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BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO SEXTO SEMESTRE

GUIA 8: 1. Dibuje las diferentes células neoplásicas, señalando en cada una las características más relevantes que le permitan diferenciarla de las otras células Células nombre características Pronormoblasto TAMAÑO: 12-20 um NUCLEO: redondo a levemente ovalado Nucléolos: 1-2 Cromatina: fina CITOPLASMA: Azul oscuro; puede tener complejo de Golgi prominente Normoblasto basofilo TAMAÑO: 10-15 um NUCLEO: redondo a levemente ovalado Nucléolos: 0-1 Cromatina: ligeramente condensada CITOPLASMA: Azul oscuro Normoblasto TAMAÑO: 10-12 um policromático NUCLEO: redondo Nucléolos: ninguno Cromatina: bastante condensada CITOPLASMA: Azul grisáceo por hemoglobinización Normoblasto ortocromatico

TAMAÑO: 8-10 um NUCLEO: redondo Nucléolos: ninguno Cromatina: completamente condensada CITOPLASMA: mas rosado o salmón que azul Eritrocito policromático TAMAÑO: 8-8,5 um o reticulocito NUCLEO: ausente Nucléolos: no posee Cromatina: no posee CITOPLASMA: levemente mas azul/violeta que el eritrocito Eritrocito

TAMAÑO: 7-8 um NUCLEO: ausente Nucléolos: no posee Cromatina: no posee CITOPLASMA: Salmon con palidez central

BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO SEXTO SEMESTRE mieloblasto

TAMAÑO: 15-20 um NUCLEO: Redondo a ovalado Nucléolos: 2-5 Cromatina: fina CITOPLASMA: basofilia moderada Gránulos: ausentes o hasta 20

promielocito

TAMAÑO: 14-24 um NUCLEO: Redondo a ovalado Nucléolos: 1-3 o más Cromatina: fina, pero ligeramente mas gruesa que el mieloblasto CITOPLASMA: basofilo Gránulos Primarios: >20 a muchos, rojo-violeta TAMAÑO: 12-18 um NUCLEO: Redondo a ovalado; algo excéntrico Nucléolos: no se observan Cromatina: gruesa y mas condensada CITOPLASMA: ligeramente basófilo a crema Gránulos: Primarios: escasos a moderados Secundarios: numero variable TAMAÑO: 10-15 um NUCLEO: Indentado; con forma de riñón o frijol Nucléolos: no se observan Cromatina: moderadamente grumosa CITOPLASMA: rosa pálido a crema o incoloro Gránulos: Primarios: escasos Secundarios: abundantes TAMAÑO: 10-15 um NUCLEO: Forma de C o S Nucléolos: no se observan Cromatina: gruesa, en grumos CITOPLASMA: azul pálido a rosa Gránulos: Primarios: escasos Secundarios: abundantes

Mielocito neutrofilo

Metamielocito neutrofilo

Neutrófilo en banda

BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO SEXTO SEMESTRE neutrofilo

TAMAÑO: 10-15 um NUCLEO: 2- 5 lóbulos Nucléolos: no se observan Cromatina: gruesa, en grumos CITOPLASMA: rosa pálido, crema o incoloro Gránulos: Primarios: escasos Secundarios: abundantes

Mielocito eosinófilo

TAMAÑO: 12-18 um NUCLEO: Redondo a ovalado Nucléolos: no se observan Cromatina: gruesa y mas condensada CITOPLASMA: incoloro a rosa Gránulos: Primarios: escasos a moderados Secundarios: numero variable TAMAÑO: 10-15 um NUCLEO: Indentado; con forma de riñón o frijol Nucléolos: no se observan Cromatina: gruesa grumosa CITOPLASMA: incoloro Gránulos: Primarios: escasos Secundarios: abundantes, de color naranja: aspecto refringente TAMAÑO: 10-15 um NUCLEO: estrechado pero sin filamento delgado Nucléolos: no se observan Cromatina: gruesa, en grumos CITOPLASMA: incoloro o de color crema Gránulos: Primarios: escasos Secundarios: abundantes, de color TAMAÑO: 12-17 um NUCLEO: 2-3 lóbulos Nucléolos: no se observan Cromatina: gruesa, en grumos CITOPLASMA: crema, puede presentar bordes irregulares Gránulos: Primarios: raros Secundarios: abundantes, naranjas, redondos TAMAÑO: 10-14 um NUCLEO: 2 lóbulos Nucléolos: no se observan

