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Tema 12
Tema 12
Tema 12
Fundamentos de inmunohematología métodos generales de estudio Conceptos generales Antígenos eritrocitarios y anticuerpos de grupo sanguíneo: Tipos y características Anticuerpos naturales e inmunes: características Sistema A B O: Antígenos y anticuerpos
FUNDAMENTOS DE INMUNOHEMATOLOGÍA MÉTODOS GENERALES DE ESTUDIO
Determinación del grupo ABO
Sistema Rh: Antígenos y anticuerpos Determinación del antígeno D (Rh)
Bioquí Bioquímica Clí Clínica i Hematologia
Prueba de Coombs indirecta Prueba de Coombs directa
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Tema 12
Tema 12
Conceptos generales
Anticuerpo de clase IgM
ANTIGENOS Toda sustancia que introducida en el organismo provoca una reacción inmune De tipo humoral: Formación de anticuerpos De tipo celular
ANTICUERPOS Proteínas plasmáticas (γ-globulinas) producidas como respuesta a la entrada de un antígeno. Clasificación por la cadena pesada:
IgG(γ), IgM(µ), IgA(α), IgD(δ), IgE(ε) Subclases según cadena ligera: κ, λ Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
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Tema 12
Conceptos generales Grupo sanguíneo: Sistema bien definido de antígenos de los hematíes, controlado por un locus que posee un número variable de genes alélicos ABO, Rh Lewis, P, I, MNS, Kidd, Kell, Duffy, Lutheran
Grupo sanguíneo personal: fenotipo antigènico de los genes de grupo sanguíneo heredados. Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Antígenos eritrocitarios y anticuerpos de grupo sanguíneo: Tipos y características
Tema 12
ANTIGENOS ERITROCITARIOS Características del sistema antigénico Rh Segundo en importancia en la práctica transfusional Muy polimorfo, pero sólo 5 son comunes:DCcEe La herencia de los antígenos es mendeliana codominante.Tres alelos: D y d, C y c, E y e Los genes se localizan en el cromosoma 1 La designación Rh positivo indica la presencia del antígeno D : 85% de los individuos (42% homocigótico:DD, 58% heterocigótico: Dd) El antígeno D es muy inmunogénico y es causa relevante de la “enfermedad hemolítica del recién nacido” (EHRN) Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Antígenos eritrocitarios y anticuerpos de grupo sanguíneo: Tipos y características
Tema 12
ANTIGENOS ERITROCITARIOS Tipos
Antígenos ABO: Glucolípidos Sistema antigénico Rh: Lipoproteínas de la membrana Otros: Lewis, grupo P, grupo MMSs, Kell, Duffy, Lutheran,etc
Características antígenos ABO Antígenos A i B: Carbohidratos unidos a sustancia H La herencia de los antígenos A y B es mendeliana Determinan el grupo ABO y depende de la presencia de uno (homocigota) o dos (heterocigota) de los tres alelos: A, B y H cuyos genes están en el cromosoma 9p Genes codifiquen para glicosil transferasas Si se heredan transferasas tipo A i B > grupo AB Si se heredan transferasas tipo A> grupo A No se hereda ninguna transferasa > grupo O Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Antígenos eritrocitarios y anticuerpos de grupo sanguíneo: Tipos y características
Tema 12
ANTICUERPOS DE GRUPO SANGUÍNEO Tipos Heteroanticuerpos (de otras especies animales o vegetales) ALOANTICUERPOS (de otros individuos misma especie) Autoanticuerpos (contra los propios antígenos) Naturales (A,B,O) ( sin estímulo previo) Inmunes (Rh) ( ha habido estímulo antigénico) Regulares (presentes aunque no halla antígeno) Irregulares (no necesariamente existen en ausencia de antígeno)
Aglutinantes en solución salina (completos) Sensibilizantes (incompletos) Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
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Tema 12
