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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA

SEMESTRE 2016- I I – CICLO

GUÍA DE PRÁCTICA DE BIOLOGÍA MOLECULAR

PROFESOR COORDINADOR: Mg. EDITH RODRIGUEZ QUISPE

1

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA CURSO DE BIOLOGÍA MOLECULAR

PRÁCTICA N° 1

APLICACIÓN DEL MÉTODO CIENTÍFICO

I.

OBJETIVOS  

II.

MATERIALES 

III.

Dar a conocer los lineamientos básicos del método científico y su aplicación Adiestrar al estudiante en el uso del método científico en el campo de la medicina

Lectura seleccionada a partir de una revista científica especializada

PROCEDIMIENTO   

Hacer una descripción de las diferentes etapas que comprende el método científico. Leer el artículo seleccionado rápidamente para tener una idea general del mismo. Proceder a leer el artículo cuidadosamente y analizarlo con el propósito de establecer lo siguiente: 1. 2. 3. 4. 5.

IV.

Reconocimiento del problema planteado Formulación de la hipótesis Formulación de objetivos y métodos Prueba de hipótesis mediante la experimentación Análisis de resultados y conclusiones

RESULTADOS Entregar el reporte del artículo evaluado considerando todos los pasos del método científico.

 

2

Rev Med Hered. 2015; 26:230-237.Frecuencia anticuerpos anti Toxoplasma gondii en gestantes de Cucuta. Colombia. Rev Med Hered. 2014; 25:208-214: .Eficacia del proceso de limpieza y desinfección de los endoscopios de un hospital de nivel III

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA CURSO DE BIOLOGÍA MOLECULAR PRÁCTICA N° 2

RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLÓGICO DE LOS CARBOHIDRATOS

I.

OBJETIVO  Reconocer las unidades monoméricas y macromoleculares en los carbohidratos como componentes fundamentales de todos los seres vivos

II.

MATERIALES                   

III.

Solución de Glucosa 1% (monosacárido) Solución de Fructosa 1% (monosacárido) Solución de Sacarosa 1% (disacárido, azúcar común) Solución de Maltosa 1% (disacárido) Solución de Almidón 1% (polisacárido) Reactivo de Molisch Ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado Reactivo de Benedict Solución de Lugol Tubos de 13x100 mm Tubos de 16x150 mm Gradillas Pipeta de vidrio graduada de 5 mL Pipetas Pasteur Propipeta Pinzas de madera Mecheros, trípode, rejilla de asbesto Guantes Plumón marcador

PROCEDIMIENTO

3.1. Determinación General de Glúcidos (reacción de Molisch) Los Glúcidos o Hidratos de carbono por acción deshidratante del ácido sulfúrico originan compuestos derivados del furfural, los que en presencia del alfa-naftol presente en el reactivo de Molisch, formarán un anillo de color púrpura.

3

Preparación: 1. En tubos rotulados de 13x100 mm colocar 1 mL de cada solución del glúcido 1%: Glucosa, Fructosa, Sacarosa, Maltosa y Almidón. 2. Añadir a cada tubo 2 gotas del Reactivo de Molisch y agitar suavemente. 3. Agregar lentamente por la pared del tubo, sin agitar, 1 mL de ácido sulfúrico (H2SO4) concentrado. 4. Observar la formación de un anillo color púrpura en la zona de interfase si la reacción es positiva. 5. Determinar si la reacción de Molisch es positiva o negativa para cada uno de los glúcidos.

3.2. Determinación de Azúcares Reductores (reacción de Benedict) Un azúcar reductor es aquel que en su forma cíclica tiene el grupo OH del carbono anomérico libre y por tanto puede convertirse en su forma lineal abierta que contiene (potencialmente) el grupo aldehído con capacidad reductora. El azúcar reductor al ser sometido a la acción del calor en el medio alcalino del reactivo de Benedict, se isomeriza formando cuerpos fuertemente reductores para el ion cúprico (Cu+2) del reactivo que es reducido a ion cuproso (Cu+1) el que reaccionará con los iones OH - del medio precipitando como óxido cuproso (Cu2O) que es de color rojo ladrillo. Preparación 1. En tubos rotulados de 16x150 mm colocar 2 mL de cada solución de glúcido 1%: Glucosa, Fructosa, Sacarosa, Maltosa y Almidón. 2. Añadir a cada tubo 1 mL de Reactivo de Benedict. 3. Someter los tubos a ebullición en agua hirviendo en un beaker por 5 min. Retirarlos con ayuda de una pinza. 4. Observar la formación del óxido cuproso que es color anaranjado hasta rojo ladrillo si la reacción es positiva. 5. Determinar si la reacción de Benedict es positiva o negativa para cada uno de los glúcidos.

3.3. Determinación de Almidón (reacción de Lugol) El ion triyoduro (I3--) del Lugol es adsorbido por el almidón a nivel de las hélices de la amilosa formando compuestos complejos de color azul negruzco (yoduro de almidón).

Preparación 1. 2. 3. 4. 5.

4

En un tubo de 16x150 mm colocar 2 mL de solución de Almidón al 1%. Agregar 3 gotas de Lugol y agitar. Observar la formación de color azul negruzco si la reacción es positiva. Calentar el tubo hasta observar algún cambio de color y luego dejar enfriar el tubo. Observar los cambios de color e interprete el efecto del calor y enfriamiento en el proceso.

IV.

CUESTIONARIO P#2 1. Diga cuáles son las principales fuentes de carbohidratos en nuestra dieta y cuál es el requerimiento diario.

2. Explique por qué la lactosa es un azúcar reductor. Esquematice la molécula de lactosa señalando el carbono anomérico libre que reduce al cobre en la reacción de Benedict. 3. Explique brevemente por qué se produce la intolerancia la lactosa. 4. Establezca las semejanzas y diferencias (estructurales y funcionales) entre el almidón y el glucógeno.

V.

INFORME Carátula Introducción Marco teórico: 2pp: Carbohidratos y fundamentos de las 3 reacciones Resultados: Esquemas y tablas simples de la reacción (+) o (-) para cada glúcido evaluado en cada una de las 3 pruebas. Conclusiones: Interpretación de los resultados explicando por qué el glúcido da una reacción (+) o (-) Cuestionario Referencias bibliográficas (estilo Vancouver)

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PRÁCTICA N° 3

RECONOCIMIENTO EN MATERIAL BIOLÓGICO DE LÍPIDOS Y PROTEÍNAS

I.

