SEDIMENTO URINARIO Y UROCULTIVO INTRODUCCIÓN: El estudio del sedimento urinario es un método diagnóstico muy simple en e
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SEDIMENTO URINARIO Y UROCULTIVO INTRODUCCIÓN: El estudio del sedimento urinario es un método diagnóstico muy simple en esta época, en la cual las técnicas de estudios complementarios son tan complejas. Sin embargo, éste representa un medio diagnóstico auxiliar muy valioso, no sólo por su sencillez, sino también por su rentabilidad. Pero, a pesar de su simplicidad, este método diagnóstico sólo puede ser aprovechado por el médico que tiene cierta experiencia en relacionar el cuadro clínico con los datos obtenidos a través del sedimento, y es muchas veces una tarea difícil establecer una correcta correlación en la práctica diaria. Cuando se estudia el sedimento urinario con el microscopio, se reconocen numerosas estructuras con una forma muy diversa. En primer lugar, se pueden observar células de la vía urinaria descendente y de los riñones, así como sangre, sales urinarias precipitadas con forma cristalina o cilindros formados en los canalículos renales que aparecen como bandas anchas y estrechas en el campo visual. Al análisis óptico de la orina se agrega su examen químico a través de las tiras reactivas, las cuales logran evidenciar la presencia de proteínas, hematíes, leucocitos, nitritos, así como aportan información acerca del pH y la densidad. Sin embargo, el médico debe conocer las limitaciones y ventajas de las tiras reactivas y del estudio del sedimento. Varios miembros de las entero bacterias pueden aislarse de la orina en el curso de infecciones del aparato urinario o urogenital, como también en otros tipos de afecciones. La orina vesical normalmente no contiene microorganismos. Sin embargo, los primeros 10 a 15 ml. de orina emitidos por personas normales de cualquier edad o sexo, siempre presentan bacterias, las que proceden de la flora corriente de la uretra anterior, prepucio, región vulvovaginal o de contaminación fecal. La flora de estas localizaciones es variada y está constituida por estafilococos coagulasa-positivo y negativos, estreptococos diversos, bacilos difteromorfos, entero bacterias, lactobacilos, micoplasmas, bacterias anaerobias, levaduras y muchos microorganismos. En la presencia de esta flora influyen localización anatómica, sexo, edad, hábitos de higiene y factores patológicos propios del huésped. En la etiología de las infecciones urinarias predominan los bacilos gramnegativos. Los procesos agudos y crónicos son provocados por E. coli y por especies de los géneros Enterobacter, Proteus, Citrobacter, Pseudomonas, Serratia, etc. De estos agentes, E. coli se aísla en 80% de los casos. Ps.aeruginosa y S.marcescens se identifican en pacientes hospitalizados, muy debilitados o sometidos a instrumentación repetida. Con bastante menor frecuencia desempeña un papel causal Streptococcus faecalis (enterococo) y excepcionalmente los estafilococos. El examen microbiológico de una muestra de orina se denomina Urocultivo. Éste se ha de hacer desde un punto cuantitativo y cualitativo.
OBJETIVOS:
Realizar el examen microscópico para
identificar los
elementos que se encuentran en el
sedimento de
la orina. Obtener
los
elementos de
correcta
utilización del
la
conocimientos
orina
mediante
la
de
microscopio. Poder identificar las diferentes células que se encuentran en el sedimento urinario. Conocer las aplicaciones del Urocultivo. Adquirir conocimientos sobre la siembra en Urocultivo. Identificar las bacterias que crecen en el Urocultivo. Conocer las enfermedades que diagnostica el Urocultivo.
