Invasión y multiplicación de microorganismos en un huésped, pudiendo 5.22 progresar hacia una enfermedad. El término enfermedad infecciosa se aplica cuando aparecen signos y síntomas como resultado de la infección. Medio de cultivo: Medio artificial de sustancias nutritivas necesarias para el crecimiento y 5.23 multiplicación de las bacterias in vitro, que puede encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido. Metabolismo: Proceso de degradación y biosíntesis enzimática que tiene lugar dentro de 5.24 una célula y por medio del cual se mantienen las actividades nutricionales y funcionales. Micraerofílico: Organismo que crece y se reproduce mejor en la presencia de una tensión 5.25 del 5% de oxígeno, 10% de anhídrido carbónico y 85% de nitrógeno. 5.26 Microorganismo viable: Es aquel que es capaz de reproducirse. Septicemia: infección sistemática caracterizada por la aparición de patógenos en sangre circulante procede de una infección localizada en cualquier parte del organismo. Se 5.27 diagnostica por hemocultivo y debe tratarse energéticamente con antibióticos. Típicamente la septicemia produce fiebre, escalofríos, postración, dolor, cefalea, náuseas o diarrea. Siembra primaria: Inoculación de una muestra a un medio de cultivo simple, selectivo o de 5.28 enriquecimiento. Subcultivo: Pasaje de bacterias viables derivadas de otro cultivo a un medio de cultivo 5.29 nuevo. 5.30 UFC: Unidad formadora de colonia.

6.0 Seguridad 6.1 Medidas de seguridad 6.1.1 Observar las precauciones universales al manejar muestras de sangre. 6.1.2 Usar guantes al manejar cualquier fluido corporal. 6.1.3 Si es posible hacer todo el procedimiento en cabinas de bioseguridad, o, en su defecto, utilizar una pantalla transparente para manipular la muestra. 6.1.4 Descartar las jeringas, agujas y otros objetos punzantes contaminados en un recipiente especial. 6.2 Equipo de seguridad 6.2.1 Cubre boca 6.2.2 Cofia 6.2.3 Guantes de látex estériles Página 5 de 16

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“Hemocultivo ”

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6.2.4 Lentes de seguridad 6.2.5 Bata 7.0 Equipo, materiales y reactivos

7.1 Equipo 7.1.1 Incubadora 7.1.2 Mechero Bunsen o Cabina de flujo laminar 8.0 Desarrollo del procedimiento 8.1 Fundamento El hemocultivo es un procesamiento bacteriológico que se practica en los casos de septicemia, y que trabajado en forma adecuada suele ser de gran ayuda en el diagnóstico de algunas enfermedades de origen bacteriano. Sin duda alguna el hemocultivo constituye un importante factor diagnóstico en diversas y numerosas infecciones que presentan bacteriemias transitorias e intermitentes, en las cuales las bacterias se encuentran en pequeñas cantidades. Los hemocultivos dan una proporción mas elevada de resultados positivos cuando el muestreo cumple con ciertos requisitos; tal vez sea el procedimiento bacteriológico más exigente en lo que representa a lo que se refiere al muestreo correcto, del cual depende grandemente el éxito del aislamiento de los microorganismos. Dado que la tasa de mortalidad por septicemia puede ser de 40% o más en ciertos pacientes internados, la recuperación a tiempo de bacterias de la sangre del paciente (bacteriemia) puede tener un gran significado diagnóstico y pronóstico. 8.2 Indicaciones

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8.2.1 8.2.2 8.2.3 8.2.4 8.2.5

8.2.6 8.2.7 8.2.8 8.2.9 8.2.10 8.2.11

8.2.12

“Hemocultivo ”

