EL ESMALTE DENTAL Composición química del esmalte. Estructura del diente Componente más interno
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EL ESMALTE DENTAL Composición química del esmalte. Estructura del diente Componente más interno del diente
Diagrama del premolar inferior en un corte longitudinal mostrando el tejido suave y las relaciones oclusales.
Substancia más mineralizada y más dura del cuerpo Menos mineralizada; forma una base elástica Cubre la raíz el diente; es similar al hueso en composición química
EL ESMALTE DENTAL Principales componentes y características de los tejidos duros. Esmalte En desarrollo
Hueso (seco, libre de grasa)
Den7na
Vol %
Peso %
Peso %
Maduro
Peso %
Vol %
Inorgánico
37
16
96
88
70
72
Orgánico
19
20
0,1
0,3
22
20
Agua
44
64
3,9
11,7
Restante
Restante
Proteína insoluble
Colágeno
Colágeno
Principal componente orgánico Componente inorgánico Densidad g /cm3
Amelogenina (una proteína heterogénea)
Peso %
Fosfato de calcio de apa7ta 1,45
2,9 – 3,0
Fosfato de calcio de apa7ta 2,01–2,05
2,00-‐2,30
Ref. Bioquímica dental básica y aplicada, R.A.D Williams y J.C. Elliot
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Características generales Esmalte en desarrollo y maduro
Componente orgánico proteína casi en su totalidad Componente inorgánico apatita
fosfato de calcio de
-‐ La distribución total de minerales se determina por microrradiogra@ía de rayos X -‐ La materia orgánica por análisis químico -‐ El agua por diferencia Distribución de agua, material orgánico e inorgánico en el esmalte desde la superFicie hasta la unión esmalte- dentina
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Características generales El contenido de minerales disminuye desde la super@icie hasta la unión
esmaltedentina (hay una capa super@icial hipermineralizada); En la fracción orgánica, se encuentra una distribución inversa.
Esta variación en el contenido orgánico y mineral in4luye en la densidad.
Contorno de la densidad en un corte del primer premolar permanente en un individuo de más de 30 años.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Proteínas del esmalte en desarrollo Aminoácido
Residuos por 1.000 residuos totales
Aminoácido
Residuos por 1.000 residuos totales
Aspartato
32
Leucina
86
Glutamato
181
Tirosina
57
Treonina
33
Fenilalanina
23
Serina
52
Triptófano
0
Hidroxiprolina
0
Hidroxilisina
0
Prolina
226
Lisina
18
Alanina
18
Histidina
70
Glicina
61
Arginina
26
Valina
46
Cistina (½)
0
Isoleucina
30
Metionina
39
Contenido de aminoácidos de varias fracciones de proteínas separables del esmalte en desarrollo
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Proteínas del esmalte en desarrollo Las propiedades características de esta composición, que las diferencian de otras proteínas, son: 1. Un contenido muy alto del aminoácido prolina, constituyendo casi una cuarta parte del total de residuos de aminoácidos. 2. Un alto contenido de ácido glutámico, y con frecuencia una relación molar elevada con respecto al ácido aspártico (> 4:1). 3. Un alto contenido de histidina, con respecto a otros aminoácidos básicos (relación molar histidina:lisina:arginina cerca de 3:1:1). 4. La glicina constituye una décima parte del total de residuos. 5. Cisteína ausente o presente en cantidades muy pequeñas. 6. Hidroxiprolina e hidroxilisina ausentes o presentes a un nivel muy bajo.