OBJETIVO 

II.

Reconocer compuestos orgánicos como los lípidos y las proteínas que son constituyentes importantes en todos los seres vivos

MATERIALES                    

Aceite comestible ← Albúmina al 2% Leche ← Alcohol Cloroformo Éter etílico Solución alcohólica de Sudán III Tinta roja Hidróxido de sodio NaOH 20% Hidróxido de sodio NaOH 40% Sulfato de cobre CuSO4 1% Ácido nítrico HNO3 concentrado Tubos de 16x150 mm Tubos de 13x100 mm Beakers de 50 mL Mechero Pipetas Pasteur de plástico de 2,5 mL Guantes Pinza de madera Gradilla para tubos

III.

PROCEDIMIENTO

3.1

DETERMINACIÓN DE LÍPIDOS

3.1.1 Solubilidad de los Lípidos Los lípidos son insolubles en agua y solubles en solventes orgánicos como el éter y cloroformo.

6

Preparación: 1. En cuatro tubos rotulados de 13x100 mm colocar 1 mL de aceite. 2. Agregar los solventes en el siguiente orden: tubo N° 1: agua destilada tubo N° 2: alcohol tubo N° 3: cloroformo tubo N° 4: éter etílico 1. 2. 3.

1 mL 1 mL 1 mL 1 mL

Agitar cada uno de los tubos con la misma intensidad. Observar cada tubo y determinar el grado de solubilidad de mayor a menor. Interpretar la diferencia de solubilidad del lípido en los diferentes solventes.

3.1.2 Solubilidad y Tinción en Sudán III El Sudán III es un tinte diazo altamente soluble en lípidos tiñéndolos en la gama del rojo cereza al anaranjado.

Preparación: 1. En dos tubos de 13x100 mm colocar 1 mL de aceite. 2. Agregar a un tubo 1 mL de Sudán III y al otro tubo agregar 1 mL de tinta roja, agitar y dejar reposar. 3. Observar la coloración producida en la zona del aceite en uno de los tubos e interpretar los resultados. 3.1.3 Saponificación Las grasas (acilglicéridos) reaccionan en caliente con hidróxido sódico descomponiéndose en ácidos grasos y glicerina. La saponificación se produce cuando los ácidos grasos se combinan con los iones sodio del hidróxido para dar jabones, que son por ende las sales sódicas de los ácidos grasos. Preparación 1. En un tubo 16x150 mm colocar 2 mL de aceite y 2 mL de hidróxido de sodio NaOH 20%. 2. Agitar enérgicamente y colocar el tubo en baño maría en ebullición por 20 a 25 min. 3. Observar la formación de 3 fases en el tubo: una inferior, que contiene la solución de soda sobrante junto con la glicerina formada; otra intermedia, semisólida, que es el jabón formado; y la superior, que contiene el aceite inalterado.

3.2

DETERMINACIÓN DE PROTEÍNAS 3.2.1 Reacción de Biuret Los compuestos que contienen dos o más enlaces peptídicos forman un complejo con las sales de cobre en un medio fuertemente alcalino, dando un color púrpura o violeta, debido a la formación de un complejo de coordinación entre los iones del Cu+2 y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos.

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Preparación 1. En dos tubos 16x150 mm colocar por separado 2 mL de la solución de albúmina 2% (o solución de clara de huevo al 10%) y 2 mL de leche. 2. Agregar a cada tubo 2mL de hidróxido de sodio NaOH 40% y mezclar. 3. Añadir a cada tubo 6 gotas de sulfato de cobre CuSO4 1%. 4. Incubar los tubos a 37º C por 10 min. 5. Observar la coloración producida y determinar si la reacción es positiva o negativa. 6. Interpretar los resultados.

3.2.2 Reacción Xantoproteica Se emplea para determinar la presencia de proteínas solubles en una solución, empleando ácido nítrico (HNO3) concentrado. Las proteínas solubles que presentan aminoácidos aromáticos (fenilalanina, tirosina y triptófano), dan derivados nitrogenados que se colorean de amarillo. Preparación 1. En un tubo de 16x150 mm colocar 2 mL de la solución de albúmina al 2% o clara de huevo al 10%. 2. Agregar 2 mL de ácido nítrico (HNO3) concentrado. 3. Observar la formación de un precipitado blanco y hervir por 3 min. 4. Observar la coloración producida y determinar si la reacción es positiva o negativa.

IV.

CUESTIONARIO P#3 1. 2. 3. 4. 5. 6.

V.

Defina emulsión y micela. ¿Cuál es la semejanza y diferencia química entre el ácido araquídico y el ácido araquidónico? Desarrolle la reacción de saponificación entre el ácido oleico y el hidróxido de sodio. ¿Qué aminoácidos presentan anillos bencénicos? Esquematice cada uno de ellos. ¿Qué supone la desnaturalización de una proteína? ¿Qué es la proteinuria?

INFORME

Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados y Fundamentos- Conclusiones- CuestionarioReferencias bibliográficas (estilo Vancouver).

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PRÁCTICA N° 4

EXTRACCIÓN DE ÁCIDO DESOXIRRIBONUCLEICO (ADN)

I. OBJETIVOS  Utilizar un método sencillo de extracción de ADN a partir de células eucariotas poniendo de manifiesto la estructura fibrilar del ácido nucleico  Reconocer algunos componentes estructurales del ADN

II. MATERIALES                      

Muestras de origen vegetal y animal Solución salina de NaCl 0,9% --- mantener a 4°C Solución de lisis (EDTA, SDS, NaCl) --- mantener en frío Acetato de sodio 3M Etanol 96° --- mantener en frío Solución salina citratada Azul de metileno ADN extraído en la práctica Reactivo de Bial Tubos de ensayo 16x150 mm Beakers de 20 mL Beaker de 500 mL Baguetas Mortero y pilón Embudos Mechero Pinzas de madera Pipetas de 5mL Propipetas Gasa de 10x15cm (3) Gradilla para tubos Tijeras

III. PROCEDIMIENTO 3.1 Extracción de ADN Las moléculas de ADN en una célula eucariota se encuentran dispersas en el núcleo y enrolladas alrededor de moléculas de proteínas para formar la cromatina. Para la extracción del ADN de una célula se requiere homogenizar la muestra del tejido para proceder al lisado de membrana, la liberación del ADN, la separación de proteínas asociadas a dicha macromolécula y su posterior obtención bajo la forma de fibras.