Laboratorio de Bacteriología

Debe obtenerse la muestra antes de iniciar cualquier tratamiento con antimicrobianos. La proporción entre el volumen de sangre obtenida y el volumen de caldo de cultivo debe estar en una relación de 1:5 – 1:10. Se debe seleccionar un sitio diferente de punción en cada toma de muestra. Evitar sangrar de vía intravenosa o catéter arterial a menos que haya una sospecha de sepsis por catéter. El volumen de sangre dependerá de la edad del paciente; por cada venopunción se recomienda: Adultos: 10 – 30 mL Niños: 1 – 5 mL Lactantes: 1 – 2 mL Neonatos: 0,5 – 1 mL En sepsis: Se debe tomar dos o tres muestras de lugares diferentes en un lapso de diez minutos. En endocarditis aguda: Obtener tres muestras de tres lugares diferentes en un lapso de 1 a 2 horas. En endocarditis subaguda: Obtener tres muestras de tres lugares diferentes a intervalos de al menos quince minutos. Si el cultivo es negativo a las 24 horas, obtener tres muestras más. En fiebre de origen desconocido: Obtener dos o tres muestras de lugares diferentes con diferencia de una hora o más entre una y otra muestra. Si el cultivo es negativo a las 24 horas, obtener dos a tres muestras más. Pacientes con tratamiento antimicrobiano: a) Extraer 6 muestras durante 48 horas. b) Recolectar muestras inmediatamente antes de la siguiente dosis de antibiótico. Fiebre de origen oscuro: (abscesos ocultos, fiebre tifoidea, brucelosis): a) Obtener 2 muestras separadas al inicio. Después de 24 a 36 horas obtener 2 más antes del aumento en la temperatura corporal. b) Los rendimientos positivos más allá de 4 hemocultivos son mínimos. El uso de la botella anaeróbica es una práctica que se recomienda cuando hay sospecha clínica de infección por anaerobios. Según algunos autores, el uso de dos botellas aeróbicas mas el cultivo selectivo por anaerobios puede incrementar en un 6% el número de aislamientos clínicamente importantes.

8.3 Recomendaciones Página 7 de 16

N° de revisión:

8.3.1

8.3.2 8.3.3 8.3.4 8.3.5

“Hemocultivo ”

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Tomar la sangre en el momento en que la temperatura del paciente se encuentra elevada (es decir media hora antes del pico febril) u otros síntomas de infección activa, y lo más cerca del principio clínico de la enfermedad, etapa en la que se haría el muestreo más adecuado La obtención de rutina de tres hemocultivos en 24 horas nos da como resultado un aumento significativo de resultados positivos. Tomar las tres muestras en periodos diferentes esto es antes, durante y después del pico febril. En los casos de bacteriemias de ser necesario practicar hemocultivos durante varios días. Alternativamente, las muestras pueden obtenerse de acuerdo con el caso. Por ejemplo: • Bacteriemias continuas: en cualquier momento, ejm. Endocarditis. • Bacteriemias intermitentes: Una hora antes del pico febril, ejm. Brucelosis. 8.4 8.4.1 8.4.2 8.4.3

8.4.4 8.4.5 8.4.6 Profesional analista 8.4.7

8.4.8 8.4.9

8.4.10

Toma de la muestra Elegir la vena palpando la piel antes de desinfectarla. Limpiar la piel alrededor del lugar donde se hará la punción, en un círculo de 5cm de diámetro haciendo la limpieza del centro a la periferia, con alcohol al 70% y menthiolate, frotando vigorosamente. Aplicar yodo al 2% círculos crecientes comenzando por el centro hasta cubrir con yodo toda la superficie anterior. Deja actuar el yodo durante 1 minuto por lo menos. El tiempo es crítico, debe usarse un reloj o un “timbre”. Si el sitio deber ser tocado por técnico, éste debe desinfectar sus dedos en la misma forma. Insertar la aguja en la vena y extraer 10ml de sangre. Una vez extraída la aguja, debe limpiarse el área nuevamente con alcohol al 70% ya que muchos pacientes son sensibles al yodo. -Transferir la sangre a los frascos a través del diafragma o del tapón previamente desinfectado y seco. Utilizando los siguientes medios: Medio sólido líquido Infusión de cerebro y corazón con o sin PABA y agar Caldo soya tripticasa Caldo teoglicolato – 135°C Caldo glucosado con 0.05% de líquido Mezclar la sangre con el medio de cultivo para evitar coagulación. Llevar 1ml de sangre extraída a un tubo conteniendo alguno de los siguientes medios, fundidos y enfriados a 45°C Agar soya tripticasa Eugonagar Agar Columbia Mezclar bien y hacer vaciado en placa. Página 8 de 16