CONCEPTOS: SEDIMENTO DE ORINA: sirve para determinar la presencia de elementos como células o cristales en la orina. Se suele realizar observando una muestra de orina centrifugada al microscopio. Sin embargo, actualmente existen aparatos que dan automáticamente el resultado del sedimento de orina. Éste suele estar listo en unos pocos minutos. EL CULTIVO DE LA ORINA O UROCULTIVO: es un tipo de análisis totalmente diferente a los anteriores. No se trata de mirar las sustancias excretadas sino de saber si existe o no infección de orina. En caso afirmativo, se trata de reconocer con exactitud el germen responsable (identificación microbiológica) y cuál es el antibiótico más efectivo (antibiograma). Esta prueba la realizan los especialistas en Microbiología y el cultivo se basa en una muestra simple de orina. Ésta se deposita en un medio fértil (por eso, se llama cultivo) donde comienzan a crecer las bacterias. Una vez han crecido se puede identificar el germen y se puede ver qué antibióticos son capaces de matarlo. SEDIMENTO URINARIO El examen del sedimento urinario aporta datos de gran valor diagnóstico en casos de infección del tracto urinario o bacteriuria asintomática. Los hallazgos de células, cilindros y cristales nos pueden indicar patologías dependiendo de su tipo y cantidad. PREPARACIÓN DEL SEDIMENTO Y USO DEL MICROSCOPIO: MATERIALES · · ·
Microscopio Centrífuga Tubo
· · · · ·
Cubreobjetos Portaobjeto Pipeta de Pasteur (Chupas) Tirillas para leer orinas Muestra de orina de 24 horas
El examen del microscopio debe hacerse en una muestra centrifugada (si el volumen de la muestra es demasiado pequeña como para centrifugarlo, por ejemplo: sólo unas gotas, aquellas se examinan directamente, pero si señala en el informe que los resultados se obtuvieron de una muestra sin centrifugar). Se mezclan las muestras y se colocan aproximadamente 10 -15 ml. de orina en un tubo de centrifugación. Se centrifuga a 2.500 rpm durante unos minutos. En un intento de estandarizar el examen microscópico, el laboratorio debería adoptar una velocidad, un tiempo y una cantidad de orina determinadas para la centrifugación. Se elimina el líquido sobrenadante (este puede usarse para pruebas confirmatorias de proteínas). Se dan golpecitos en la parte inferior del tubo para mezclar el sedimento. Se coloca una gota de éste en un portaobjeto limpio o en una cámara de conteo. Se cubre con un cubre objeto y se examina inmediatamente. Se efectúa una cuantificación mediante la observación de todos los campos, para ello se utilizará el objetivo de 40x y se expresa el número de elementos por campo de alta resolución (AP). Los elementos son células epiteliales: altas, bajas y de transición. Leucocitos dispersos y en acúmulos. Hematíes altos (a contactos o dimorfor), bajos y los fatasmas. Cuerpos Ovales. Las levaduras, Pseudomicelios, moco, bacterias y los diversos tipos de cristales (se debe antes confirmar su composición química), se observan en alto poder y se informa por cruces. Para certificar los cilindros se usa el objetivo de 10x y se informa el número por campo de bajo poder (BP). ELEMENTOS CELULARES DEL SEDIMENTO: Entre las células que pueden estar presentes en la orina se encuentran eritrocitos (hematíes o glóbulos rojos), leucocitos (glóbulos blancos) y células epiteliales provenientes de cualquier punto del tracto urinario, desde los túbulos hasta la uretra, o como contaminantes procedentes de vagina o vulva. Eritrocitos: Los hematíes presentes en la orina pueden provenir de cualquier punto del tracto urinario, desde el glomérulo de hasta el meato urinario, y en la mujer constituye a veces contaminación menstrual. Cuando la muestra es fresca los hematíes presentan aspecto normal. En orinas diluidas o hipotónicas, los hematíes se hinchan y pueden lisarse, liberando de este modo su contenido de hemoglobina en la orina. Las células lisadas que se forman como corpúsculos fantasmas o eritrocitos acrómicos, son círculos tenues incoloro, también se produce lisis en orinas alcalinas. En orina hipertónicas hay cremación de los hematíes.
Leucocitos: Los glóbulos blancos pueden entrar en cualquier punto del tracto urinario desde el glomérulo hasta la uretra. En promedio la orina normal puede contener hasta 2 glóbulos blancos por campos. Los leucocitos se encogen en orina hipertónica y se hinchan o se lisan rápidamente en orinas hipotónicas o alcalinas. Los leucocitos son atraídos hacia las áreas inflamadas y debido a sus propiedades ameboides, pueden entrar en zonas adyacentes al sitio de la inflamación. A veces se observa piuria, en enfermedades como apendicitis y pancreatitis. También se observa en patologías no infecciosas, como en la glomerulonefritis aguda, nefritis lúpica, acidosis tubularrenal, deshidratación, fiebre, stress y en la irritación no infecciosa de uréter, vejiga o uretra. Si se encuentran acúmulos, es sugestiva de infección aguda como pielonefritis, cistitis, uretritis. Células Epiteliales: Las células epiteliales presentes en la orina pueden provenir de cualquier sitio del tracto urinario, desde los túbulos contorneados proximales hasta la uretra, o de la vagina. Normalmente pueden encontrarse algunas células epiteliales en la orina como consecuencia del desprendimiento normal de las células viejas. Un incremento marcado indica inflamación de la porción del tracto urinario de donde proceden. En caso en que la distinción es posible; pueden reconocerse tres tipos fundamentales de células epiteliales, tubulares, de transición y pavimentosas. Cristales: Por lo general no se encuentran cristales en la orina, recién emitida, pero aparecen dejándola reposar durante un tiempo. Cuando la orina está sobresaturada con un compuesto cristalino particular, o cuando las propiedades de sensibilidad de éste se encuentran alteradas, el resultado es la formación de cristales. En algunos casos esta precipitación se produce en el riñón o en el tracto urinario y puede dar lugar a la formación de cálculos urinarios. Muchos de los cristales que se encuentran en la orina poseen escasa significación clínica, excepto en caso de trastornos metabólicos, de formación de cálculos y en aquellos que sea necesario regular la medicación. Entre los cristales de mayor importancia se encuentran la cistina, la tirosina, la leucina, el colesterol y las sulfamidas. La formación de cristales tiende a ser dependientes del pH. Orinas Acidas: Los cristales que se encuentran comúnmente en orinas acidas son el ácido úrico, el oxalato de calcio y los uratos amorfos. Con menos frecuencia hay cristales de sulfato de calcio, uratos de sodio, ácido hipúrico, cistina, leucina, tirosina, colesterol, sulfamida.