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Preparación 1. En un mortero colocar la muestra (3 fresas sin hojas y/o un trozo de plátano de 3 cm) e incorporar 2 mL de NaCl 0,9% triturando por 1 min. 2. Añadir 10 mL de la solución de lisis y seguir triturando (~5 min) hasta obtener una masa homogénea y semilíquida. 3. Agregar 2 mL de acetato de sodio a la preparación, mezclar, para luego dejar reposar por 5 min. 4. Filtrar la preparación en un tubo de 16x150mm con la ayuda de un embudo cubierto con gasa. 5. Trasvasar 5-8 mL del filtrado a un beaker pequeño e incorporar por las paredes 2 volúmenes de etanol frio e introducir rápidamente una bagueta delgada y girar sobre su mismo eje a fin de recuperar el ADN bajo la forma de fibras. 6. Colocar la bagueta con el ADN extraído en un tubo 16x150 mm conteniendo 1 mL de solución salina citratada para resuspenderlo y reservarlo para su uso en el siguiente experimento. 7. Obtener más fibra de ADN para reconocer su carácter ácido. Para ello dejar caer en las hebras un colorante básico como el azul de metileno. 3.2 Identificación de Pentosas (reacción de Bial) Las pentosas se deshidratan en una solución ácida dando furfural que al reaccionar con el orcinol del reactivo de Bial y en presencia de FeCl3, dan un producto de condensación de color verdeazulado. Preparación 1. En un tubo 16x150 mm colocar 1 mL de ADN extraído en el experimento anterior y en otro tubo colocar 1 mL agua destilada. 2. Agregar a cada tubo 3 mL de Reactivo de Bial. 3. Calentar cuidadosamente cada tubo en la llama de un mechero hasta que la solución comience a hervir. 4. Observar y anotar el color que aparece en cada tubo de ensayo determinando si la reacción es positiva o negativa. 5. Interpretar el resultado señalando el nombre de la pentosa presente en el ADN.

IV. CUESTIONARIO P#4 1. ¿Cuál es la composición básica del ADN? 2. ¿Qué proteína está asociada al ADN, cuáles son sus características? 3. ¿Por qué el ADN absorbe luz UV a 260 nm de longitud de onda?

V. INFORME: Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados y Fundamentos- Conclusiones- CuestionarioReferencias bibliográficas (estilo Vancouver).

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MICROSCOPÍA: ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCOPIO

I.

OBJETIVOS  Conocer e identificar correctamente las partes ópticas y mecánicas del microscopio óptico compuesto  Familiarizar al alumno con el uso correcto, cuidado y conservación del microscopio  Calcular la magnificación (aumento) total de la imagen del objeto observado

II.

MATERIALES          

Microscopios Láminas portaobjetos Láminas cubreobjetos Láminas preparadas de artrópodo (Pulex irritans “pulga” o Pediculus humanus “ piojo”) Suero fisiológico Pipeta Pasteur Plumón indeleble Papel lente Hebra de algodón Letra “e” en papel

. III. PARTES DEL MICROSCOPIO Reconocer cada una de las siguientes partes del microscopio:

PARTE MECÁNICA     

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Brazo y Pie Tubo portalentes y cremallera Tornillos macrométrico y micrométrico Revólver Platina

PARTE ÓPTICA     

Ocular Objetivos Diafragma Condensador Foco

IV. SISTEMAS QUE COMPRENDE EL MICROSCOPIO 1. 2. 3. 4.

Sistema de Soporte: comprende el brazo, el pie, el tubo ocular, el revólver y la platina. Sistema de Iluminación: comprende el foco, el condensador y el diafragma. Sistema de Ajuste: comprende el tornillo macrométrico, el tornillo micrométrico y la cremallera. Sistema de Aumento: comprende el ocular generalmente de 10x ó 15x y los objetivos de 4x, 10x, 40x, y 100x (objetivo de inmersión).

VI. PROCEDIMIENTO. 1. Preparar láminas húmedas (una gota de suero fisiológico más la muestra) con una hebra de algodón y una letra “e” en posición de lectura. 2. Observar dichas muestras con los objetivos 4x, 10x y 40x. 3. Verificar con la lámina de la letra “e”, que los movimientos en estos sistemas son invertidos. 4. Observar la lámina preparada de artrópodo con los objetivos de 4x y 10x. 5. Calcular el aumento total de acuerdo al objetivo utilizado multiplicando el aumento del ocular por el aumento del objetivo: Ejm: para un ocular de 10x y un objetivo de 40x el aumento total es de 400x (es decir, 400 veces). VII. CUESTIONARIO P#5 1. 2. 3. 4. VIII.

Defina qué es una imagen real y qué es una imagen virtual. ¿Cuáles son las unidades de medida de longitud empleadas en microscopía? Defina aumento y resolución del microscopio. ¿Cómo se define un microscopio electrónico y cuáles son sus aplicaciones médicas? INFORME

Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripciónConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliográficas (estilo Vancouver).

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OBSERVACIONES CELULARES: PROCARIOTAS (BACTERIAS)

Existen dos tipos de células, las procariotas y las eucariotas, que difieren principalmente en la organización de su material genético. Las procariotas no poseen envoltura nuclear, su ADN circular ocupa dentro de la célula un lugar llamado nucleoide y se halla en contacto directo con el protoplasma. I.

OBJETIVOS  

II.

MATERIALES                 

III.

Identificar distintos tipos de bacterias de acuerdo a su forma y tinción Comprender el principio de la Coloración de Gram

Palitos mondadientes Solución salina fisiológica (NaCl 0,9%) Solución de Mercurio cromo Solución de Violeta de genciana Colorante Azul de metileno Yogurt natural ← Láminas portaobjetos Lamillas cubreobjetos Varilla de coloración Láminas con tinción de Gram de Escherichia coli (bacilos) y Streptococcus (cocos) Láminas con tinción de Ziehl-Neelsen de Mycobacterium tuberculosis Aceite de inmersión Alcohol isopropílico Papel lente Microscopios Guantes Recipiente para descarte

PROCEDIMIENTO

3.1 Observación de Microflora bacteriana en cavidad bucal (Tinción de Vagó) 1. Colocar una gota de solución fisiológica sobre una lámina. 2. Con el mondadientes obtener una muestra de sarro dental, colocarla sobre la gota de solución fisiológica y esparcir con movimientos circulares. 3. Dejar secar a temperatura ambiente y luego cubrir con colorante mercurio de cromo, dejar reposar por 5 min. 4. Enjuagar y aplicar inmediatamente el colorante violeta de genciana, dejar reposar por 3 min para luego lavar con agua de caño. 5. Dejar secar la muestra preparada por acción del calor o al medio ambiente. 6. Observar la preparación con el objetivo de 100x y una gota de aceite de inmersión. 7. Identificar las diferentes formas bacterianas (véase la figura).