Metamielocito eosinofilo

Eosinófilo en banda

Eosinófilo

Basófilo

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Monoblasto

Cromatina: gruesa, en grumos CITOPLASMA: Lavanda a incoloro Gránulos: Primarios: raros Secundarios: de numero variable con distribución poco uniforme; violeta intenso a negro MONOBLASTO TAMAÑO: 12-18 um NUCLEO: Redondo a ovalado; forma irregular Nucléolos: 1-2; pueden no ser visibles Cromatina: fina CITOPLASMA: celeste a gris Gránulos: ausentes

promonocito

TAMAÑO: 12-20 um NUCLEO: De forma irregular; plegado, circunvoluciones de cerebro Nucléolos: pueden ser visibles o no Cromatina: fina CITOPLASMA: celeste a gris Gránulos: finos azurofilos

monocito

TAMAÑO: 12-20 um NUCLEO: Variable; puede ser redondo, con forma de herradura o riñon. Nucléolos: no se observan Cromatina: reticular CITOPLASMA: azul grisáceo; puede presentar pseudopodos Gránulos: muchos gránulos finos con aspecto de vidrio esmerilado Vacuolas: ausentes a numerosas • TAMAÑO: 15-80 um • NUCLEO: excéntrico o con forma de huevo, alargado o indentado • Nucléolos: 1-2 • Cromatina: fina, dispera • CITOPLASMA: abundante con bordes irregulares • Gránulos: abundantes, gruesos y azurofilos • Vacuolas: pueden estar presentes

Macrófago

BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO SEXTO SEMESTRE Megacrioblasto

TAMAÑO: 10-24 um NUCLEO: redondo Nucléolos: 2-6 Cromatina: homogénea, organizada en forma laxa CITOPLASMA: basófilo

Promegacariocito

TAMAÑO: 15-40 um NUCLEO: indentado Nucléolos: variables Cromatina: condensada CITOPLASMA: basófilo Gránulos: presentes

megacariocito

TAMAÑO: 20-90 um NUCLEO: 2-32 lóbulos (8L) CITOPLASMA: azul a rosa; abundante Gránulos: azul rojizos; escasos-abundantes

Plaquetas

TAMAÑO: 2-4 um NUCLEO: No posee CITOPLASMA: celeste a incoloro Gránulos: rojo a violeta, abundantes

Linfoblasto

TAMAÑO: 10-20 um NUCLEO: Redondo a ovalado Nucléolos: 1 o más Cromatina: fina, teñida en forma uniforme CITOPLASMA: escaso; leve a moderadamente basófilo Gránulos: ausentes

BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO SEXTO SEMESTRE Prolinfocito

TAMAÑO: 9-18 um NUCLEO: Redondo o indentado Nucléolos: 0-1; en general único, grande y prominente Cromatina: algo grumosa CITOPLASMA: celeste Gránulos: ausentes

Linfocito

TAMAÑO: 7-18 um NUCLEO: Redondo a ovalado; puede ser lig. indentado Nucléolos: ocasionales Cromatina: condensada; con grumos CITOPLASMA: escaso a moderado; celeste, puede tener vacuolas Gránulos: ausentes en linfocito pequeño, escasos en linfocitos grandes

Plasmocito

TAMAÑO: 8-20 um NUCLEO: Redondo a ovalado; excéntrico Nucléolos: ninguno Cromatina: gruesa CITOPLASMA: intensamente basófilo, con frecuencia presenta zona clara perinuclear Gránulos: ausentes Vacuolas: ninguna a numerosas