Cristales de Ácido Úrico: La presencia de cristales de ácido úrico en la orina pueden constituir un hecho anormal. No necesariamente indican un estado patológico ni tampoco significa que el contenido de ácido úrico en la orina se encuentre definitivamente aumentado. Los estados patológicos en los cuales se observan cristales de ácido úrico en la orina son la gota, el metabolismo de las purinas aumentados, enfermedades febriles agudas, nefritis crónicas. Cristales de Oxalato De Calcio: Estos cristales se encuentran con frecuencia en orinas acidas y neutras, y en ocasiones también en orina alcalinas. Estas pueden existir normalmente en la orina, en especial después de ingerir diferentes alimentos ricos en oxalatos, como tomates, ajo, naranja y espárragos. Cantidades elevadas de oxalato de calcio, en especial si están presentes en orina recién emitida sugieren la posibilidad de cálculos de oxalato. Los demás estados patológicos en los que puede existir Oxalato de calcio en la orina en cantidad aumentada son las intoxicaciones con etilenglicol, la diabetes mellitus, la enfermedad hepática y la enfermedad renal crónica grave. Después de la ingesta de altas dosis de vitamina C, pueden verse estos cristales en la orina. Cristales Uratos Amorfos: Hallados en orinas ácidas. Carecen de significación Clínica. Cristales Acido Hipúrico: Se observa con escasa frecuencia y prácticamente carecen de significación clínica. Cristales Uratos de Sodio: Carecen de significación clínica. Cristales Sulfatos de Calcio: Es raro observarlos en orina, carecen de significación clínica. Cristales de Cistina: La presencia de cristales de cistinas siempre tiene importancia. Aparecen en pacientes con cistinosis o con cistinuria congénitas y pueden formar cálculos. Se encuentran en orinas de paciente con la enfermedad Jarabe en Arce, con síndrome de Smith y Strang y con enfermedades hepáticas aparecen con frecuencia cristales de Leucina y de Tirosina. Cristal de Tirosina: Aparece en enfermedades hepáticas graves en la Tirosina y en el Síndrome de Smith y Strang. Cristales de Colesterol: La presencia de estos es un índice de una excesiva destrucción tisular. Se encuentra en cuadros nefríticos y nefróticos y también en caso quiluria (se produce como consecuencia de la obstrucción a nivel torácico o abdominal del drenaje linfático en el interior de la pelvis renal o en el tracto urinario.) Orinas Alcalinas: Entre los cristales que pueden encontrarse en orina alcalinas se incluyen los siguientes fosfatos triples, fosfatos amorfos, carbonatos de calcio, fosfato de calcio y biurato de amonio. Fosfato Triple: Pueden existir en orinas neutras y en alcalinas. A menudo se encuentra en orinas normales, pero pueden también formar cálculos urinarios. Pueden aparecer en los siguiente procesos patológicos: pielitis crónica, cistitis crónica, hipertrofia prostática y en los casos en los cuales existe retención vesical de la orina.
Cristales Fosfatos Amorfos: Se encuentra presente en retención urinaria, riñón poliquístico, glomerulonefritis, nefrosis. Cristales de Carbonato de Calcio: Carecen significación clínica. Cristales de Fosfato de Calcio: Pueden estar presentes en orinas normales, pero también forman cálculos. Cristales de Biuratos de Amonio: Se pueden encontrar en orinas neutras, alcalinas y ocasionalmente ácidos. Constituyen una anormalidad sólo si se encuentran en orinas recién emitidas
Cilindros: Los cilindros urinarios se forman en la luz de los túbulos del riñón. Reciben ese nombre porque son moldeados en los túbulos pueden formarse por precipitación o gelificación de la mucoproteína de Tamm-Horsfall. Por agrupamiento de células o de otros materiales dentro de una matriz proteica, por adherencia de células o de material a la matriz. Los túbulos renales secretan una microproteína denominada proteína de Tamm-Horsfall, que según se
cree, forma la matriz de todos los cilindros. Los factores que intervienen en la formación de los cilindros son las siguientes estasis urinarias, acidez incrementada, elevada concentración de solutos. Entre los cilindros tenemos: - Cilindros hialinos, leucocitarios, eritrocitarios, cilindros granulosos, cilindro de células epiteliales, cilindros céreos, cilindros mixtos.