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3.2 Observación de Lactobacillus en una muestra de yogurt 1. Colocar una gota de yogurt en el extremo de una lámina portaobjetos y con ayuda de otra lámina extender el material. 2. Dejar secar la lámina, colocar una gota de azul de metileno y cubrir con una laminilla. 3. Observar la preparación con los objetivos de 40x y 100x. Formas Bacterianas: coco, bacilo, vibrión y espirilo

3.3 Observación de Bacterias con Coloraciones diferenciales como Gram y ZiehlNeelsen Para observar cada lámina preparada con la tinción Gram o la tinción Ziehl-Neelsen agregar una gota de aceite de inmersión y usar el objetivo de 100x.

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1.

Lámina de la bacteria Escherichia coli, procesada con la tinción Gram. Reconocer la forma de bacilo y la coloración roja de esta bacteria Gram negativa.

2.

Lámina de la bacteria Streptococcus sp. procesada con tinción Gram. Reconocer la forma de coco, la agrupación en cadenas y la coloración violeta de esta bacteria Gram positiva.

3.

Lámina de la bacteria Mycobacterium turbeculosis, procesada con la tinción ZiehlNeelsen. Reconocer la forma de bacilo y la coloración fucsia de esta bacteria ácido resistente.

III. CUESTIONARIO P#6 1. 2. 3. 4. IV.

¿Cómo es la estructura de una célula bacteriana? ¿Qué es la tinción o coloración de Gram y cómo se realiza? Defina microflora bacteriana. Cite 1 ejemplo. Describa a la bacteria que infecta el epitelio gástrico Helicobacter pylori.

INFORME

Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripciónConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliográficas (estilo Vancouver).

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OBSERVACIONES CELULARES: EUCARIOTAS: animal, vegetal y fungi

Existen dos tipos de células, las procariotas y las eucariotas, que difieren principalmente en la organización de su material genético. En las células eucariotas el ADN se asocia a proteínas formando unas estructuras complejas denominadas cromosomas, los cuales se encuentran dentro de un núcleo verdadero rodeado por una complicada envoltura nuclear, a través de la cual tienen lugar los procesos de intercambio núcleo-citoplasmáticos. I.

OBJETIVOS  Observar células eucariotas unicelulares y pluricelulares.  Diferenciar al microscopio las características que presentan la membrana celular de la célula animal y la pared celular de la célula vegetal.

II.

MATERIALES               

III.

Muestra de célula epitelial de la mucosa bucal Muestra de catáfila de cebolla Allium cepa Muestra de cultivo de levadura Saccharomyces ← Láminas preparadas de hongos Penicillium y Aspergillus teñidos con Azul de lactofenol Microscopios Láminas portaobjetos Láminas cubreobjetos o laminillas Bisturí Pinza de punta recta Mechero de alcohol Colorante Azul de metileno Colorante Lugol Alcohol yodado Solución fisiológica (NaCl 0,9%) Papel lente

PROCEDIMIENTO 3.1 Observación de célula animal (raspado de mucosa bucal) 1.

Con la ayuda de un hisopo hacer un raspado de la mucosa bucal y colocar la muestra obtenida sobre dos láminas. 2. A una lámina agregar una gota de suero fisiológico y a la otra aplicar una gota del colorante azul de metileno 3. Cubrir las preparaciones con una laminilla. 4. Observar las preparaciones con objetivos de 10x y 40x.

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CÉLULA ANIMAL

1- Membrana plasmática 3- Retículo endoplásmico rugoso 5- Nucléolo 7- Citosol (=hialoplasma) 9- Retículo endoplásmico liso

2- Mitocondria 4- Ribosomas 6- Cromatina 8- Diplosoma (= centriolos) 10- Aparato de Golgi

3.2 Observación de célula vegetal (catáfila de cebolla) 1. Separar una de las catáfilas de la cebolla con una pinza y extenderla sobre una lámina portaobjetos. 2. Con el bisturí cortar cuadritos de 0,5 cm de catáfila. 3. Disponer de 2 láminas y colocar en cada lámina un cuadradito de catáfila. 4. Agregar a una de las lámina 1 gota de suero fisiológico y a la otra agregar 1 gota del colorante Lugol. 5. Cubrir las preparaciones con láminas cubreobjetos. 6. Observar las preparaciones con objetivos de 10x y 40x. 7. Reconocer la membrana celular, pared celular y el núcleo de esta célula vegetal.

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CÉLULA VEGETAL

3.3 Observación de célula fúngica unicelular y pluricelular 1. En una lámina colocar 2 gotas de cultivo de levadura Saccharomyces (hongo unicelular), cubrir con una laminilla y observar con el objetivo de 40x. 2. Observar láminas procesadas de Penicillium y Aspergillus (hongos pluricelulares) teñidas con Azul de Lactofenol usando los objetivos de 40x y 100x. 3. Reconocer la pared celular y morfológicamente las partes (conidios o esporas, fiálides y conidióforo) de los hongos filamentosos.

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Saccharomyces

Aspergillus

Penicillium

IV. CUESTIONARIO P#7 1. ¿Cuáles son las diferencias entre una célula animal y una célula vegetal? 2. ¿Cuáles son los componentes y cómo están estructuradas las paredes celulares de las bacterias, hongos y vegetales? 3. ¿Qué es el Lugol, cuál es su fórmula y cuáles son sus aplicaciones?

V.

INFORME

Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripciónConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliográficas (estilo Vancouver).

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FENÓMENOS FÍSICOS DE LA CÉLULA: DIFUSIÓN, ÓSMOSIS

I.

OBJETIVOS  

II.