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Proteínas del esmalte en desarrollo Las características descrita indican que las proteínas del esmalte en desarrollo son únicas entre las proteínas estructurales de los vertebrados Amelogeninas -‐ Se diferencian del colágeno por la ausencia de hidroxiprolina. -‐ Podría tener algún parecido a la queratina La mayor parte de las proteínas del esmalte en desarrollo son: -‐ Solubles a pH ácido en presencia de urea; -‐ Muy heterogéneas (pueden separarse 20 a 30 fracciones diferentes utilizando diversas técnicas) En análisis por difracción de rayos X se observa la presencia de una estructura β-‐cruzada.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Proteínas del esmalte en desarrollo La amelogenina es el mayor componente de la matriz del esmalte, existe en un 90% (van der Pouw et al, 2002); -‐ Ameloblastina -‐ Enamelina -‐ Amelina -‐ Secuencias de ácido arginina-‐glicina-‐aspártico Posee alrededor de 180 aminoácidos, éstos poseen la capacidad de autoensamblarse formando estructuras de en forma de nanoesferas. Las nanoesferas actúan como “acarreadores” de otros factores secretados por otras células en el ambiente local. Producida por ameloblastos y odontoblastos Son proteínas acídicas, hidro@ílicas, fosforiladas y glicosiladas. Se localiza, junto con amelogenina, en los cuerpos de las varillas del esmalte.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Viswanathan et al. (2003) propone dos teorías de cómo actúan las amelogeninas: 1. La amelogenina, una molécula "señal", es capaz de modular la expresión de genes asociados a cementoblastos, esto sugiere que el desarrollo de tejidos periodontales son el resultado de complejas interacciones. 2. La amelogenina, una proteína estructural, es capaz de actuar como una nanoestructura que tiene la capacidad de acarrear otros factores no conocidos incorporados por otras células y unirlos al complejo de amelogenina ensamblado. Subsecuentemente, estos factores acarreados son liberados para promover el desarrollo periodontal.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte
Formación de estructuras supramoleculares, a partir de amelogenina.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Componentes orgánicos del esmalte maduro La composición de aminoácidos del material orgánico total del esmalte ≠ de las amelogeninas; (-‐) prolina, ácido glutámico e histidina; (+) glicina, ácido aspártico y serina. Durante la mineralización del esmalte y la maduración ocurre un cambio importante en la composición de aminoácidos.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Composición química del componente inorgánico La concentración de algunos de los componentes inorgánicos del esmalte varía con la distancia a la super@icie del diente. - Promedio de calcio y fósforo en el esmalte total: 33,6 a 39,4% y 16,1 a 18% en peso, respectivamente. La concentración de fósforo y calcio tiende a decrecer de la super@icie hacia la unión de esmalte-‐dentina. Ejemplo típico: Los porcentajes de calcio varían entre 37,8 y 34,5% para el esmalte de la super@icie y el interno; El porcentaje en peso de fósforo varía entre 18,0 y 15,0, respectivamente. La relación Ca/P se mantiene constante: en peso 2,1 y 2,3; relación molar 1,62 y 1,78.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Composición química del componente inorgánico - Carbonato, promedio en el esmalte total: 1,95 a 3,66% en peso. El nivel de carbonato aumenta de la super@icie hacia la unión amelodentinaria; puede cambiar hasta por un factor de 2. La distribución de carbonatos se 4ija antes de que broten los dientes, y no se afecta de manera importante por estar expuestos en la boca. El bajo contenido de carbonato de la región externa del esmalte puede ser una consecuencia de la baja producción Contorno de CO2.
