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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA FACULTAD DE ZOOTECNIA Escuela profesional de zootecnia DEPARTAMENTO ACADÉMICO DE CIENCIAS PECUARIAS

COLORACIÓN GRAM

CURSO:

Microbiologia Animal

DOCENTE:

TAFUR ZEVALLOS, Lisandro

ALUMNO:

FLORES VILCA, Flavio

TINGO MARIA PERÚ

I.

INTRODUCCIÓN

Los microorganismos, concretamente las bacterias, pueden observarse directamente al microscopio de campo claro. Sin embargo, debido al bajo contraste entre las células y su entorno, estos procedimientos se utilizan en ocasiones muy limitadas, como por ejemplo para la observación de la movilidad bacteriana. Los microscopios de contraste de fases, interferencia diferencial (DIC o la microscopía de Nomarski) y campo oscuro permiten aumentar el contraste, empleándose para la observación de vainas, filamentos u otras estructuras bacterianas. La tinción es un método sencillo para incrementar el contraste entre la célula y su entorno y por lo tanto contribuye a mejorar la imagen observada. Las técnicas de tinción con diversos colorantes facilitan la observación al aumentar notablemente el contraste.

Objetivo: -

Observar bacteria que se encuentran en el esputo.

II.

REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA

Este método de baciloscopia de tipo cuantitativo se usa, para determinar el grado de infección de una tuberculosis, las bacterias de bacilos se tiñen de rojo ya que las fucsias tienden a adherirse a la pared bacteriana y la separa de las gran positivas tiñéndolas de azul a morado, el número de bacterias por muestra son 10, indicando en grado de infección.

2.1.

Tinciones

Frontis sanguíneo

2.2.

Crytococcus neoformans

Características de la muestra

La muestra más adecuada para el diagnóstico de la tuberculosis pulmonar es el esputo obtenido por expectoración espontánea, tras un golpe de tos profunda. Estas muestras son generalmente de consistencia espesa y mucoide, de color variable (desde blanquecinas hasta verdosas) e incluso sanguinolentas.

Las muestras de saliva, secreciones nasales o faríngeas NO son muestras adecuadas para el diagnóstico de tuberculosis, aunque pueden examinarse por la posibilidad de que hayan quedado bacterias retenidas en esas zonas (boca, faringe) tras la tos. Si el paciente no lograra expectorar, se puede recurrir a la expectoración inducida que debe ser siempre supervisada por personal médico.

-

Aseguramiento o garantía de la calidad (AC): sistema concebido para mejorar la confiabilidad y la eficacia de los servicios de laboratorio de manera continua. Comprende el control interno de la calidad (CI) y la evaluación externa de la calidad (EEC).

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BAAR: bacilos ácido alcohol resistentes.

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Control de calidad (CC): también llamado control interno de la calidad. Comprende el control de todos los procesos a través de los cuales el laboratorio realiza la microscopia, esto incluye la verificación de los instrumentos y de los nuevos lotes de colorantes.

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Coloración de Ziehl Neelsen (ZN): método de coloración con fucsina de Ziehl calentada hasta la eliminación de vapores, decoloración con alcohol acido y luego contraste con azul de metileno. Los BAAR aparecen rojos en un fondo azul.

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Error de cuantificación (EC): consiste en una diferencia entre el supervisado y el supervisor de más de un grado en la lectura de un frotis positivo. Este es un error menor que, generalmente, no tiene ningún impacto en la toma de decisiones sobre el paciente.

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Error mayor: este tipo de error es considerado el más critico por el alto impacto que tiene sobre la toma de decisiones en el paciente, puede dar lugar a un diagnóstico erróneo y a un tratamiento incorrecto. Estos errores pueden indicar graves deficiencias técnicas e incluyen los elevados falsos positivos (EFP) y los elevados falsos negativos (EFN).

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Error menor: en la práctica clínica, estos errores pueden tener un impacto menor sobre la decisión a tomar respecto al paciente. Sin embargo, para el propósito de evaluar la calidad de los resultados del laboratorio, este tipo de error es considerado menos grave debido a las limitaciones inherentes a la detección sistemática de unos pocos BAAR que pueden estar distribuidos desigualmente a lo largo del frotis. La frecuencia de errores menores puede indicar eventuales deficiencias técnicas.

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Estrategia Sanitaria Nacional de Prevención y Control de Tuberculosis (ESN-PCT): es el responsable del control de la tuberculosis (prevención, diagnóstico y tratamiento).

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Evaluación externa de la calidad (EEC): consiste en la evaluación de la preparación de los extendidos, la coloración, el examen microscópico, registro e informe de los resultados. Para dar a conocer el desempeño del laboratorio supervisado.

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Falso positivo elevado (FPE): un frotis negativo mal interpretado como positivo 1+ a 3+. Se trata de un error mayor.

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Falso negativo elevado (FNE): un frotis positivo 1+ a 3+ que es malinterpretado como negativo. Se trata de un error mayor.

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Falso positivo bajo (FPB): se trata de un frotis negativo malinterpretado como un débil positivo (1 - 9 BAAR/100 campos). Este tipo de error menor ocurre ocasionalmente aun en laboratorios de alta calidad y con tasa de errores.

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Falso negativo bajo (FNB): se trata de un frotis positivo bajo (1 - 9 BAAR/100 campos) mal interpretado como negativo. Este tipo de error menor ocurre ocasionalmente aun en laboratorios de alta calidad y con tasa de errores.

III.

3.1.

MATERIALES Y MÉTODOS

lugar y fecha

La práctica se llevó a cabo en el laboratorio de microbiología animal de la Facultad de Zootecnia de la Universidad Nacional Agraria de la Selva el día 27 de agosto. 3.2.

.materiales

-

Envase esterilizado

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Porta objeto

-

Papel toalla

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Mechero de bunsen

3.2.1. Reactivo -

Ron de quemar

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Cristal violeta

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Lugol

-

Alcohol acetona

-

Safranina

3.2.2. Equipo -

Microscopio electrónico

3.2.3. Muestra

-

Esputo

3.3. -

Procedimiento Desinfectarle lugar donde se va a trabajar los vidrios o bandejas para

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Tomar una muestra del esputo, fijarlo al mechero.

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Colorear con cristal violeta por dos minutos.

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Lavar y echar lugol por dos minutos.

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Lavar y decolo real con alcohol acetona por un minuto.

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Lavar y contra teñir con safranina por dos minuto.

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Lavar y dejarlo secar.

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Observar al microscopio.

IV.

RESULTADOS

Se observa bacilos cortos los de color violeta son bacilos.

V.

CONCLUSIÓN

Se concluye, que si se pudo observar a las bacterias del esputo.

VI.

-

BIBLIOGRAFÍA

MILAGROS DE VISCARRONDO, SOFIA GUTIERRES DE GAMBOA, 2001.Morfología y tinción de microorganismos.

-

ISABEL DE SILONIZ, SUSANA SERRADO, ANA MARTIN, COVADONGA

VAZQUEZ.

2010.

Técnicas

básicas

de

microbiología observación de bacterias. -

GUSTAVO A. DIAZ MARTIN. 2009. Fundamentos y técnicas de análisis microbiológico

-

Ministerio de salud. 2012Procedimientos para el control de calidad externo de baciloscopia para el diagnóstico bacteriólogo de la tuberculosis. [en línea] www.telemicroscopia.ehas.org>assets

-

EHAS. 2012. Procesamiento de muestras respiratorias para diagnóstico

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