ESTRUCTURAS DIVERSAS Bacterias: Normalmente en la orina a nivel renal y vesical no existen bacterias, pero pueden contaminarse por bacterias presentes en la uretra, en la vagina o procedentes de fuentes externas. Cuando una muestra de orina fresca correctamente recolectada contiene gran número de bacterias, y en especial cuando esto se acompaña de muchos leucocitos, por lo general es índice de infección del tracto urinario. Se debe reportar en cruces. Hongos: Es posible encontrar hongos en infecciones del tracto urinario, sobre todo en pacientes diabéticos. Pueden estar presentes también por contaminación cutánea o vaginal. Espermatozoides: Pueden existir espermatozoides en orinas masculinas después de convulsiones epiléptica, poluciones nocturnas. Enfermedades de los órganos genitales y en la espermatorrea. Pueden observarse en orina de ambos sexos después del coito. Filamentos de Moco: Existe en orina normal en pequeña cantidad, pero pueden ser abundantes en casos de inflamación o irritación del tracto urinario.
Cuerpo Ovales Grasos: Se definen como células del túbulo renal que contiene gotitas de grasa altamente refringente. Los cuerpos ovales grasos pueden ser también macrófagos o leucocitos polimorfonucleares que han incorporados lípidos o células degeneradas en su interior o que han sufrido degeneración grasa. Puede haber grasa en la orina como consecuencia de la degeneración grasa de los túbulos. Esto se observa con frecuencia en el síndrome nefrótico, y también puede verse en los siguientes cuadros patológicos: Diabetes mellitus, eclampsia, intoxicación renal, glomerulonefritis crónica, nefrosis lipoidea, embolia grasa y después de lesiones superficiales extensas con aplastamiento de la grasa subcutánea También puede aparecer lipuria después de fracturas múltiples por liberación de grasa de la médula ósea en la circulación con filtración posterior a través de los glomérulos. Artificios: Una variedad de objetos extraños pueden entrar en la muestra de orina durante la recolección al transportarla, mientras se realiza el estudio o estando sobre el portaobjeto. Es importante pode conocer estos objetos como estructuras extrañas.
UROCULTIVO El examen de Urocultivo es el cultivo de la orina que permite investigar la presencia de bacterias en la orina, su cantidad, especie, y sensibilidad a los antibióticos. El Urocultivo se basa en la identificación del número y de los tipos de bacterias presentes en la orina. Es necesario que el método de recogida sea el adecuado siguiendo unos protocolos de higiene evitando así posibles contaminaciones de la muestra. Para la identificación del número de bacterias, realizaremos un recuento bacteriano (Hygicult TPC) y para la identificación de los tipos de bacterias presentes en la orina y sus patologías, se realizara una siembra en medios de cultivo diferentes con la técnica de siembra comúnmente utilizado en el Urocultivo, según el tipo de microorganismo comúnmente encontrado en la muestra. Los diferentes cultivos que vamos a utilizar serán:
MATERIALES: · · · · · · · · · · · · · ·
Asas de siembra desechables Portaobjetos Placas de Petri Mechero Pinzas Papel platina Papel de filtro Vasos de muestra Pipeta Microscopio Tubos de ensayo Gradilla Jeringa Suero fisiológico
Reactivos: · · · ·
Urin system plus (kit de recuento, identificación y sensibilidad) Hygicult tpc (recuento) Tiras reactivas Kit de gram
Muestra de Orina Recogida de muestra: Se utilizará un recipiente de muestra desechable. La orina que se recogerá será la primera orina de la mañana, por ser una orina más concentrada. Para su recogida se lavara cuidadosamente la zona genital, con agua y jabón y se secara con una gasa estéril o una toalla limpia. Hay que recoger la porción de orina que corresponda a la mitad de la micción, desechando la porción inicial y final de la micción y recogiendo el resto en el frasco estéril. Por último se tapa bien el frasco y se procederá a su análisis. AGAR NUTRITIVO: Es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. El Agar nutritivo es un medio de cultivo usado normalmente como rutina para todo tipo de bacteria. Es muy útil porque permanece solido incluso a relativas altas temperaturas. Además, el crecimiento bacteriano en este agar lo hace en la superficie, por lo que se distinguen mejor las colonias pequeñas. En un caldo de nutrientes, la bacteria crece en
el líquido, y aparece como una sustancia espesa, con colonias difícilmente observables. El agar nutritivo contiene normalmente (w/v). Fundamento: Por las características de sus componentes es un medio usado para el cultivo de microorganismos poco exigentes en sus requerimientos nutricionales. No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano. La pluripeptona es la fuente de carbono y nitrógeno para el desarrollo bacteriano. El agregado de cloruro de sodio permite el enriquecimiento con sangre de carnero u otras sustancias para facilitar el cultivo de microorganismos exigentes. Incubación: En aerobiosis, a 35-37 ºC durante 24 horas. Medio preparado: ámbar claro a medio ligeramente opalescente. Fórmula (en gramos por litro) Pluripeptona
5.0
Extracto de carne
3.0
Cloruro de sodio
8.0
Agar
15.0
Instrucciones Suspender 31 g de polvo por litro de agua destilada. Mezclar y dejar reposar 5 minutos. Calentar suavemente agitando y hervir 1 o 2 minutos hasta su disolución. Distribuir y esterilizar a 121°C durante 15 minutos.
