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UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO

PERÍODO ACADÉMICO ASIGNATURA NOMBRE DEL DOCENTE FECHA NÚMERO DE PRÁCTICA

NOMBRE DE LOS ESTUDIANTES.

LUGAR DE LA PRÁCTICA TÍTULO DE LA UNIDAD TEMA DE LA PRÁCTICA

{GUÍA DE PRÁCTICA DE LABORATORIO OCTUBRE 2019 - MARZO 2020 ANÁLISIS CLÍNICO SEMESTRE: 6to PARALELO: Único MGS. ELENA BRITO 29 de Octubre del 2019 03 HORA: 18H00-21H00 DURACIÓN: HORAS GRUPO 1 GRUPO 2 1. ALVAREZ ANA 15. VALLE ARIEL 2. SARSOZA JENIFFER 16. GILER CARLOS 3. PACHECO SEBASTIAN 17. IBARRA ANGEL 4. ARÉVALO JOSELINE 18. GOMEZ SHIRLEY MARIELA 5. BARRAGÁN JOSELYN 19. LUPERA JEAN 20. LUNAVICTORIA JULIO 6. GUERRA MÓNICA 7. CHIMBOLEMA ERIKA GRUPO 3 21. CAIZA KATHERINE BRIGGITH 8. ERAZO CARLOS 9. LOMBEIDA KATHERINE 22 CUNALATA EVELYN 23. CHIMPANTIZA JOSELYN 10. OBANDO JOSELYN 24 CUNALATA ANA ELIZABETH GRUPO 2 25. ROMERO ERIKA ESTHEFANÍA 11. ALCOSER ODALIS 26. PAZMIÑO ERICK ANDRÉS 12. CUJIGUALPA KAREN 27. LOMBEIDA XAVIER 13. LÓPEZ MIREYA 14. GUALÁN MARTHA LABORATORIO E200 UNIDAD 1. TÉCNICA DE ANALISIS

RESULTADO DE APRENDIZAJE. Aplica conocimientos teórico-prácticos mediante procedimientos y técnicas manuales y/o automatizadas de análisis de laboratori en las diferentes áreas: Hematología, Bioquímica, Serología e Inmunología, Uroanálisis, Microbiología, Parasitología, Toxicología Terapia Transfusional, Citología y Técnicas Histológicas, Técnicas forenses y Biología molecular en muestras biológicas para forma profesionales competitivos.

OBJETIVO GENERAL

Objetivos específicos

Conocer las diferentes técnicas de análisis cuantitativos

 

Conocer el fundamento de las técnicas cinética multipunto Conocer el fundamento de las técnicas cinética punto aparte

FUNDAMENTO TEÓRICO: Métodos cinéticos Consisten en medir la absorbancia varias veces con intervalo de minutos. Permite comprobar que realmente estas en la zona linea de la curva, zona ideal para la determinación. Si se detectan desvíos de la linealidad se puede despreciar alguna de las medidas finale de la absorbancia. En muchas reacciones enzimáticas participan como cofactores los complejos NAD- NADH o NADP – NADPH y en esta participación se basan muchos métodos analíticos Métodos a punto final. Se ponen en contacto los reactivos que aportan al sustrato y la amuestra biológica que aporta el enzima y tras un periodo de incubació que supere el periodo de retardo se mide la absorbancia. Al cabo de un tiempo establecido se detiene la reacción y se vuelve a medir la absorbancia. No es frecuente este tipo de técnica a presentar los inconvenientes de suponer que la reacción es lineal y la cinética de orden cero, para que la velocidad no dependa de l concentración de sustrato, lo que no ocurre siempre. Se incuba la muestra y el reactivo durante un tiempo determinado y a una temperatura determinada para que se complete totalment la reacción, de tal forma que la sustancia que buscamos debe consumirse totalmente. Si no fuera así y quedase parte de la sustanci