Observar los fenómenos de difusión y ósmosis y conocer su importancia para la célula Reconocer si una célula animal o vegetal se encuentra en un medio hipotónico, isotónico o hipertónico y nombrar el fenómeno producido en la célula de acuerdo al medio

MATERIALES                

Bulbo de cebolla Allium cepa ← Láminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos Tubos de prueba Lancetas hematológicas estériles Alcohol yodado Algodón estéril Solución salina de NaCl 0,4% (medio hipotónico) Solución salina de NaCl 0,9% (medio isotónico) Solución salina de NaCl 2,0% (medio hipertónico) Agua destilada Pipetas Pasteur para cada solución Gradillas Microscopios Papel lente Recipiente para descarte

III. PROCEDIMIENTO 3.1 Experimento con eritrocitos (célula animal): 1.

Recibir tubos de prueba rotulados conteniendo solución salina en diferentes concentraciones: tubo No 1: 3 mL de sol. NaCl 0,4 % tubo No 2: 3 mL de sol. NaCl 0,9 % tubo No 3: 3 mL de sol. NaCl 2,0 %

2. En láminas rotuladas colocar 1 gota de cada concentración de solución salina. 3. Desinfectar el dedo cordial (tercero) con algodón humedecido en alcohol yodado y con ayuda de una lanceta descartable realizar una punción en el pulpejo del dedo. 4. Dejar caer 1 gota de sangre a cada lámina y con la ayuda de una laminilla mezclar suavemente la sangre con la solución salina, dejar en reposo por 2 min. 5. Colocar la laminilla y observar en el microscopio con objetivo de 40x. 6. Observe detenidamente la forma de los eritrocitos (glóbulos rojos) en vista frontal y lateral. En condiciones normales los eritrocitos tienen forma de disco bicóncavo.

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3.2

Experimento con la catáfila de cebolla (célula vegetal): 1. En láminas rotuladas colocar 1 gota de cada concentración de solución salina. 2. Con ayuda de una pinza colocar en cada lámina un trocito de catáfila de cebolla embebiendo el tejido en la respectiva solución salina. 3. Dejar en reposo por 2 min para luego cubrir la lámina con una laminilla. 4. Observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x. 5. Observe detalladamente la forma de la célula y la adherencia o separación entre la membrana plasmática y la pared celular de la célula vegetal

. IV. RESULTADOS:

MUESTRA

CONCENTRACIÓN / TONICIDAD DEL MEDIO

1

eritrocitos

NaCl 0,4 % /medio hipotónico

2

eritrocitos

NaCl 0,9 % / medio isotónico

3

eritrocitos

NaCl 2,0 % / medio hipertónico

4

célula vegetal

NaCl 0,4 % / medio hipotónico

5

célula vegetal

NaCl 0,9 % / medio isotónico

6

célula vegetal

NaCl 2,0 % / medio hipertónico

FENÓMENO CELULAR

VI. CUESTIONARIO 1. 2. 3. 4.

¿Qué tipo de difusión es la ósmosis y qué es presión osmótica? Defina qué es Diálisis, Turgencia y Plasmólisis. ¿Qué significa homeostasis? ¿En qué consisten los fenómenos de crenación y citólisis en las células animales?

V. INFORME Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados: tabla y observaciones (esquemas) con su descripción e interpretación- Conclusiones- Cuestionario- Referencias bibliográficas (estilo Vancouver).

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ESTUDIO DE ORGANELAS CELULARES: MITOCONDRIAS, LISOSOMAS, CLOROPLASTOS, PLÁSTIDOS Y VACUOLAS

I.

II.

OBJETIVOS: 

Mediante el empleo de la técnica de coloración vital se observarán las mitocondrias presentes sólo en el citoplasma de las células eucariotas, que vienen a constituir las “centrales de energía” porque producen y almacenan energía bajo la forma de ATP.



Las células tienen vesículas membranosas que contienen enzimas hidrolíticas que permiten la digestión intracelular y que corresponden a los lisosomas los cuales pueden ser identificados en protozoarios con una tinción vital.



Con el uso de suero fisiológico observar plástidos en las células eucariotas vegetales, los que contienen pigmentos o pueden sintetizar y acumular diversas sustancias. Así tenemos los Leucoplastos que son plástidos incoloros como los Amiloplastos que acumulan almidón, los Proteinoplastos que acumulan proteínas, los Óleoplastos que acumulan grasas y aceites esenciales. Los Cromoplastos son plástidos coloreados pues en su estructura contienen pigmentos como el caroteno que es un pigmento de color naranja, el licopeno de color rojo y la xantófila de color amarillo. Los Cloroplastos son plástidos que presentan el pigmento de color verde clorofila cuya función principal es realizar la fotosíntesis.



Sin embargo, algunos pigmentos vegetales como la antocianina (color grosella) no están confinados en cromoplastos sino más bien están disueltos en una vacuola del citosol.

MATERIALES:                

22

Células de epitelio bucal (Mitocondrias) Hoja de Elodea (Cloroplastos) ← Ají amarillo (Cromoplastos con Xantófila) ← Zanahoria (Cromoplastos con Caroteno) ← Papa (Amiloplastos con Almidón) ← Betarraga (Vacuola con Antocianina) ← Cultivo de protozoarios (Lisosomas) ← Microscopios Bisturí Pinza en punta Láminas y laminillas Colorante Rojo Neutro Solución Verde de Janus 1/10,000 Colorante Lugol Hisopos Mecheros de alcohol ,Guantes

III.

PROCEDIMIENTO: 3.1 Observación de mitocondrias en epitelio bucal 1. Con un hisopo obtener una muestra de la mucosa bucal mediante un raspado suave. 2. Realizar un frotis extendiendo la muestra sobre una lámina. 3. Dejar secar la lámina con la muestra al medio ambiente. 4. Cubrir la muestra con Verde de Janus durante 5 min. 5. Eliminar el exceso de colorante y dejar secar al medio ambiente. 6. Observar la preparación con objetivos de 10x y 40x. 7. Reconocer las mitocondrias teñidas de verde y refringentes al movimiento del tornillo micrométrico 3.2 Observación de lisosomas en protozoarios 1. En una lámina colocar dos gotas de cultivo de protozoarios y una gota del colorante rojo neutro, mezclar dejar reposar 2 min. 2. Cubrir con una laminilla y observar la preparación con objetivos de 10x y 40x. 3. Reconocer los lisosomas, teñidos de rojo, en el interior de los Paramecium. 3.3 Observación de plástidos en células vegetales: 

Cloroplastos: Son plástidos que localizan principalmente debajo de la epidermis superior de las hojas. 1. Seleccionar una hoja joven de Elodea y colocarla sobre una gota de agua en una lámina portaobjetos. 2. Cubrir la muestra con una laminilla. 3. Observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x. 4. Reconocer los cloroplastos de color verde en el citosol de la célula.