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“Hemocultivo ”

8.5 Profesional analista

8.5.1 8.6

Profesional analista

8.6.1

Profesional analista

8.7 8.7.1 8.7.2 8.7.3

8.7.4

8.7.5

8.7.6 8.7.7

8.7.8

Laboratorio de Bacteriología

Transporte Este proceso debe ser realizado en el laboratorio o por un profesional de la salud con el conocimiento de la técnica. Conservación Solo para el analista debe conservar los hemocultivos hasta por 30 días antes de dar un resultado negativo Procesamiento de la muestra Incubar a 37°C durante siete días observando si existe turbidez en el medio. Incubar a 37°C las botellas o matraces (en posición inclinada si el medio es sólido-líquido) y placas a 37°C y en atmósfera de CO2 si se desea o se requiere. Observar diariamente, agitando los medios líquidos suavemente después de observarlos y colocar el medio sólido-líquido en posición horizontal durante 30 minutos para bañar el medio sólido con la mezcla del medio líquido y sangre y volver a incubarlo en posición vertical. la observación de los medios de cultivo consiste en: -si se observa turbidez en el caldo y el medio sólido la germinación al frasco se le acopla un tapón o capucha por el cual saldrán solo la cantidad de medio que se requiera sin que se contamine el resto del medio. -cambio de color en la sangre (normalmente depositada bajo la forma de una capa roja en el fondo del recipiente o sobre la superficie del medio sólido en el medio doble). -hemólisis -formación de burbujas en el caldo. -cuando se observe germinación bacteriana, preparar frotis, teñidos al Gram. conforme los resultados obtenidos en la observación microscópica. Proseguir la identificación mediante subcultivos en agar sangre, medios de aislamiento selectivo diferencial (EMB, agar sulfito de bismuto, agar MacConkey) y medios para las pruebas bioquímicos diferenciales. Los hemocultivos deben examinarse de menos cada 48 horas. Después de las 24 horas de incubación. se retira una gota del cultivo, con todas las precauciones de asepsia, con un asa o jeringa pequeña, con este material se siembra en una agar sangre una placa en anaerobiosis y otra en aerobiosis o incluye en CO2 si los cultivos son negativos a las 24 horas. se repite el estudio a los 14 y 21 días antes de desechar los medios.

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“Hemocultivo ”

8.7.9

Antes de desechar el frasco del medio sólido-líquido se recomiendo hacer una resiembra en un caldo teoglicolato observar germinación y realizar la identificación.

8.7.10

Practicar antibiograma a las cepas patógenas aisladas.

8.7.11

No debe de dar por negativo un hemocultivo hasta después de 30 días de no observar crecimiento alguno.

8.8 8.8.1

Reporte de hemocultivos Reporte verbal. a) Telefonear inmediatamente después de confirmar un cultivo positivo por Gram. b) Indicar el nombre de la persona que llamó, la fecha y hora de la llamada. c) Proveer el máximo de información posible: número de muestras positivas, morfología y arreglo microscópico, cultivos positivos de otros sitios anatómicos. Un reporte de cocos Gram-positivos en cadenas es más útil que uno de cocos Gram-positivos solamente. Un reporte de E. coli a partir de un urocultivo y un bacilo Gram-negativo en el hemocultivo pueden sugerirle al clínico la posible fuente de infección. Reporte escrito. a) Proveer una copia de todos los resultados preliminares (no crecimiento o positivos por Gram). b) Proveer una copia de los resultados finales. c) Indicar la duración de la incubación en los reportes negativos: “No crecimiento a los 7 días” d) Reportar identificación y antibiograma de los cultivos positivos.