del contenido constante de carbonato (expresado como % de CO2 en peso) en un diente molar humano permanente.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Composición química del componente inorgánico - Sodio, promedio en el esmalte total: 0,25 a 0,90% en peso. Hay una concentración de sodio más alta en las regiones internas del esmalte que en la super@icie; esto se puede explicar porque el sodio se asocia al agua en el esmalte, cuya concentración es más alta en el interior. - Magnesio, promedio en el esmalte total: 0,25 a 0,56% en peso El magnesio tiene el mismo patrón de distribución que el carbonato y el sodio; La concentración cerca de la unión esmalte-‐dentina puede ser hasta de tres veces la de la capa super@icial.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Composición química del componente inorgánico - Cloro, promedio en el esmalte total: 0,19 a 0,30% en peso Existe una declinación gradual en el contenido de cloro del esmalte desde la super@icie hasta la unión esmalte-‐dentina (distribución presente en los dientes desde antes de brotar). - Hierro, promedio en el esmalte total: 8 a 218 ppm Existe una concentración un poco mayor en la super@icie en comparación con el esmalte subsuper@icial, y un ligero aumento con la edad. - Otros elementos Zinc: concentraciones comparables con las del @lúor, también se acumula en la super@icie. Plomo: concentraciones más bajas, se acumula en la super@icie. Estaño: tendencia a acumularse en la super@icie.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Composición química del componente inorgánico - Flúor, concentración en el límite: 50 partes por millón (más alto en la super4icie). De todos los componentes inorgánicos, el @lúor (como @luoruro) presenta mayor variación en cuanto a concentración. Es alta en la zona super@icial inmediata y disminuye en forma brusca en la unión esmalte-‐dentina.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Composición química del componente inorgánico
Distribución de Flúor (partes por millón) en tejidos calciFicados: (a) fémur humano; (b) dentina molar; y (c) esmalte molar.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Composición química del componente inorgánico El contenido de @lúor que posee el agua es un factor importante que controla la concentración de @lúor en el esmalte. Relación entre el @lúor en el esmalte y su concentración en el agua para beber. Variaciones en el contenido de esmalte en capas sucesivas de esmalte convertido en cenizas de personas menores de 20 años de edad en comunidades con 0,1, 1,0 y 5,0 partes por millón de @lúor en el abastecimiento de agua.
EL ESMALTE DENTAL Composición de esmalte Composición química del componente inorgánico El patrón de distribución de @lúor en el esmalte se establece antes del
brote de los dientes. Después hay una captación lenta. También in@luye la pérdida por desgaste.
Variación de la concentración de @lúor en la super@icie del esmalte de un canino superior permanente de una mujer de 52 años de edad.
EL ESMALTE DENTAL Composición de la dentina, el cemento y el hueso Constituyente
Dentina* (secada a 100ºC)
Hueso+ (bovino total seco)
Peso %
Peso %
17,5-‐18,5♯ 0,2
21,2 0,24§
Citrato Lactato
0,86-‐0,89 0,15
0,8-‐0,9
Lípidos
0,044-‐0,36
0,10
0,2-‐0,6
0,19
Orgánicos Colágeno “Proteína resistente”
Sulfato de condroitina Sialoproteína Glucoproteína ácida (no contiene ácido siálico)
0,19-‐0,28 0, 074-‐0,105
Péptidos
0,13
Agua (y otros) Inorgánicos Cenizas Dióxido de carbono
5¶
3-‐4¶
71,5-‐72,4 3,0
70 4,0
Componentes orgánicos de la dentina y el hueso
EL ESMALTE DENTAL Composición de la dentina, el cemento y el hueso Constituyente Ca P (presente como fosfato o fosfato ácido) P (presente como pirofosfato) CO2 Na Mg Cl K F Fe Zn Sr Relación Ca/P (en peso) Relación Ca/P (molar)
Dentina* (humana seca)
Hueso+ (valores típicos)
Peso % 26-‐28 12,2-‐13,2
Peso % 24,0 11,2
Alrededor de 0,05♯ 3,0-‐3,5 0,7§ 0,8-‐1,0 0,4§ 0,02-‐0,04 Partes por millón 50-‐10.000 60-‐150 200-‐700 100-‐600 2,10-‐2,20 1,6-‐1,7
Alrededor de 0,05♯ 3,9 0,5§ 0,3 0,01 0,2 Partes por millón 5.000¶
2,15 1,66
Componentes principales y menores de la dentina y el hueso
EL ESMALTE DENTAL Composición de la dentina, el cemento y el hueso Colágeno Es la matriz de la dentina, el cemento y los huesos, sitio donde se forman los cristales de apatita. (a) Estructura secundaria repetitiva exclusiva del colágeno. La secuencia es Gly-‐X-‐Pro o Gly-‐X-‐4-‐ Hyp y adopta una estructura helicoidal levógira, con tres residuos por vuelta. (b) Modelo de esferas. (c) Tres de estas cadenas se enrollan entre sí en forma dextrógira. (d) Superhélice de tres cadenas vista desde un extremo. Los residuos de glicina se representan en rojo. Es necesaria para que las tres cadenas entren contacto.