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sin consumir, al medir el producto, estaríamos midiendo menos cantidad de la que realmente hay. Por lo tanto se mide al final de u tiempo fijo de incubación. La concentración de una sustancia es igual a la absorbancia por un factor llamado “Factor de Calibración (K)”, que coincide con l pendiente de la recta de calibración Un método frecuentemente usado para la corrección de la interferencia espectral es la medición de una típica reacción de punto fina como lo es la reacción cinética de dos puntos. Si se monitorea la absorbancia de una reacción colorimétrica no instantánea en funció del tiempo, se observa una curva de reacción. Una reacción de punto final se monitorea a un solo punto de tiempo, cuando la reacció casi se ha completado .Si no hay interferencias espectrales, la curva de reacción debería pasar por el origen. Si existe este tipo d interferencia, la curva será paralela a la original, pero sesgada hacia valores más elevados debido al color endógeno de la muestra Si se usa un blanco de muestra para restar el color endógeno, se obtendrá una línea idéntica a la de la muestra que no contien interferencias. En un ensayo cinético de dos puntos, la absorbancia es medida a dos puntos diferentes de tiempo; cuando (1) e desarrollo final de color no ha ocurrido y de hecho puede ser pequeño y, (2) cuando la respuesta de absorbancia versus tiempo e todavía lineal. La lectura inicial se toma realmente cuando casi no ha ocurrido formación de color. De esta manera, cualquie absorbancia a este tiempo es principalmente ocasionada por interferentes espectrales endógenos. Después de un tiempo corto se tom una segunda lectura cuando se ha formado solamente una pequeña cantidad de color y la respuesta de absorbancia versus tiempo e todavía lineal .Esta absorbancia por lo tanto incluye la del color endógeno original y la del color producido debido a la reacció analítica específica. Al substraer la primera lectura de la segunda, la delta de absorbancia calculada (DA) es causada solamente po el color específico formado por la reacción analítica. En la curva estándar basada en los análisis cinéticos se grafica el cambio en l absorbancia (DA) versus la concentración .En esta curva estándar la presencia de un interferente coloreado, no reactivo, endógeno no tiene efecto. Por consiguiente no se necesita hacer una medición separada de blanco de muestra; una reacción cinética de do puntos es por sí misma un blanco cuando no hay cambio en la naturaleza del interferente durante la reacción. Esta es una técnic importante cuando se están desarrollando análisis químicos automatizados en un gran número de muestras. MATERIALES Y MÉTODOS Equipos Espectrofotómetro

Materiales Tubos de ensayos suero

Reactivos Colesterol

PROCEDIMIENTO / TÉCNICA: ESQUEMA DE PIPETEO CINETICA PUN TO FINAL (COLESTEROL) RESULTADO (Gráficos, cálculos, etc.) OBSERVACIONES

CONCLUSIONES  La técnica cinectica multipunto consisten en medir la absorbancia varias veces con intervalo de minutos. Permite comproba que realmente estas en la zona lineal de la curva, zona ideal para la determinación. Si se detectan desvíos de la linealidad s puede despreciar alguna de las medidas finales de la absorbancia.  Una reacción de punto final se monitorea a un solo punto de tiempo, cuando la reacción casi se ha completado .Si no ha interferencias espectrales, la curva de reacción debería pasar por el origen. Si existe este tipo de interferencia, la curva ser paralela a la original, pero sesgada hacia valores más elevados debido al color endógeno de la muestra. . RECOMENDACIONES

CUESTIONARIO: 1. Por qué se llama técnica cinética punto final? 2. En las técnicas cinéticas multipunto como se determina que la misma se encuentra fuera de linealidad? BIBLIOGRAFÍA

1. Contreras, J. (s.f). Espectrofotometria. Disponible en: https://jorge-contreras.webs.com/guia espectrofotometria.pdf 2. file:///C:/Users/Usuario/Downloads/Guia_TP_2_Quimica_II_2010.pdf 3. De la Torre, F. Apuntes de espectofotometria. Disponible en http://www.bioquimica.ucv.cl/paginas/central/bioquimica%20clinica/apuntes%20de%20espectrofotometria.pd

UNIVERSIDAD NACIONAL DE CHIMBORAZO FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD CARRERA DE LABORATORIO CLÍNICO E HISTOPATOLÓGICO

DIRECTOR/A DE CARRERA Mgs. Ximena Robalino

DOCENTE Mgs. Elena Brito

RESPONSABLE DEL LABORATORIO Lic. Franklin Ramos