Tema12- Fundamentos de Inmunohematologia

Descripción completa

Views 139 Downloads 46 File size 602KB

Report DMCA / Copyright

DOWNLOAD FILE

Recommend stories

Citation preview

Tema 12

Tema 12

Tema 12

Fundamentos de inmunohematología métodos generales de estudio Conceptos generales Antígenos eritrocitarios y anticuerpos de grupo sanguíneo: Tipos y características Anticuerpos naturales e inmunes: características Sistema A B O: Antígenos y anticuerpos

FUNDAMENTOS DE INMUNOHEMATOLOGÍA MÉTODOS GENERALES DE ESTUDIO

Determinación del grupo ABO

Sistema Rh: Antígenos y anticuerpos Determinación del antígeno D (Rh)

Bioquí Bioquímica Clí Clínica i Hematologia

Prueba de Coombs indirecta Prueba de Coombs directa

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 12

Tema 12

Conceptos generales

Anticuerpo de clase IgM

ANTIGENOS Toda sustancia que introducida en el organismo provoca una reacción inmune De tipo humoral: Formación de anticuerpos De tipo celular

ANTICUERPOS Proteínas plasmáticas (γ-globulinas) producidas como respuesta a la entrada de un antígeno. Clasificación por la cadena pesada:

IgG(γ), IgM(µ), IgA(α), IgD(δ), IgE(ε) Subclases según cadena ligera: κ, λ Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

1

Tema 12

Conceptos generales Grupo sanguíneo: Sistema bien definido de antígenos de los hematíes, controlado por un locus que posee un número variable de genes alélicos ABO, Rh Lewis, P, I, MNS, Kidd, Kell, Duffy, Lutheran

Grupo sanguíneo personal: fenotipo antigènico de los genes de grupo sanguíneo heredados. Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Antígenos eritrocitarios y anticuerpos de grupo sanguíneo: Tipos y características

Tema 12

ANTIGENOS ERITROCITARIOS Características del sistema antigénico Rh Segundo en importancia en la práctica transfusional Muy polimorfo, pero sólo 5 son comunes:DCcEe La herencia de los antígenos es mendeliana codominante.Tres alelos: D y d, C y c, E y e Los genes se localizan en el cromosoma 1 La designación Rh positivo indica la presencia del antígeno D : 85% de los individuos (42% homocigótico:DD, 58% heterocigótico: Dd) El antígeno D es muy inmunogénico y es causa relevante de la “enfermedad hemolítica del recién nacido” (EHRN) Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Antígenos eritrocitarios y anticuerpos de grupo sanguíneo: Tipos y características

Tema 12

ANTIGENOS ERITROCITARIOS Tipos

Antígenos ABO: Glucolípidos Sistema antigénico Rh: Lipoproteínas de la membrana Otros: Lewis, grupo P, grupo MMSs, Kell, Duffy, Lutheran,etc

Características antígenos ABO Antígenos A i B: Carbohidratos unidos a sustancia H La herencia de los antígenos A y B es mendeliana Determinan el grupo ABO y depende de la presencia de uno (homocigota) o dos (heterocigota) de los tres alelos: A, B y H cuyos genes están en el cromosoma 9p Genes codifiquen para glicosil transferasas Si se heredan transferasas tipo A i B > grupo AB Si se heredan transferasas tipo A> grupo A No se hereda ninguna transferasa > grupo O Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Antígenos eritrocitarios y anticuerpos de grupo sanguíneo: Tipos y características

Tema 12

ANTICUERPOS DE GRUPO SANGUÍNEO Tipos Heteroanticuerpos (de otras especies animales o vegetales) ALOANTICUERPOS (de otros individuos misma especie) Autoanticuerpos (contra los propios antígenos) Naturales (A,B,O) ( sin estímulo previo) Inmunes (Rh) ( ha habido estímulo antigénico) Regulares (presentes aunque no halla antígeno) Irregulares (no necesariamente existen en ausencia de antígeno)

Aglutinantes en solución salina (completos) Sensibilizantes (incompletos) Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