EL ESMALTE DENTAL Composición de la dentina, el cemento y el hueso Proteína resistente Se compone de proteína insoluble remanente después de la digestión con
colagenasa. Probablemente contiene elastina de los vasos sanguíneos (insolubles) y quizá albúmina. Lípidos El contenido de lípidos en el hueso es muy pequeño; alrededor de tres
cuartas partes son TG, y el componente más importante de la cantidad restante es colesterol libre.
EL ESMALTE DENTAL Composición de la dentina, el cemento y el hueso Sulfato de condroitina Es el glucosamino glucano más importante del hueso (hay otros); En la pulpa y la dentina, las proporciones relativas dependen de la edad y
de la especie; El sulfato de condroitina no está libre en el hueso, sino unido a un centro proteínico. Sialoproteína Es el principal componente glucoproteico, con casi la mitad de proteína,
la mitad de carbohidrato y cerca de 1% de fosfato; El componente carbohidrato es el ácido siálico; La proporción de carbohidrato y proteína es poco usual.
EL ESMALTE DENTAL Composición de la dentina, el cemento y el hueso Péptidos Se pueden aislar cierto número de polipéptidos, péptidos pequeños y
aminoácidos del hueso, con pesos moleculares ≈ a 30.000; En algunos casos se encuentran grandes cantidades de arginina, ácido aspártico, valina, leucina e isoleucina y en otros, de glicina. Fracción inorgánica de la dentina y el hueso El contenido de magnesio de la dentina, por lo general es 2 o 3 veces mayor que el esmalte o el hueso; El contenido de carbonatos en la dentina es más alto que el del esmalte, pero un poco menor que el hueso; El @lúor se encuentra en una concentración mucho más alta en la super@icie de la pulpa, que en el interior y puede aumentar 3 o 4 veces durante el tiempo de vida de un individuo.
EL ESMALTE DENTAL Película adquirida Biopelícula salival adsorbida sobre la super@icie del diente libre de bacterias. Si toda la placa se retira de la super@icie del esmalte, queda una capa
delgada de material orgánico, que permanece adherida de manera @irme a la super@icie dental. Las primeras evidencias de una “película” sobre la super@icie dental aparecen en 1839, cuando Alexander Nasmyth describe la presencia de una membrana orgánica en la super@icie del esmalte, que se desprendía al sumergir el diente en solución ácida. La adsorción de esta película ocurre de manera diferente en las super@icies dentales; existe diferencia en la composición de las películas según estén sobre: el esmalte, cemento, cálculo, etc.
EL ESMALTE DENTAL Película adquirida Película adquirida Etapa inicial de la formación de la placa dentobacteriana; Actúa de nexo entre la super@icie del diente y la microbiota oral.
Constituye un elemento esencial de la cavidad oral ya que su composición proteica condiciona la colonización bacteriana. La placa bacteriana de4ine la génesis de la caries, la gingivitis y la enfermedad periodontal. -‐ Delgada cutícula (10 μm de espesor) de naturaleza orgánica, estéril y acelular, recubre todas las super@icies dentarias expuestas al medio bucal. -‐ La pro@ilaxis dental profesional elimina toda la materia orgánica y las bacterias de la super@icie adamantina, incluida la película adquirida, pero cuando el esmalte vuelve a contactar con la saliva, en cuestión de segundos vuelve a reconstituirse la película adquirida.
EL ESMALTE DENTAL Película adquirida Composición química Estructura dinámica
ecosistema primario de la cavidad oral.