Amiloplastos: Tipo de leucoplastos que contienen almidón como sustancia de reserva. 1. 2. 3. 4.



Sobre una lámina portaobjetos colocar una gota de Lugol. Agregar un corte transversal fino de papa. Cubrir la lámina con una laminilla y observar con objetivos de 10x y 40x. Observar los amiloplastos teñidos de violeta.

Cromoplastos: Son plástidos coloreados por la presencia de pigmentos y presentan formas variadas (redondas, elípticas, o aciculares). 1. 2. 3. 4.

Realizar cortes finos de zanahoria y ají amarillo sobre láminas portaobjetos. Colocar una gota de agua sobre cada corte. Cubrir con una laminilla y observar con objetivos de 10x y 40x. Reconocer los cromoplastos del color anaranjado o amarillo por el pigmento que contienen

3.4 Observación de vacuolas en célula vegetal: Las vacuolas pueden ocupar entre el 30-90% de la célula vegetal y en algunos casos contienen pigmentos solubles en agua. 1. Sobre una lámina portaobjetos colocar una gota de agua. 2. Agregar un corte transversal fino de betarraga. 3. Cubrir con una laminilla y observar al microscopio con objetivos de 10x y 40x. 4. Observar la vacuola llena del pigmento disuelto betacianina de color grosella.

23

IV.

PROTOCOLO:

MUESTRAS

OBSERVACIÓN DE MITOCONDRIAS, CLOROPLASTOS, PLÁSTIDOS Y VACUOLAS

10x

40x

ORGANELA

EPITELIO BUCAL

PROTOZOARIO

HOJA DE ELODEA

PAPA

AJÍ AMARILLO

ZANAHORIA

BETARRAGA

V. CUESTIONARIO P#9 1. 2. 3. 5.

¿Qué son las patologías mitocondriales? ¿Qué relación tienen los lisosomas y la autofagia? ¿Por qué las mitocondrias fijan el colorante Verde de Janus? ¿Qué función cumplen los plástidos en la célula vegetal?

VI. INFORME Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripciónConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliográficas (estilo Vancouver).

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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA CURSO DE BIOLOGÍA MOLECULAR PRÁCTICA Nº 10 ACCIÓN ENZIMÁTICA

Las Enzimas son en su mayoría proteínas con actividad de catalizador biológico que tienen como función acelerar la velocidad de las cientos de reacciones químicas que se producen en la célula. El mecanismo de acción se realiza de la siguiente manera: Unión específica de un Sustrato(s) a la Enzima para formar un Complejo Enzima-Sustrato y desdoblamiento del complejo formado para liberar los Productos.

E + S → E–S → E + P I. OBJETIVOS  

Conocer el mecanismo de acción enzimática estudiando dos de las enzimas del hígado de pollo: la catalasa y la succinato deshidrogenasa Conocer cómo actúan las enzimas reconociendo específicamente a su sustrato para obtener los productos de la reacción

II. MATERIALES                  

25

Gradilla Bisturí Mortero con pilón Hígado de pollo ← Solución salina de NaCl 0,9% Tubos de prueba de 16 x150 mm/13x100 mm Agua oxigenada = Peróxido de hidrógeno = H2O2 Dióxido de manganeso (MnO2) Hisopos Fósforos Pipetas Pasteur Pipetas de 1mL Azul de metileno Aceite Succinato de sodio 0,1 M Buffer Fosfato pH 7.4 Mechero de alcohol Placas Petri

III. PROCEDIMIENTO

3.1 Comparación de la Actividad Catalítica entre un Catalizador Químico (MnO2) y un Catalizador Biológico (enzima Catalasa)

MnO2

+ 2 H2O2

→ 2 H2O + O2 +

Catalasa + 2 H2O2

MnO2

→ 2 H2O + O2 + Catalasa

Preparación

1. 2. 3. 4.

En un mortero preparar un homogenizado de hígado con la solución salina de NaCl 0,9%. Rotular los tubos del 1 al 3. Colocar en cada tubo 2 mL de Peróxido de hidrógeno (H2O2). Agregar al: tubo 1: ½ cucharadita de hígado de pollo entero tubo 2: ½ cucharadita de hígado de pollo triturado tubo 3: 2 g dióxido de manganeso (MnO2)

5. Colocar a cada tubo el palito de ignición encendido en la boca del tubo. 6. Si el palito de ignición aumenta la intensidad del fuego, la reacción es positiva. 3.2 Actividad de la Enzima Succinato Deshidrogenasa (SDH) o Deshidrogenasa Succínica 1. 2. 3. 4.

En un mortero preparar un homogenizado de hígado con la solución de NaCl 0,9%. Disponer de 2 tubos de 13x100 mm y roturarlos (tubo 1 y tubo 2). Colocar en cada tubo 1 mL de succinato y luego 1 mL de buffer fosfato. Añadir 2 gotas de azul de metileno, agitar y anotar el color observado.

5. Al tubo 1 incorporar 0,5 mL de aceite por las paredes y dejar en la gradilla- NO MOVER. 6. Al tubo 2 agregar 1mL de homogenizado de hígado e inmediatamente incorporar 0,5 mL de aceite por las paredes- NO MOVER. 7. Hacer el seguimiento de la decoloración de los tubos por 20 min. 8. Interpretar los resultados comparando ambos tubos. IV. CUESTIONARIO P#10 1) 2) 3) 4)

V.

Defina qué es un catalizador químico y un catalizador biológico. ¿Qué se entiende por el sitio activo de una enzima? ¿Qué tipo de enzima es la catalasa y cuál es su importancia en el metabolismo? ¿Qué es la enzima deshidrogenasa succínica, qué reacción cataliza y por qué se relaciona con el síndrome de Kearns Sayre?

INFORME

Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripción señalado para cada reacción el sustrato(s) y el producto (s)- Conclusiones- CuestionarioReferencias bibliográficas (estilo Vancouver).

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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA DE MEDICINA HUMANA CURSO DE BIOLOGÍA MOLECULAR PRÁCTICA N° 11

OBSERVACIÓN DE ELEMENTOS FORMES DE LA SANGRE

I.

OBJETIVOS   

II.