2

Tema 12

Anticuerpos naturales e inmunes: características

Tema 12

Anticuerpos naturales e inmunes: características

ANTICUERPOS DE GRUPO SANGUINEO Características

Inmunoglobulinas específicas de grupo sanguíneo Naturales:

Inmunoglobulina

Congénitas; sin estimulaciones antigénicas Todos los individuos tienen anticuerpos contra antígenos que no poseen (isoaglutininas): grupo A> anticuerpos B Dirigidos contra carbohidratos: por ejemplo sistema ABO IgM

Aglutinación eritrocitaria en solución salina

Anticuerpos frios Puedan activar el complemento >hemólisis intravascular aguda

Naturales

Inmunes

Generalmente IgM

Generalmente IgG

Importante

Escasa

4ºC

37ºC

La mayoría

Pocos

No

SI

Temperatura óptima

Inmunes o Reactivos:

Fijación complemento “in vitro” Pasan la barrera placentaria

Adquiridos; como reacción a transfusiones o embarazos Dirigidos contra proteinas ; Rh (D,C,c,E,e) IgM→IgG Anticuerpos calientes Hemólisis predominantemente extravascular Atraviesan la barrera placentaria

enfermedad hemolítica del recién nacido Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 12

Sistema A B O – antígenos A1, A2, B, O (alelo silencioso)

Grupo A

Grupo B

Grupo AB

Antigeno A

Antigeno B

Antigenos AB

Grupo 0 No antígenos

RBC

Plasma Anticuerpos Anti-B

Anticuerpos Anti-A

No anticuerpos

Anticuerpos AyB Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Sistema A B O – antígenos A1, A2, B, O (alelo silencioso)

Tema 12

Genotipos

Fenotipos

Frecuencia %

OO A1 A1 A1 A2 A1 O A2 A2 A2 O BB BO A1 B

O

53,5

A1 * A2 (2% con anti-A1)

34

B A1 B A2 B (25% con antiA2 B A1) * El 80% de los sujetos A son A1

9

3,5

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

3

Tema 12

Tema 12

Sistema A B O diferenciacion entre A1 y A2 aglutinacion por las lectinas

Sistema A B O – anticuerpos

Dolichos biflorus

Ulex europaeus

A1

+

-

A2

-

+

Aloanticuerpos naturales y generalmente regulares Los anticuerpos irregulares (anti-A1) interfieren las pruebas cruzadas pretransfusionales pero sin importancia clínica, excepto si actúan a 37ºC (hemolizantes) Predominantemente IgM Aglutinan en solución salina Temperatura óptima: 4ºC pero son activos y hemolizantes a 37ºC Inmunización fetomaterna rara (madre O que desarrolla anticuerpos IgG contra eritocitos A o B del feto)

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 12

Combinaciones de alelos que determinanTema 12 los fenotipos ABO y sus anticuerpos

Combinaciones de alelos que determinan los fenotipos ABO y sus anticuerpos Parejas de alelos

Fenotipos ABO

A,A

A

Isoaglutininas: anticuerpos Anti-B

A,O

A

Anti-B

A, B

AB

cap

B, B

B

Anti-A

B, O

B

Anti-A

O, O

O

Anti-A, Anti-B, Anti-AB Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Genotipo

Fenotipo

Antigenos de hematies

Anticuerpos séricos

AA A1A2 A1O A2A2 A2O BB BO A1B

A1

A1, H

Anti-B

A2

A2, H

B

B, H

Anti-B (Anti A1) Anti A, A1

A1B

A1, B, H

A2B

A2B

A2, B, H

(Anti-A1)

OO

O

H

hh

Oh

-

Anti-A, A1 Anti-B Anti-A, A1 Anti-B Anti-H

1

1

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

4

Tema 12

•Sistema A B O – determinación del grupo A B O

Tema 12

•Sistema A B O – determinación del grupo A B O

CON SANGRE TOTAL SOBRE PLACA Sangre total problema Sueros anti-A, anti-B y anti-AB Mezclar y observar la aglutinación o su ausencia