pH final: 7.3 ± 0.2
AGAR CLED= AGAR CISTINA LACTOSA DEFICIENTE EN ELECTROLITOS: Es un medio de cultivo diferencial para aislar y contar las bacterias presentes en la orina. También se utiliza para la diferenciación de bacterias fermentadoras de la lactosa o las no fermentadoras. Es comúnmente utilizado para el crecimiento de enterobacterias y bacilos Gram – presentes en las orinas patológicas. • Si crecen colonias amarillas el microorganismo es lactosa positivo • Si crecen colonias azules el microorganismo es lactosa negativo Fundamento: Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Azul de Bromotimol, Si el microorganismo fermenta la lactosa el pH del medio disminuye y el indicador vira a amarillo.
Incubación: Durante 24 a 48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis. Medio preparado: verde. Fórmula (en gramos por litro) Peptona
4.0
Extracto de carne
3.0
L-cistina
0.128
Tripteína
4.0
Azul de bromotimol
0.02
Lactosa
10.0
Agar
15.0
Instrucciones Suspender 36,2 g del polvo por litro de agua destilada. Dejar reposar 5 minutos y calentar suavemente agitando por rotación. Hervir 1 o 2 minutos hasta su disolución total. Distribuir y esterilizar en autoclave durante 15 minutos a 118-121°C.
pH final: 7.3 ± 0.2
AGAR MACCONKEY: Es un medio utilizado para el aislamiento e identificación de enterobacterias. Es un medio inhibidor de los gérmenes Gram positivos por su contenido en cristal violeta y selectivo para enterobacterias por su contenido en sales biliares. En su composición lleva un azúcar (lactosa) y un indicador (rojo de metilo) que lo convierten en un medio diferencial. Los gérmenes que fermenten la lactosa producen una acidificación del medio que hacen aparecer de color rojo fuerte a las colonias resultantes. Las colonias lactosa negativas serán incoloras, apareciendo del mismo color que el medio subyacente (naranja). • Si crecen colonias rosas-rojas el microorganismo es lactosa positivo • Si crecen colonias incoloras el microorganismo es lactosa negativo
Fundamento: Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Rojo Neutro. Si el microorganismo fermenta la lactosa el pH del medio disminuye y el indicador vira a rosa-rojo. Incubación: Durante 18-48 horas, a 35-37 ºC, en atmósfera aeróbica Medio preparado: rojo púrpura Fórmula (en gramos por litro) Peptona Pluripeptona Lactosa Mezcla de sales biliares Cloruro de sodio
17.0 3.0 10.0 1.5
Suspender 50 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta uniformar. Calentar suavemente y hervir 1 a 2 minutos hasta disolver. Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.
5.0
Agar
13.5
Rojo neutro
0.03
Cristal violeta
Instrucciones
0.001 pH final: 7.1 ± 0.2
AGAR S.S.: Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp. y de algunas especies de Shigella spp. A partir de heces, alimentos y otros materiales en los cuales se sospeche su presencia. Fundamento: Es un medio de cultivo selectivo y diferencial.
La selectividad, está dada por la sales biliares y el verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Es diferencial debido a la fermentación de la lactosa, y a la formación de ácido sulfhídrico a partir del tiosulfato de sodio. Los pocos microorganismos fermentadores de lactosa capaces de desarrollar, acidifican el medio haciendo virar al rojo el indicador de pH, obteniéndose colonias rosadas o rojas sobre un fondo rojizo. Salmonella, Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en el medio de cultivo, y producen colonias transparentes. La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro negro debido a la formación de sulfuro de hierro. Para aumentar la selectividad, se recomienda incubar previamente la muestra en Selenito caldo (B02-120-05). Incubación: Durante24-48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis. Medio preparado: rojo naranja. Fórmula (en gramos por litro)
Instrucciones
Pluripeptona
5.0
Extracto de carne
5.0
Suspender 60 g del polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar hasta homogeneizar. Calentar a ebullición durante 2 o 3 minutos. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45-50°C y distribuir unos 20 ml por placa. Secar la superficie del medio unos minutos en la estufa.