Determinar la presencia de elementos figurados presentes en una muestra de sangre periférica humana, mediante el uso de una coloración diferencial Reconocer los eritrocitos, los glóbulos blancos granulares (neutrófilos, basófilos y eosinófilos), los glóbulos blancos agranulares (linfocitos y monocitos) y las plaquetas Aprender las diferentes funciones de los elementos formes de la sangre

MATERIALES             

Láminas de sangre teñidas con colorante Wright Guantes Alcohol yodado Algodón estéril Lancetas hematológicas estériles Láminas portaobjetos limpias y desengrasadas con alcohol Colorante Wright o Giemsa Agua destilada Varillas de coloración Papel lente Aceite de cedro Microscopios Recipiente de descarte

III. PROCEDIMIENTO 3.1

Preparación del frotis de sangre capilar 1. Desinfectar el dedo anular con una torunda de algodón embebida en alcohol yodado y con una lanceta estéril punzar el dedo. 2. Dejar caer una gota de sangre sobre un extremo de la lámina portaobjetos. 3. Inmediatamente con ayuda de otra lámina portaobjetos formar un ángulo de 45° y realizar un frotis, tratando de extender homogéneamente la gota de sangre sobre la superficie de la lámina. 4. Dejar secar la preparación y proceder luego a la coloración.

27

3.2 Coloración Wright o Giemsa 1. Cubrir el frotis con colorante Wright o Giemsa por 1 min. 2. Sin eliminar el colorante agregar agua destilada y dejar actuar por 10 min. 3. Eliminar luego el colorante y lavar suavemente con agua de caño. 4. Dejar secar la lámina coloreada. 5. Observar la preparación con el objetivo de 100x y aceite de inmersión IV. PROTOCOLO Reconocer y esquematizar los siguientes elementos formes que serán microscopio: 1.

observados con ayuda del

LEUCOCITOS GRANULARES: a) Neutrófilo segmentado: presenta un núcleo con varios lóbulos (2-5) unidos por bandas de cromatina. b) Neutrófilo en banda o abastonado: presenta un núcleo no dividido en forma de S o en cayado O. c) Eosinófilo: redondo, voluminoso, con granulaciones acidófilas de color anaranjado, núcleo con dos lóbulos. d) Basófilo: es escaso, presenta un núcleo difícil de observar, pues se halla cubierto por granulaciones basófilas gruesas de color violeta o morado oscuro.

2.

LEUCOCITOS AGRANULARES: a) Linfocito: De forma redonda o irregular, su núcleo es morado, voluminoso y ocupa la mayor parte de la célula, el citoplasma es azul y sin granulaciones. Su número aumenta con las infecciones. b) Monocito: De forma redonda u ovalada, núcleo variable generalmente en forma de riñón, citoplasma sin gránulos. Presenta una gran actividad fagocitaria.

3.

PLAQUETAS: Son los elementos formes más pequeños de las células de la sangre, de forma redonda. Son esenciales en la coagulación sanguínea.

4.

HEMATÍES O ERITROCITOS O GLÓBULOS ROJOS: De forma generalmente redonda, sin núcleo, de color rosa intenso, contiene hemoglobina, que es la proteína que se encarga del transporte de oxígeno y anhídrido carbónico.

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Neutrófilos

Eosinófilo

Basófilo

Monocito

29

Linfocitos

IV.

CUESTIONARIO P#11 1. ¿Cuál es la diferencia entre plasma y suero? 2. Diga qué es la fórmula leucocitaria, cuáles son los valores normales en el adulto y qué significado tienen los valores anormales. 3. ¿Qué es la histamina y cuál es su importancia? 4. ¿Qué es la anemia y cuál es su origen? 5. ¿Qué es el colorante Wright y cuál es su composición?

V.

INFORME

Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripciónConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliográficas (estilo Vancouver).

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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA CURSO DE BIOLOGÍA MOLECULAR PRÁCTICA Nº 12

CICLO CELULAR: DIVISÓN CELULAR: LA MITOSIS

I.

OBJETIVO:  Estudiar la mitosis y el ciclo de división celular en las células meristemáticas de la raíz de Allium cepa (cebolla). En este sistema la población celular está en equilibrio dinámico y los cromosomas son relativamente grandes, con un número diploide de 2n =16.

II.

MATERIALES:            

III.

Raíces de cebolla Allium cepa ← Láminas fijadas de mitosis Placas Petri Estiletes y pinzas Papel de filtro Láminas portaobjetos Laminillas cubreobjetos Mechero de alcohol Orceína acético-clorhídrica Aceite de inmersión Papel lente Microscopios

PROCEDIMIENTO: 1. Cultivar los bulbos de cebolla en vasos pequeños conteniendo agua corriente, la que deberá cambiarse cada 24 h, mantenidos en oscuridad, a 25°C y sometidos a aireación constante. 2. Después de 48 a 72 h, arrancar con ayuda de una pinza 2 a 3 raíces del bulbo, cortar 2 cm de la parte apical y colocarla sobre una placa Petri que contenga Orceína. 3. Calentar la placa en la llama de un mechero de alcohol hasta aproximadamente los 60°C y observar la emisión de vapores blancos evitando la ebullición del colorante. 4. Dejar enfriar y repetir esta operación cuatro veces. 5. Enfriar y dejar reposar durante 15 min. 6. Colocar la raicilla en la lámina portaobjeto, cortar 2 mm de la punta, añadir una gota de Orceína fría, cubrir la preparación con laminilla. 7. Con la punta de un lápiz golpear suavemente la preparación describiendo círculos concéntricos para permitir la extensión del tejido meristemático. 8. Eliminar el exceso de colorante usando una tira de papel filtro. 9. Observar la preparación con objetivo de 100x y aceite de inmersión.

31

IV.

PROTOCOLO Reconocer y esquematizar las diferentes fases del ciclo celular que se observan: Interfase:

Profase: Metafase:

Anafase: Telofase:

Los cromosomas no se observan al microscopio debido a que son demasiados delgados y no pueden absorber suficiente colorante para ser visibles. Nota.- La interfase no es una fase de la mitosis. Fase en la cual los cromosomas se observan con sus dos cromátides hermanas. Se observa el huso acromático, los cromosomas están más condensados y cortos y se ubican en el centro de la célula. Los cromosomas (cromátides hermanas) se dirigen a los polos. Los cromosomas (cromátides hermanas) están en los polos, empieza la formación de la envoltura nuclear.

FASE DE LA MITOSIS

32

ESQUEMAS

V.

CUESTIONARIO P#12: 1. 2. 3.