CON SANGRE TOTAL EN TUBO Suspensión de eritrocitos problema al 5% Sueros anti-A, anti-B y anti-AB Mezclar y centrifugar 1 min. a 1000 rpm y observar la aglutinación o su ausencia

CON SANGRE TOTAL SOBRE PLACA Sangre total problema Sueros anti-A, anti-B y anti-AB Mezclar y observar la aglutinación o su ausencia

CON SUERO SOBRE PLACA Eritrocitos A y B lavados (de donante) en solución salina al 10% Suero del paciente Mezclar y observar la aglutinación o su ausencia

CON SUERO EN TUBO Eritrocitos A y B lavados (de donante) en solución salina al 10% Suero del paciente Mezclar y centrifugar 1 min. a 1000 rpm y observar la aglutinación o su ausencia Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 12

Sistema Rh Antígenos C, c, D, d (alelo silencioso), E, e

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 12

Sistema Rh- Anticuerpos Aloanticuerpos inmunes Tipo IgG, generalmente

Fenotipo

Genotipo probable

Frecuencia genotípica %

CcDee

CDe / cde

34

No activan el complemento

CCDee

CDe / CDe

20

Los más importantes: anti-D (luego anti-c y anti-E)

cc”dd”ee

cde / cde (Rh-)

15

Transfusionales: En el 50% de casos de incompatibilidad para D (muy raros actualmente)

CcDEe

CDe / cDE

13

ccDEe

cDE / cde

12

Otros

(Cde, cdE)

6 Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Sensibilizantes (incompletos): detectables en el suero por el test de Coombs indirecto

Inmunización fetomaterna: 1 de cada 6 mujeres D(-) con 2 hijos D(+) (muy raro actualmente: inmunoglobulina anti-D preventiva administrada posparto) La incompatibilidad ABO protege de la sensibilización Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

5

Tema 12

Ac anti-D, via i.m.

Primer embarazo 0-72 h postparto

Sistema Rh- determinacion del antigeno D (Rh)

METODO SOBRE PORTAOBJETOS

Destrucción de eritrocitos ⇒ No hay sensibilización

niño: Rh + madre: Rh -

Tema 12

Segon embaràs

Sangre total problema Suero anti-D Mezclar durante 2 min. y observar la aglutinación o su ausencia, a 40ºC

METODO EN TUBO Eritrocitos pasan a la circulación materna

Madre desarrolla anticuerpos anti-D

Anticuerpos anti-D de la madre pasan al hijo

Suspensión de eritrocitos problema al 2-5% Suero anti-D y albúmina bovina Mezclar y centifugar 1 min. a 1000 rpm y observar la aglutinación o su ausencia

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Tema 12

Tema 12

Prueba de coombs indirecta

Grup ABO y D Sistema de tipaje en tarjeta

Investigación en el suero de la existencia de anticuerpos sensibilizantes Se trata generalmente de anticuerpos inmunes o reactivos por previa transfusión o previo embarazo con feto que posee un antígeno del que carece la madre. Ejemplo: madre Rh negativa (D-) con un hijo D+.

Realización: Incubar eritrocitos de donante que contienen el antígeno y el suero problema durante 1 h a 37ºC lavar 3 veces los eritrocitos añadir una gota de suero antiglobulina humana y centrifugar 1 min. a 1000 rpm Ver si hay aglutinación Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

6

Tema 12

Tema 12

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Prueba de coombs indirecta

lavados

Tema 12

Prueba de coombs directa

Tema 12

Prueba de coombs directa

Investigación de anticuerpos sensibilizantes fijados a la membrana eritrocitaria: Anemia hemolítica auto o aloinmune.

Realización Lavar los eritrocitos cuatro veces con solución salina y preparar una suspensión al 2-5%. Una gota de suspensión de eritocitos + una gota de suero antiglobulina humana en un tubo Centrifugar 45 segundos a 1000 rpm Leer si hay aglutinación Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

7

Tema 12

Tema 12

Prueba de coombs directa

Aglutinación en tubo

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

Bioquímica Clínica i Hematologia – curs 2006-07

8