Anticuerpos naturales e inmunes: características
Tema 12
Anticuerpos naturales e inmunes: características
ANTICUERPOS DE GRUPO SANGUINEO Características
Inmunoglobulinas específicas de grupo sanguíneo Naturales:
Inmunoglobulina
Congénitas; sin estimulaciones antigénicas Todos los individuos tienen anticuerpos contra antígenos que no poseen (isoaglutininas): grupo A> anticuerpos B Dirigidos contra carbohidratos: por ejemplo sistema ABO IgM
Aglutinación eritrocitaria en solución salina
Anticuerpos frios Puedan activar el complemento >hemólisis intravascular aguda
Naturales
Inmunes
Generalmente IgM
Generalmente IgG
Importante
Escasa
4ºC
37ºC
La mayoría
Pocos
No
SI
Temperatura óptima
Inmunes o Reactivos:
Fijación complemento “in vitro” Pasan la barrera placentaria
Adquiridos; como reacción a transfusiones o embarazos Dirigidos contra proteinas ; Rh (D,C,c,E,e) IgM→IgG Anticuerpos calientes Hemólisis predominantemente extravascular Atraviesan la barrera placentaria
enfermedad hemolítica del recién nacido Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
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Sistema A B O – antígenos A1, A2, B, O (alelo silencioso)
Grupo A
Grupo B
Grupo AB
Antigeno A
Antigeno B
Antigenos AB
Grupo 0 No antígenos
RBC
Plasma Anticuerpos Anti-B
Anticuerpos Anti-A
No anticuerpos
Anticuerpos AyB Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
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Sistema A B O – antígenos A1, A2, B, O (alelo silencioso)
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Genotipos
Fenotipos
Frecuencia %
OO A1 A1 A1 A2 A1 O A2 A2 A2 O BB BO A1 B
O
53,5
A1 * A2 (2% con anti-A1)
34
B A1 B A2 B (25% con antiA2 B A1) * El 80% de los sujetos A son A1
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3,5
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Sistema A B O diferenciacion entre A1 y A2 aglutinacion por las lectinas
Sistema A B O – anticuerpos
Dolichos biflorus
Ulex europaeus
A1
+
-
A2
-
+
Aloanticuerpos naturales y generalmente regulares Los anticuerpos irregulares (anti-A1) interfieren las pruebas cruzadas pretransfusionales pero sin importancia clínica, excepto si actúan a 37ºC (hemolizantes) Predominantemente IgM Aglutinan en solución salina Temperatura óptima: 4ºC pero son activos y hemolizantes a 37ºC Inmunización fetomaterna rara (madre O que desarrolla anticuerpos IgG contra eritocitos A o B del feto)
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Combinaciones de alelos que determinanTema 12 los fenotipos ABO y sus anticuerpos
Combinaciones de alelos que determinan los fenotipos ABO y sus anticuerpos Parejas de alelos
Fenotipos ABO
A,A
A
Isoaglutininas: anticuerpos Anti-B
A,O
A
Anti-B
A, B
AB
cap
B, B
B
Anti-A
B, O
B
Anti-A
O, O
O
Anti-A, Anti-B, Anti-AB Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
Genotipo
Fenotipo
Antigenos de hematies
Anticuerpos séricos
AA A1A2 A1O A2A2 A2O BB BO A1B
A1
A1, H
Anti-B
A2
A2, H
B
B, H
Anti-B (Anti A1) Anti A, A1
A1B
A1, B, H
A2B
A2B
A2, B, H
(Anti-A1)
OO
O
H
hh
Oh
-
Anti-A, A1 Anti-B Anti-A, A1 Anti-B Anti-H
1
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Tema 12
•Sistema A B O – determinación del grupo A B O
Tema 12
•Sistema A B O – determinación del grupo A B O
CON SANGRE TOTAL SOBRE PLACA Sangre total problema Sueros anti-A, anti-B y anti-AB Mezclar y observar la aglutinación o su ausencia
CON SANGRE TOTAL EN TUBO Suspensión de eritrocitos problema al 5% Sueros anti-A, anti-B y anti-AB Mezclar y centrifugar 1 min. a 1000 rpm y observar la aglutinación o su ausencia