Lactosa
10.0
Mezcla de sales biliares
8.5
Citrato de sodio
8.5
Tiosulfato de sodio
8.5
Citrato férrico
1.0
Agar Verde brillante
Rojo neutro
13.5 0.0003 3 0.025 pH final: 7.0 ± 0.2
AGAR HEKTOEN: Es un medio más diferencial y menos selectivo que el agar SS. Se utiliza para facilitar el aislamiento de las enterobacterias. La presencia de tres azúcares (lactosa, sacarosa y salicilina ) permiten ampliar el poder diferencial de este medio. Este medio es capaz de detectar los gérmenes formadores de SH2, igual que el SS. Las cualidades del agar Hektoen se deben a su riqueza en peptonas y azúcares, que neutralizan el efecto inhibidor de las sales biliares respecto a ciertos gérmenes de cultivo delicado (Shigella en particular).El crecimiento de Salmonella es excelente, igual que el de Shigella, obteniéndose colonias más numerosas y voluminosas que en los medios selectivos usuales. La inhibición tiene lugar, esencialmente, sobre E. coli y en menor medida sobre Proteus y Citrobacter. Hay que señalar que el vibrión colérico crece bien en este medio. Fundamento: El medio de cultivo contiene sales biliares que inhiben el desarrollo de la flora acompañante, y 2 sistemas indicadores: (i) azul de bromotimol y fucsina ácida como indicadores de la fermentación de carbohidratos, y (ii) el citrato de hierro como un indicador de la formación de SH2 a partir del tiosulfato. El medio de cultivo, permite una buena diferenciación de las colonias e inhibe el desarrollo de algunos coliformes y otras bacterias no fermentadoras de lactosa, facilitando así la identificación de Salmonella y Shigella a partir de la muestra. Incubación: De 18 a 24 horas a 35-37 °C en aerobiosis. Para diferenciar mejor entre Salmonella y Shigella spp., incubar 48 horas. Medio preparado: color verde. Fórmula (en gramos por litro) Proteosa peptona
12.0
Extracto de levadura
3.0
Sales biliares
9.0
Instrucciones Suspender 76 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar reposar de 10 a 15 minutos. Calentar y hervir hasta lograr una disolución
Lactosa
12.0
Sacarosa
12.0
Salicina
2.0
Cloruro de sodio
5.0
Tiosulfato de sodio
5.0
Citrato de hierro y amonio Agar Azul de bromotimol Fucsina ácida
completa. NO ESTERILIZAR EN AUTOCLAVE. Enfriar a 45°C y distribuir en cajas de Petri.
1.5
14.0 0.065 0.1 pH final: 7.5 ± 0.2
CPS3: Se utiliza para el aislamiento, recuento e identificación directa de Escherichia coli, Proteus y Enterococcus. Medio cromogénico desarrollado por Biomerieux, que permite la identificación de E. coli, P. mirabilisy E. faecalis, con la simple visualización del cambio de color de la colonia sobre el medio (rojo burdeos, azulo marrón). La identificación solo requiere la adición de un reactivo para confirmar o descartar la especie sospechada. Otros microorganismos diferentes requieren los sistemas de identificación habituales (API, p. ej) Granada, Islam o New GBS: Medios utilizados para detección de Streptococcus agalactiae, mediante la utilización de un sustrato cromogénico específico de este microorganismo.
AGAR MUELLER-HINTON: El Agar Mueller Hinton es un medio utilizado para realizar las pruebas de susceptibilidad antimicrobiana en microorganismos aeróbicos por el método de Bauer-Kirby. Este medio también es conocido como Agar M-H. Bauer, Kirby, Sherris y Tuck recomendaron el Agar de Mueler Hinton para llevar a cabo las pruebas de susceptibilidad a antibióticos, utilizando un solo disco impregnado con una alta concentración de un antimicrobiano. Fundamento: El Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), ex National Committee for Clinical Laboratory Standards (NCCLS), recomendó su uso en forma rutinaria para la realización del antibiograma en medio sólido, debido a una serie de factores que se detallan a continuación: presenta buena reproducibilidad lote a lote en las pruebas de sensibilidad, su contenido en inhibidores de sulfonamidas, trimetoprima y tetraciclina es bajo, la mayoría de los patógenos crece satisfactoriamente y una gran cantidad de datos han sido evaluados y avalados usando este medio de cultivo. Cuando se suplementa con sangre de carnero al 5%, es útil para realizar las pruebas de sensibilidad a los antimicrobianos en especies de estreptococos. Incubación: 2-30° C. Medio preparado: ámbar.