VI.

¿Qué semejanzas existen entre la mitosis y la meiosis? ¿Qué es índice mitótico e índice interfásico? Defina cariocinesis y citocinesis.

INFORME

Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripciónConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliográficas (estilo Vancouver).

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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA CURSO DE BIOLOGÍA MOLECULAR PRÁCTICA Nº 13 GRUPO SANGUÍNEO Y FACTOR Rh

I.

OBJETIVO: 

II.

MATERIALES:        

III.

Al finalizar la práctica el alumno debe saber qué es el grupo sanguíneo, sus aplicaciones en el campo de la medicina y el grupo sanguíneo al que pertenece.

Guantes Placas excavadas de porcelana Lancetas hematológicas estériles Algodón Alcohol yodado Sueros comerciales Anti-A, Anti-B y Anti-D o Rh Mondadientes Recipiente de descarte

GENERALIDADES: El serólogo Karl Landsteiner, en 1900-1901 fue el primero en demostrar la existencia de grupos sanguíneos y en 1938 el Comité de Higiene de la Liga de la ONU, el Congreso de Microbiología de 1930 en Londres y la Internacional de Transfusión Sanguínea de París adoptó definitivamente la clasificación de los grupos sanguíneos humanos heredables, designados como A, B, AB y O.

34

GRUPOS SANGUÍNEOS

GRUPO SANGUÍNEO

ANTÍGENO EN GLÓBULOS ROJOS

ANTICUERPOS EN PLASMA O SUERO SANGUÍNEO

(AGLUTINÓGENOS)

(AGLUTININAS)

A

A

Anti-B

B

B

Anti-A

AB

AB

Ninguno (Receptor universal)

O

Ninguno

Anti-A + Anti-B (Dador universal)

RECONOCIMIENTO DE GRUPOS SANGUINEOS Y FACTOR Rh La técnica de reconocimiento de grupos sanguíneos se basa en la aglutinación de los glóbulos rojos cuando se mezclan con aglutininas comerciales Anti-A, Anti-B y Anti-D. IV.

PROCEDIMIENTO 1. Limpiar la yema del dedo anular con algodón embebido en alcohol yodado. 2. Realizar la punción utilizando una lanceta de hematología estéril. 3. En una lámina #1 colocar 2 gotas de sangre y en la lámina #2 colocar 1 gota de sangre. 4. Agregar a la lámina #1 una gota de suero Anti-A y una gota de suero Anti-B sobre la respectiva gota de sangre y mezclar usando palitos mondadientes separados. 5. Agregar a la lámina #2 una gota de suero Anti-D (Anti-Rh) y mezclar con la gota de sangre usando otro palito mondadientes. 6. Observar la aglutinación e identificar a qué grupo sanguíneo y factor Rh pertenece.

35

MÉTODO DE RECONOCIMIENTO PRÁCTICO

GRUPO A Anti-A

GRUPO B Anti-B

GRUPO AB Anti-A

Anti-B

GRUPO O Anti-B

FACTOR Rh (+) Anti-D

Anti-A

Anti-A

Anti-B

FACTOR Rh (-) Anti-D

V. CUESTIONARIO P#13: 1. 2. 3. 4.

¿A quiénes se les llama receptores y donadores universales de sangre? ¿Por qué? Explique cómo se produce la Eritroblastosis fetal. ¿En qué se basa el reconocimiento de los grupos sanguíneos? Indique qué tipo de sangre pueden recibir y donar las personas de los grupos sanguíneos A, B, AB y O con Rh + y Rh -.

VI. INFORME; Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados: observaciones (esquemas) con su descripciónConclusiones- Cuestionario- Referencias bibliográficas (estilo Vancouver).

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UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTA FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANA CURSO DE BIOLOGÍA MOLECULAR PRÁCTICA N° 14

EL CÓDIGO GENÉTICO

I. OBJETIVOS:  

Comprender las bases moleculares del dogma de la biología molecular Usar el código genético y comprender el efecto de mutaciones y sus posibles causas

II. MATERIALES:   

37

Secuencias problemas entregadas por el docente Lápiz y borrador. Tabla de código genético

III. PROCEDIMIENTO 

Analice y complete las siguientes secuencias (en clase)

Ejemplo:

Pro Reconocer: Sitio de N-glicosilación: Asparragina-X-Serina o Asparragina-X-Serina-Treonina. Sitio de O-glicosilación: Serina o Treonina

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SECUENCIA I Segmento A: ADN 5’ ADN 3’ Mensajero Aminoácido

a

t

g

c

g

c

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c

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g

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T

t

a

g

a

t

a

Segmento B ADN 5’ ADN 3’ Mensajero Aminoácido Segmento C ADN 5’ ADN 3’ Mensajero Aminoácido 

Analice y responda:

1. 2. 3. 4.

Número de codones: Número de aminoácidos empleados: Secuencia usada por la ARN polimerasa: Sitios de glicosilación: SECUENCIA II

Segmento A: ADN 5’ ADN 3’

T

a

c

g

g

c

a

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C

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C

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c

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g

a

T

Mensajero Aminoácido Segmento B ADN 5’ ADN 3’ Mensajero Aminoácido Segmento C ADN 5’ ADN 3’ Mensajero Aminoácido

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

Analice y responda:

1. 2. 3. 4.

Número de codones: Número de aminoácidos empleados: Secuencia usada por la ARN polimerasa: Sitios de glicosilación: SECUENCIA III (para el informe: preste atención a las indicaciones que dará el profesor)



A continuación se le entrega una secuencia de aminoácidos: Halle la posible secuencia nucleotídica y responda lo siguiente:



Analice y responda

1. 2. 3. 4.

Número de aminoácidos: Número de codones: ¿Por qué el primer aminoácido no es la metionina? ¿Cómo podríamos averiguar a qué proteína pertenece esta secuencia?

FVNQHLCGSH LVEALYLVCG ERGFFYTPKS

IV. CUESTIONARIO P#14 1. 2. 3. 4.

¿Por qué el código genético es degenerado? ¿Qué mutaciones son cruciales en el gen de hemoglobina y cómo atañe esto a la salud? Explique por qué en el código genético se utilizan tres nucleótidos por codón. ¿Por qué son importantes las mutaciones?

V. INFORME Carátula- Introducción- Marco teórico- Resultados- Conclusiones- Cuestionario- Referencias bibliográficas (estilo Vancouver).

* * * * *

40