2. Mencione las tinciones citoquímicas que se pueden emplear para diferenciar las leucemias agudas y las crónicas, indique su fundamento. RTA: Tinción de Mieloperoxidasa ; Tinción de Fosfatasa Alcalina Granulocitaria (FAL o FAG); Tinción de Fosfatasa Acida (FAC); Negro Sudán B (lípidos); Esterasas ; Tinción del ácido periódico de Schiff (PAS) (glucógeno) - PAS La reacción de PAS o del ácido peryódico de Schiff se basa en la rotura de los enlaces -C-Cpresentes en los carbohidratos por la acción del ácido peryódico, potente agente oxidante, liberándose grupos aldehído que al combinarse con el reactivo de Schiff dan un compuesto de color rojo púrpura intenso. Identifica al glucógeno en el citoplasma celular. Sigue teniendo interés en la diferenciación de diferentes tipos de leucemias linfoblásticas, en la eritroleucemia y en diversas mielodisplasias. - NEGRO B DE SUDÁN Es una coloración no enzimática útil en patología mieloide. Tiñe los fosfolípidos y otros lípidos, colorea los gránulos azurófilos y específicos de los granulocitos y tiene la ventaja de que con el tiempo no disminuye la actividad. Los neutrófilos segmentados y sus precursores muestran unos gránulos gruesos en el citoplasma de color gris muy oscuro. - PEROXIDASA La demostración citoquímica de esta enzima se basa en la acción oxidante de la peroxidasa sobre el substrato, bencidina, en presencia de peróxido de hidrógeno, apareciendo un precipitado amarillo ocre en el lugar del citoplasma en donde se ha producido la reacción. La

BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO SEXTO SEMESTRE mieloperoxidasa se sintetiza en el retículo endoplasmático rugoso, de donde pasa a las cisternas del aparato de Golgi quedando localizada fundamentalmente en la granulación 1ª o azurófila. Se localiza sobre todo, en los gránulos primarios de los neutrófilos y precursores, así como en los gránulos de los eosinófilos y monocitos. - FOSFATASA ALCALINA La fosfatasa alcalina es una hidrolasa perteneciente al grupo de las fosfomonoesterasas; hidroliza monoésteres del ácido fosfórico, actuando a un pH de 9,1 a 9,6; ligeros ¯ de pH determinan una rápida inactivación de la enzima. La demostración citoquímica se basa en la hidrólisis de ciertos substratos, de los cuales se liberan unos productos intermedios que combinados con una sal diazoica dan un precipitado coloreado. La actividad de la FA granulocítica se manifiesta en forma de un precipitado pardo negruzco localizado en el citoplasma. Se encuentra actividad FA en algunas células maduras y semimaduras de la granulopoyesis neutrófila (bandas y segmentados). grado 0: sin actividad enzimática. grado I: con cierta actividad enzimática en forma granular única o actividad débil difusa en una parte del citoplasma, especialmente en la zona perinuclear. grado II: intensa actividad granular o actividad difusa distribuida por todo el citoplasma granulocítico. - FOSFATASA ÁCIDA Es una enzima hidrolítica perteneciente al grupo de las fosfomonoesterasas, que actúa sobre los ésteres del ácido fosfórico; su pH óptimo de actuación oscila entre 4,7 y 5,5. Se trata de una enzima de ubicación lisosómica. La demostración citoquímica se basa en la hidrólisis del substrato naftol-AS-Bi-fosfato, liberándose unos productos intermedios que al combinarse con una sal diazoica dan un precipitado de color rojo anaranjado en el citoplasma.  La aplicación práctica del estudio de la FA se refiere sobre todo a los SLPC y LAL, dónde existe una buena correlación entre el tipo de positividad y el fenotipo de membrana. El 90% de las LAL de origen T dan una reacción + intensa de localización centrosómica; y las de tipo B o no-T-no-B suelen ser -. La LLC-T y otros SLPC T suelen cursar con valores elevados de FA que es tartrato sensible. La LLC-B presenta muy escasa actividad al igual que ocurre con otras proliferaciones de linfocitos B. - ESTERASAS Son un grupo de enzimas lisosomales presentes en cantidades variables en muchas células sanguíneas. Ellas hidrolizan ésteres orgánicos y liberan el alcohol (naftol), el cual de acopla a una sal diazoica para formar un azocolorante que se deposita sobre el sitio de actividad enzimática. Existen diferentes variedades según el substrato empleado. Se utilizan 4 substratos: naftol-AS-Ccloroacetato, naftol-AS-D-acetato, alfa-naftil-acetato, alfa- naftil-butirato, los cuales al ser hidrolizados en presencia de una sal diazoica dan un precipitado insoluble en el lugar de la reacción.  Las esterasas específicas (cloroacetatoesterasa o CAE) usan el sustrato naftol-AS-D cloroacetato y su actividad se atribuye a las isoenzimas 1,2,7 y 8. Las esterasas inespecíficas representan las isoenzimas 3,4,5 y 6 y pueden usar varios sustratos: naftol AS-D acetato, alfa naftil acetato y alfa naftil butirato. El fluoruro de sodio es un potente inhibidor de las esterasas monocíticas.  Utilizando como substrato el naftol-AS-C-cloroacetato (CAE) se detecta una esterasa que es específica de la granulopoyesis neutrófila en la que es + a partir del mieloblasto y se expresa en forma de un precipitado rojo anaranjado muy brillante. Su utilidad diagnóstica se centra básicamente en el reconocimiento de células blásticas mieloides, si bien su aparición es más tardía que la de la mieloperoxidasa aunque iguala a ésta en especificidad. 3. Mencione los marcadores genéticos característicos de cada uno de los linajes celulares • RTA: LINAJE b: CD19, CyCD79a, CyCD22, SmCD22, CD20, CD21,CD24, SIgM, CyIgM, CD81, CD9, CD38 v, CD58 v, CD45 •