Fórmula (en gramos por litro) Infusión de carne
300.0
Peptona ácida de caseína
17.5
Almidón Agar
1.5 15.0
Instrucciones Suspender 37 g del medio deshidratado en un litro de agua destilada. Dejar embeber de 10 a 15 minutos. Calentar con agitación frecuente y hervir durante 1 minuto. Esterilizar a 121°C durante 15 minutos. Enfriar a 45°50°C y distribuir a cajas de Petri (o agregar los suplementos que se desee) hasta un nivel de 4 mm sobre una superficie horizontal (25-30 ml en placas de 9 cm de
diámetro). pH final: 7.3 ± 0.1
AGAR MANITOL SALADO: Es un medio de cultivo que se utiliza normalmente en microbiología. Permite el crecimiento de un determinado grupo de bacterias mientras que inhibe el crecimiento de otras. Este medio es importante en el laboratorio clínico debido a que es capaz de distinguir los microorganismos patogénicos en un corto periodo de tiempo. Contiene una alta concentración (~7.5%-10%) de sal (NaCl), haciéndolo selectivo para Staphylococci (y 'Micrococcaceae) debido a que el nivel de NaCl es inhibitorio para la mayoría de las bacterias.2 Además es contiene manitol y un indicador de Ph; rojo de fenol. • Si crecen colonias amarillas el microorganismo es manitol positivo • Si crecen colonias incoloras el microorganismo es manitol negativo Fundamento: Este medio de cultivo tiene un indicador de pH que es Rojo Fenol. Si el microorganismo fermenta el manitol el pH del medio disminuye y el indicador vira a amarillo. Incubación: De rutina: durante 18-24 horas a 35-37 °C, en aerobiosis. La American Public Health Association (A.P.H.A) recomienda la incubación durante 3 días a 32 °C, en aerobiosis. Medio preparado: rojo
Fórmula (en gramos por litro) Extracto de carne
1.0
Pluripeptona
10.0
d-Manitol
10.0
Cloruro de sodio
75.0
Agar
15.0
Rojo de fenol
Instrucciones Suspender 111 g de polvo por litro de agua destilada. Reposar 5 minutos y mezclar calentando a ebullición durante 1 o 2 minutos. Distribuir y esterilizar en autoclave a 118-121°C durante 15 minutos.
0.025 pH final: 7.4 ± 0.2
AGAR BAIRD-PARKER: Permite el crecimiento de estafilococos coagulasa positivos, a la vez que los diferencia del resto. Fundamento: En el medio de cultivo preparado y completo la peptona y el extracto de carne constituyen la fuente de carbono y nitrógeno, el extracto de levadura aporta vitaminas del complejo B, la glicina y el piruvato estimulan el crecimiento de los estafilococos. Este medio de cultivo es selectivo y diferencial debido al telurito de potasio y al cloruro de litio, los cuales inhiben el desarrollo de la flora acompañante. La yema de huevo permite demostrar la actividad lecitinásica. Los estafilococos coagulasa positiva reducen el telurito a teluro y originan colonias de color grisáceo-negro, y dan reacción sobre la yema de huevo produciendo alrededor de la colonia una zona opaca que a menudo tiene una zona clara más externa. Se pueden encontrar cepas no lipolíticas, que presentan igual características de colonias pero sin la zona opaca y clara.
Se debe confirmar la presencia de S. aureus mediante pruebas bioquímicas. Incubación: 24-48 horas a 35-37 °C, en aerobiosis. Medio preparado: ámbar claro opalescente (sin el agregado de yema de huevo). Fórmula (en gramos por litro) Peptona de caseína
10.0
Extracto de carne
5.0
Extracto de levadura
1.0
Cloruro de litio
5.0
Agar
17.0
Glicina
12.0
Piruvato de sodio
10.0
Instrucciones Suspender 60 g del medio deshidratado en 940ml de agua destilada. Dejar en reposo 5 a 10 minutos. Calentar agitando frecuentemente y hervir durante 1 minuto. Distribuir y esterilizar en autoclave a 121°C (15 libras) durante 15 minutos. Enfriar a 45°50°C y agregar 50 ml de la emulsión de yema de huevo y 10ml de la solución de telurito (Código B03-601-61). Homogeneizar y distribuir en cajas de Petri.
pH final: 6.8 ± 0.2
AGAR KLIGLER: El agar medio de Kligler (TSI, Triple Sugar Iron) es un medio diferencial que puede ayudarnos a distinguir entre especies de enterobacterias de acuerdo a su capacidad (o falta de ella) para: a. Metabolizar lactosa, sacarosa o ambas b. Producir acido mediante fermentación c. Producir gas durante la fermentación d. Generar ácido sulfhídrico
Fundamento: En el medio de cultivo, la peptona de carne y la tripteína, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa y la glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la producción de ácido sulfhídrico, el citrato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe 3+, los cuales se combinan con el ácido sulfhídrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmótico. El agar es el agente solidificante. Por fermentación de azúcares, se producen ácidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio ácido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrógeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el típico sulfuro de hierro de color negro. Incubación: A 35-37°C durante 24 horas, en aerobiosis. Medio preparado: rojo Fórmula (en gramos por litro) Peptona de carne
13.0
Cloruro de sodio
5.0
Lactosa
10.0
Tripteina
10.0
Glucosa
1.0
Citrato de hierro y amonio
0.5
Tiosulfato de sodio
0.3
Rojo de fenol Agar
Instrucciones Suspender 54.8 g del polvo por litro de agua destilada. Mezclar bien y calentar con agitación frecuente, hervir 1 o 2 minutos hasta disolución total. Llenar hasta la tercera parte de los tubos de ensayo. Esterilizar a 121°C por 15 minutos. Enfriar en pico de flauta profundo.