Constantemente está ocurriendo el ciclo de “adsorción-‐desorción” de las biomoléculas. Estudios demuestran que hay diferencias en la interacción de la película adquirida con la super@icie a contactar (natural, material de restauración, prótesis, etc.) Película formada sobre el cemento ≠ Película formada sobre el esmalte Estudios de modelos in vitro e in vivo muestran las diferentes características electroforéticas y de composición aminoacídica.
EL ESMALTE DENTAL Película adquirida Composición química El análisis de aminoácidos revela: -‐ Baja concentración de cisteína y metionina. -‐ Relación baja de glicina, con respecto a la alanina. -‐ Baja concentración de serina.
La película se constituye por un 98% de glucoproteínas salivales (organizadas como micelas). Las micelas: -‐ Presentan diámetros de 20 a 300 nm -‐ Poseen alta proporción de α-‐amilasa y lisozima
EL ESMALTE DENTAL Película adquirida Composición química Componente Proteico
Ejemplos 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.
Mucinas Proteínas ricas en prolina Estaterinas Hista7nas Cista7nas IgA secretora α-‐amilasa (fosforilada o glicosilada) 8. Anhidrasa carbónica 9. Fracciones del complemento 10. Glucosiltransferasa
Funciones generales Lubricación y viscosidad (1, 3) Protectoras de tejido (1, 2, 3, 5, 7) Mineralización (2, 3, 4, 5) Protección inmunológica (1, 3, 4, 5, 6, 9) Tamponadoras (4, 8) Adhesión inicial y agregación en la formación de la placa bacteriana (1, 2, 10) Degradación de sustratos para la nutrición bacteriana (7)
Principales componentes de la película adquirida.
EL ESMALTE DENTAL Película adquirida Composición química Componente
Ejemplos
Funciones generales
Glucídico
1. Azúcares neutros (glucosa, galactosa, fucosa) 2. Aminoazúcares (glucosamina, galactosamina) 3. Glúcidos derivados, como el ácido siálico
Conforman la porción oligosacárida de la mucina. Unión de las adhesinas bacterianas a los receptores glucídicos de la película adquirida (1, 2, 3) Afines a la pared microbiana (2) Implicados en la viscosidad salival (3)
Lipídico
1. Glucolípidos 2. Glicéridos y colesterol (lípidos neutros) 3. Ácidos grasos libres 4. Fosfolípidos
Modulan la colonización de la superficie dental (1, 4) Efecto protector de la película regulan la difusión del ácido lác7co originado por la fermentación bacteriana de los azúcares (1, 2, 3 y 4)
Principales componentes de la película adquirida.
EL ESMALTE DENTAL Película adquirida Composición química. Multifuncionalidad enzimática
1 2
3 4
4
5
6
Multifuncionalidad de las enzimas de la película adquirida. 1. Secreción de enzimas salivales (micelas proteicas). 2. Hidrólisis del almidón. 3. Glicólisis y formación de lactato. 4. Formación de polisacáridos extracelulares por glicosil transferasa. 5. Las enzimas absorbidas facilitan la adherencia bacteriana a la super@icie del esmalte. 6. Actividad antimicrobiana de lisozima y peroxidasa.