CELULA B INMADURA CD34, CD10, nuTdT, CD9 inespecífico

• •

MARCADORES ABERRANTES CD33, CD13, CD66c, CD15, CD65, CD123, CD117 LINAJE T: CD2,CD3, CyCD3, SmCD3+/-, CD4,CD5,CD7, CD8, CD45, CD34+/-

BACTERIOLOGIA Y LABORATORIO CLINICO SEXTO SEMESTRE 4. Investigue sobre el fundamento de la Citometría de flujo La citometría de flujo es una técnica que permite un análisis celular multiparamétrico de forma rápida, sensible y específica. La disponibilidad de amplios paneles de reactivos de gran calidad facilita la aplicación de este método analítico en el diagnóstico, clasificación, evaluación pronóstica y valoración de enfermedad mínima residual. La citometría de flujo permite el análisis de un gran número de células (habitualmente entre 10,000 células por muestra y, más de un millón en los estudios de enfermedad mínima residual). La aplicación de la citometría de flujo al análisis celular permite conocer aspectos físicos de la célula (tamaño y complejidad) y determinar la presencia o ausencia de determinados antígenos (habitualmente entre 3 y 4) en los diferentes compartimentos celulares (superficie celular, citoplasma, mitocondria y núcleo) lo que contribuye a aumentar, tanto la especificidad como la sensibilidad de la prueba. En otras áreas como en el diagnóstico y clasificación de las inmunodeficiencias primarias, en el monitoreo de enfermedades autoinmunes como la esclerosis múltiple, el lupus eritematoso sistémico y la artritis reumatoide, la citometría de flujo ha demostrado su utilidad. También se ha demostrado útil en el seguimiento de la recuperación inmune tras el trasplante de médula ósea , en la identificación precoz del rechazo en pacientes que han recibido un trasplante alogénico, o en el monitoreo terapéutico de los enfermos con anemia aplásica 5. Realice ejemplos de citogramas que se utilizan en Citometría de flujo RTA: en la siguiente imagen muestra un diagrama de puntos (dot plot) donde se ubican los linfocitos, monocitos y granulocitos, según su tamaño y granularidad.

6. Cuales marcadores son aberrantes o se presentan en un LMC, SMD, LMA, LLA LMC: translocación 9;22 gen BCR/ABL SMD: del (5q) (7q), (20q). LMA: T(15;17); T(8;21); Inv(16); citogenica normal 5q- 7q- 11q23 LLA: t(9;22); t(4;11); t(8;14); t(1;19), t(11;19); t(17;19) GUIA 9

1. Identifique otros métodos indirectos para el recuento de plaquetas. Explique su respuesta. 2. ¿Cuando observo agregados plaquetarios que medidas debo tomar para realizar el recuento plaquetario?

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3. ¿Que es Pseudotrombocitopenia y a que patologías se asocia? 4. Por el método automatizado que errores se pueden tener en el recuento de plaquetas? 5. Qué es el dimorfismo plaquetario En qué circunstancias fisiológicas y patológicas podemos encontrar trombocitosis y trombocitopenia? GUIA 10 1. Mencione y explique en qué consisten los diferentes métodos que existen del tiempo de sangría 2. Indique en que patologías se aumenta el tiempo de sangría 3. Mencione los medicamentos que alteran el tiempo de sangría GUIA 11 1. 2. 3. 4. 5.

En que casos se puede alterar el PT En que casos se puede alterar el PTT En que casos se puede alterar el PT y el PTT Describa de que se trata prueba de corrección de plasmas? Cuáles son los factores vitamino k dependientes?