0.025 15.0 pH final: 7.3 ± 0.2
AGAR LEVINE Ó DE METILENO):
EMB (EOSINA AZUL
El Agar Eosina y un medio aislamiento y bacilos entéricos medio también Agar EMB por fórmula original desarrollada por El uso de la metileno diferenciación fermentadoras fermentadoras. incluida en el los miembros que fermentan sacarosa que la
Azul de Metileno es utilizado para el diferenciación de Gram negativos. Este es conocido como sus siglas en inglés. La del Agar EMB fue Holt-Harris y Teague. eosina y del azul de permite la de las colonias de lactosa de las no La sacarosa está medio para detectar a del grupo coliforme más rápidamente la lactosa.
Fundamento: La fórmula original de este medio de cultivo, fue modificada por Levine, eliminando la sacarosa e incrementando la concentración de lactosa, lo que permite una mejor diferenciación de E. coli. Es un medio selectivo y diferencial, adecuado para el crecimiento de enterobacterias. La combinación utilizada de eosina y azul de metileno, inhibe el desarrollo de microorganismos Gram positivos y de bacterias Gram negativas fastidiosas, y también, permite diferenciar bacterias fermentadoras y no fermentadoras de lactosa. Los microorganismos fermentadores de lactosa, originan colonias de color azulado-negro, con brillo metálico. Las colonias producidas por microorganismos no fermentadores de lactosa son incoloras. Algunas bacterias Gram positivas (cepas de estafilococos, enterococos) y levaduras, pueden crecer, originando colonias incoloras y puntiformes. Este medio de cultivo,es útil para la orientación y no confirmación de especies bacterianas (ya que numerosas cepas de Citrobacter spp. producen colonias con brillo metálico), por lo cual será necesario realizar pruebas bioquímicas, para la identificación de género y especie. Incubación: De 18-24 horas a 35-37 °C, en aerobiosis. Medio preparado: color púrpura con tonos verdosos, ligeramente opalescente con un precipitado floculento disperso. Placas preparadas: color púrpura. La esterilización del medio de cultivo reduce el azul de metileno al color naranja. El color púrpura se restaura por agitación. La presencia de un precipitado en el medio esterilizado es normal y no debe ser removido, ya que es parte esencial del mismo.
Fórmula (en gramos por litro) Peptona
10.0
Lactosa
10.0
Fosfato dipotásico Agar Eosina Azul de metileno
2.0
Instrucciones Suspender 37,4 g de polvo por litro de agua destilada, dejar reposar 5 minutos. Calentar a ebullición hasta disolución total. Distribuir y esterilizar 15 minutos a 121°C.
15.0 0.4 0.065 pH final:7.1 ± 0.2
CONCLUSIONES: El análisis del Sedimento Urinario (SU) es una de las pruebas más solicitadas en el Laboratorio clínico. Si bien es una técnica relativamente sencilla proporciona al clínico datos sumamente importantes como apoyo al diagnóstico de diversas patologías. Actualmente existen diferentes métodos para el análisis de SU (tradicionales o manuales y automatizados). En este sentido, si bien se cuenta con métodos automatizados no deben sustituir a la lectura microscópica del SU. Adicionalmente, el análisis microscópico de SU nos permite identificar diferentes elementos formes (cilindros, leucocitos, etc.) con diferente relevancia diagnostica. Se puede decir que es el mejor de los métodos para realizar un urocultivo, además de tener un amplio espectro clínico. BIBLIOGRAFIA: http://www.botanica.cnba.uba.ar/Pakete/6to/membr-casos/Fisiol-Nefron/Analisis-Orina.htm http://es.calameo.com/read/0019755307d4ba7663aa7 http://es.slideshare.net/DanielPerezAorve/urocultivo-14352229 http://hilda-labmicrobiologia.blogspot.pe/2009/07/procedimiento-para-elaborar-unparcial.html
http://www.ispch.cl/sites/default/files/documento/2013/04/RECOMENDACIONES%20PARA %20EL%20AN%C3%81LISIS%20DEL%20SEDIMENTO%20URINARIO.PDF http://www.essalud.gob.pe/defensoria/guia_protocolo_Laboratorio/Guia_Lab_examen_urocul tivo.pdf https://procedimientosmicrobiologicos.wikispaces.com/UROCULTIVO https://libroslaboratorio.files.wordpress.com/2012/09/medios-de-cultivo-en-un-laboratoriode-microbiologc3ada.pdf http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.htm