8.8.1.1 8.8.1.2

Profesional analista

Laboratorio de Bacteriología

8.8.1.3

8.8.2 8.8.2.1 8.8.2.2 8.8.2.3 8.8.2.4

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“Hemocultivo ”

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9.0 Criterios de aceptación

9.1

Flora normal y flora patógena FLORA NORMAL

9.2

GRAM POSITIVOS

Negativo

GRAM NEGATIVOS

Negativo

FLORA PATÓGENA Cualquier bacteria que se encuentra Cualquier bacteria que se encuentra

Valores normales

9.2.1 Negativo Al observar los medios, si no se observan las alteraciones el cultivo es negativo, que son 9.2.2 evidentes en los casos positivos. Debe tenerse presente que la incubación prolongada de la sangre en un hemocultivo, 9.2.3 usualmente provoca la desintegración de los eritrocitos lo que causa turbiedad y cambios de color, aún en presencia de germinación bacteriana. Es fácil comprobar la contaminación de un hemocultivo por el aspecto del crecimiento y morfología microscópica de los gérmenes banales, cuyo resultado puede ser la causa de 9.2.4 una esterilización incorrecta del equipo, aseo deficiente de la piel, exposición prolongada al aire fuera de la llama, la siembra del medio de cultivo e inoculo. 10.0 Referencias bibliográficas

10.1 10.1.1 10.1.2 10.1.3 10.2 10.2.1 10.2.2 10.2.3

Documentos mandatorios NORMA Oficial Mexicana NOM-045-SSA2-2005, Para la vigilancia epidemiológica, prevención y control de las infecciones nosocomiales. Koneman E, Allen S, Dowell V, Sommers H. Diagnóstico microbiológico. 3a ed., Buenos Aires. Editorial Médica Panamericana. 1992. Murray, P. R. (Ed.). Manual of Clinical Mícrobiology, Sixth Edition. 1995. American Society for Microbiology: Washington,D.C. Fuentes bibliográficas adicionales consultadas Miller J. Michael, Holmes H. Specimen collection, transport and storage. En: Murray PR, Baron EJ, Pfaller MA, Tenover FC. Yolken RH. Manual of Clinical Microbiology. 7a ed. Washington DC: American Society for Microbiology; 1999. pp 33 – 63. Instituto Nacional de Salud. Manual de procedimientos de laboratorio para el diagnóstico de infecciones respiratorias agudas. Curso Teórico Práctico. En: Diagnóstico de laboratorio de infecciones respiratorias agudas y enterovirus. Lima. 1999. Bone, R. C. Gram-negative sepsis: a dilemma of modem medicine. 1993. Clinical Microbiology Reviews, 6:57-68.

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“Hemocultivo ”

11.0 Formatos y anexos 11.1 Formatos Nombre del formato

11.2 Anexos Anexo

A B C D E F G

Código

Nombre Cuadro 1. Definiciones en la sepsis por Gram-negativos Cuadro 2. Factores de nesgo en sepsis Cuadro 3.Manejo clínico de la sepsis Cuadro 4. Agentes etiológicos de endocarditis infecciosa Cuadro5. Sistemas de hemocultivos automatizados y computarizados Cuadro 6. Signos visibles de crecimiento en hemocultivos Diagrama de flujo

ANEXO A Página 12 de 16

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“Hemocultivo ”

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ANEXO B Página 13 de 16

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“Hemocultivo ”

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ANEXO C

ANEXO D

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“Hemocultivo ”

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ANEXO E Página 15 de 16

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ANEXO F

ANEXO G Página 16 de 16

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Diagrama de flujo:

Muestra Obtenida

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