CON SANGRE TOTAL SOBRE PLACA Sangre total problema Sueros anti-A, anti-B y anti-AB Mezclar y observar la aglutinación o su ausencia
CON SUERO SOBRE PLACA Eritrocitos A y B lavados (de donante) en solución salina al 10% Suero del paciente Mezclar y observar la aglutinación o su ausencia
CON SUERO EN TUBO Eritrocitos A y B lavados (de donante) en solución salina al 10% Suero del paciente Mezclar y centrifugar 1 min. a 1000 rpm y observar la aglutinación o su ausencia Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
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Sistema Rh Antígenos C, c, D, d (alelo silencioso), E, e
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Sistema Rh- Anticuerpos Aloanticuerpos inmunes Tipo IgG, generalmente
Fenotipo
Genotipo probable
Frecuencia genotípica %
CcDee
CDe / cde
34
No activan el complemento
CCDee
CDe / CDe
20
Los más importantes: anti-D (luego anti-c y anti-E)
cc”dd”ee
cde / cde (Rh-)
15
Transfusionales: En el 50% de casos de incompatibilidad para D (muy raros actualmente)
CcDEe
CDe / cDE
13
ccDEe
cDE / cde
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Otros
(Cde, cdE)
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Sensibilizantes (incompletos): detectables en el suero por el test de Coombs indirecto
Inmunización fetomaterna: 1 de cada 6 mujeres D(-) con 2 hijos D(+) (muy raro actualmente: inmunoglobulina anti-D preventiva administrada posparto) La incompatibilidad ABO protege de la sensibilización Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
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Ac anti-D, via i.m.
Primer embarazo 0-72 h postparto
Sistema Rh- determinacion del antigeno D (Rh)
METODO SOBRE PORTAOBJETOS
Destrucción de eritrocitos ⇒ No hay sensibilización
niño: Rh + madre: Rh -
Tema 12
Segon embaràs
Sangre total problema Suero anti-D Mezclar durante 2 min. y observar la aglutinación o su ausencia, a 40ºC
METODO EN TUBO Eritrocitos pasan a la circulación materna
Madre desarrolla anticuerpos anti-D
Anticuerpos anti-D de la madre pasan al hijo
Suspensión de eritrocitos problema al 2-5% Suero anti-D y albúmina bovina Mezclar y centifugar 1 min. a 1000 rpm y observar la aglutinación o su ausencia
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Tema 12
Tema 12
Prueba de coombs indirecta
Grup ABO y D Sistema de tipaje en tarjeta
Investigación en el suero de la existencia de anticuerpos sensibilizantes Se trata generalmente de anticuerpos inmunes o reactivos por previa transfusión o previo embarazo con feto que posee un antígeno del que carece la madre. Ejemplo: madre Rh negativa (D-) con un hijo D+.
Realización: Incubar eritrocitos de donante que contienen el antígeno y el suero problema durante 1 h a 37ºC lavar 3 veces los eritrocitos añadir una gota de suero antiglobulina humana y centrifugar 1 min. a 1000 rpm Ver si hay aglutinación Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
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Prueba de coombs indirecta
lavados
Tema 12
Prueba de coombs directa
Tema 12
Prueba de coombs directa
Investigación de anticuerpos sensibilizantes fijados a la membrana eritrocitaria: Anemia hemolítica auto o aloinmune.
Realización Lavar los eritrocitos cuatro veces con solución salina y preparar una suspensión al 2-5%. Una gota de suspensión de eritocitos + una gota de suero antiglobulina humana en un tubo Centrifugar 45 segundos a 1000 rpm Leer si hay aglutinación Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07
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Tema 12
Tema 12
Prueba de coombs directa
Aglutinación en tubo
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