EL ESMALTE DENTAL Película adquirida Composición química. Multifuncionalidad enzimática Enzima
Peso molecular (kDa)
Sustrato @isiológico y función
Origen
Amilasa (1,4-‐α-‐D-‐ glucanohidrolasa)
40-‐50
Digestión de almidón y Glándulas salivales, maltooligosacáridos principalmente parótidas
Anhidrasa carbónica
39-‐46
Mantención del pH @isiológico
Glándula salival (celula acinar)
Hidrólisis del péptido glucán bacteriano
Glándulas salivales, sublingual y submaxilar
Lisozima/muraminidasa (mucopéptido N-‐ acetilmuramilhidrolasa) Neuraminidasa/ sialidasa (acil neuramil hidrolasa)
15
Variable Liberación del ácido siálico asociado a los sialil-‐oligosacáridos
Microorganismos orales y lisosomas de células humanas
Resumen de las principales enzimas encontradas en la película adquirida
EL ESMALTE DENTAL Película adquirida Composición química. Multifuncionalidad enzimática Enzima
Peso molecular (kDa)
Sustrato @isiológico y función
Origen
Glucosiltransferasa
140
Síntesis de glucanos a Microorganismos del tipo partir de disacáridos Streptococcus
Transglutaminasa (glutamina α-‐ glutamiltransferasa)
77
Entrecruzamiento de glutamina
Células mucosas orales
Peroxidasas (peróxido de hidrógeno óxidoreductasa)
90
Reducción de peróxidos y oxidación de tiocianato
Glándulas salivales
Resumen de las principales enzimas encontradas en la película adquirida
EL ESMALTE DENTAL Formación de la película adquirida En el ecosistema oral se producen múltiples interacciones @isicoquímicas entre el esmalte dental, los microorganismos de la placa bacteriana, los tejidos blandos mucosos y la fase líquida. Los cristales de HA forman un sistema dinámico que experimenta permanentemente intercambio iónico con la saliva. Existen fenómenos de disolución (desmineralización) y precipitación (remineralización) En la formación de la película adquirida participan enlaces iónicos y fuerzas débiles del tipo hidrofóbicas, enlaces por puentes de hidrógeno y fuerzas de Van der Waals.
EL ESMALTE DENTAL Formación de la película adquirida
Representación esquemática de la formación de la película adquirida.
EL ESMALTE DENTAL Formación de la película adquirida La película adquirida posee un carácter electronegativo debido al gran contenido de proteínas con grupos aniónicos libres. Grupos fosfato de la HA
Interacción
Calcio del entorno oral
Neutralización Los iones Ca2+ sirven de puente permitiendo la unión entre los componentes salivales a través de sus grupos aniónicos
Los aniones fosfato tienen forma tetraédrica con el átomo
de fósforo en el centro y los de oxígeno en los vértices. Los iones Ca2+ están relativamente protegidos por los fosfatos; por lo
tanto, la super@icie de la HA tendrá carga predominantemente negativa.
EL ESMALTE DENTAL Formación de la película adquirida La formación de la película adquirida podría ocurrir en dos etapas: 1. Cuantitativamente más signi@icativa; dura cerca de 30 minutos: Retención de proteínas provenientes de la saliva (pesos moleculares de 30 a 160 kDa). 1º La saliva baña la corona del diente se forma la capa de hidratación; 2º hay adsorción de proteínas ácidas salivales (debido al carácter anfótero), estas proteínas pueden ser proteínas ricas en prolina o estaterinas; 3º Se produce el depósito de fosfoproteínas salivales y glucoproteínas sulfatadas de bajo PM. Factores claves para la adsorción: -‐ Carga de las proteínas -‐ Con4iguración molecular -‐ Distribución de grupos cargados
EL ESMALTE DENTAL Formación de la película adquirida Durante la primera etapa de formación, es importante el pH y la disponibilidad de iones calcio. Mayor producción de película adquirida: -‐ A pH 6,0, muy próximo al pH crítico 5,5 de la HA. 2. La segunda etapa tiene importancia funcional; condiciona la adhesión primaria de microorganismos. En esta etapa se altera la conformación molecular de la película y se pierde la estructura globular debido a la actividad de enzimas proteolíticas o metabolismo bacteriano. Genera un depósito de residuos proteicos sobre la HA; moléculas como la mucina, pierden su carga negativa y precipitan por insolubilización.
EL ESMALTE DENTAL Tabla página 35 * Eastoe, en: Miles (1967) + Basado en la Tabla III de Herring (1972) ♯ incluye 0,5 a 0,9 % que es soluble en agua § Resistente a la colagenasa ¶ Depende de las condiciones de secado