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FACULTAD DE CIENCIAS QUÍMICAS LABORATORIO DE FARMACOLOGÍA I INFORME DE LABORATORIO

INFORME DE LABORATORIO Asignatura Número de Práctica Fecha de Realización Integrantes

Farmacología I 06 Fecha de Entrega 27/06/2018 Achig Diana, Guerrón Mishel, Quiroga Fernanda, Rosero Belén & Suquilanda Viviana

NOTA: 04/07/2018 Grupo N° 03

1. TEMA: SCREENING FARMACOLÓGICO Y TEST DE IRWIN 2. OBJETIVOS: 

 

Observar mediante la utilización de una batería de pruebas fáciles de realizar varios tipos de actividades de fármacos o extractos vegetales con una gran rapidez y una cantidad mínima de producto, las cuales podrán completarse con otras técnicas más selectivas y complejas que confirmen y amplíen los resultados obtenidos. Determinar las acciones de un extracto vegetal, un fármaco estimulante y un depresor de SNC, mediante las pruebas que constituyen el screening farmacológico. Determinar si la cantidad utilizada de extracto vegetal funciona como estimulante o depresor del sistema nervioso central.

3. FUNDAMENTO TEÓRICO: En el proceso de una investigación farmacológica donde se quiere probar la acción farmacológica de nuevos compuestos químicos o principios activos que puedan resultar beneficiosos para la humanidad, es indispensable la realización de un determinado número de pruebas que permitan establecer un perfil farmacológico general de la sustancia en cuestión. Para tal fin debe disponerse de “una amplia batería de ensayo de diversas actividades farmacológicas, a través de las cuales puede ser definido un primer perfil farmacológico de una sustancia de actividad desconocida. Esto es lo que denominamos una selección, tamizado, o “screening” farmacológico. Para que estas pruebas sean útiles deben cumplirse ciertas condiciones como la sencillez de su relación, la utilización de especies de animales de pequeño tamaño y fácilmente asequible, que no exijan el empleo de instrumentos complicados y costosos e impliquen un gasto mínimo del compuesto o del extracto a analizar, que su ejecución sea rápida y que sean suficientemente significativas de la actividad que se valora (Torres, s.f). Las pruebas mencionadas anteriormente constan de: test de la catalepsia, reflejo de postura, test de tracción, test de Haffner, fenómeno de Straub, piloerección, ptosis palpebral, reflejo pineal, reflejo corneal, reflejo de flexión ipsolateral, lagrimeo, midriasis, actividad motora, conducta, estado de alerta, excitación del SNC, postura, incoordinación motora, tono muscular, entre otras, las que debidamente interpretados mediante el test de Irwin por ejemplo se podría catalogar al producto ensayado con acciones sobre Sistema Nervioso Central, Sistema Nervioso Vegetativo, etc. Luego pueden completarse esos datos preliminares con ensayos y pruebas más específicos para determinar la acción con mayor seguridad.

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El sistema nervioso es una estructura enormemente compleja que regula y coordina la función de los órganos corporales. Se divide fundamentalmente en sistema nervioso central (SNC) y sistema nervioso periférico. El sistema nervioso periférico está constituido por los nervios somáticos (eferentes y aferentes) y por el sistema nervioso autónomo (SNA), el cual produce respuestas involuntarias que pueden ser excitadoras (p. ej., vasoconstricción) o inhibidoras (p. ej., broncodilatación). El SNA se divide anatómicamente, a su vez, en dos grandes secciones: el sistema nervioso simpático o adrenérgico, y el sistema nervioso parasimpático o colinérgico (Raffa, 2008). Los estimulantes del sistema nervioso central (SNC) son fármacos que ejercen su acción por excitación no selectiva de dicho sistema. Algunos de los fármacos de este grupo producen una acción, fuerte, mientras que otros tienen un efecto débil. En el estímulo del SNC intervienen dos mecanismos: el bloqueo selectivo de la inhibición neuronal y la excitación neuronal directa. En el primer mecanismo se distinguen dos efectos: (a) el bloqueo de la inhibición postsináptica y (b) el bloqueo de la inhibición presináptica. La estricnina actúa por el primer mecanismo y la picrotoxina es el ejemplo de un fármaco que actúa por el segundo mecanismo. Ambos fármacos, la estricnina y la picrotoxina, aunque se emplean clínicamente desde hace muchos años, son anticuados; hoy se emplean casi exclusivamente para investigaciones experimentales. Otros estimulantes del SCN no bloquean los procesos inhibitorios; por consiguiente, los efectos estimulantes que producen, resultan de la exaltación de la excitación sináptica. Los estimulantes del sistema nervioso central se emplean para una gran variedad de fines: tratamiento de los estados de depresión, mantenimiento de la vigilia o de la actividad y restablecimiento de la respiración o de la presión sanguínea (Korolkovas, 1983). Por el contrario la depresión es un estado mediado bioquímicamente, que se basa probablemente en anomalías del metabolismo de la 5-HT y la noradrenalina. El síndrome clínico se caracteriza por introversión, irritación, frustración e incapacidad de sentir sensaciones placenteras. El estado clínico de la depresión (endógena), un trastorno biopsicológico heterogéneo que presenta predisposición genética, puede ocurrir en cualquier momento de la vida, sin relación con ningún factor estresante obvio. Precisa tratamiento, aproximadamente el 15% de estos pacientes comente suicidio. Existen formas graves (depresión mayor) y leves. Los hallazgos sobre el hecho que los estados clínicos de la depresión pueden estar relacionados con un desequilibrio de las aminas endógenas (5-HT o NA) en el SNC conducen a la hipótesis de las aminas como factor etiológico y las estrategias farmacológicas se encaminan a mejorar su acción en la sinapsis (Castells, 2007).

4. PROCEDIMIENTO   

Cada mesa utilizará 4 ratones, 1 ratón para cada fármaco o planta a ensayar. Pesar los ratones y administrar los fármacos o extracto de planta según las dosis o volúmenes indicados en el cuadro, por vía intraperitoneal. Se miden en todos ellos los parámetros indicados en el cuadro a tiempo 0, medida que sirve de control, luego a los 5, 10, 15, 30 y 60 minutos.

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Controlar todos los parámetros a los distintos tiempos indicados en el cuadro, valorándolos de 0 a 4 según la intensidad del efecto observado y comparándolo con la medida realizada a tiempo cero.

5. CÁLCULOS RATÓN N°1 -

Peso del ratón: 33g

CLORPROMAZINA -

Dosis: 10 mg/Kg Concentración: 2,5 mg/mL

10mg

1000g

X

33g

33 𝑔 𝑥

10𝑚𝑔 = 0,33 𝑚𝑔 1000𝑔

2,5mg

1mL

0,33mg

0,33 𝑚𝑔 𝑥

X

1 𝑚𝑙 = 0,13 𝑚𝐿 2,5 𝑚𝑔

RATÓN N°2 -

Peso del ratón: 35g

ANFETAMINA -

Dosis: 5 mg/Kg Concentración: 0,25 mg/mL

5mg

1000g

X

35g

5𝑚𝑔 = 0,18 𝑚𝑔 1mg 1000𝑔 1Ml

35 𝑔 𝑥

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0,25mg

1mL

0,18mg

0,18 𝑚𝑔 𝑥

X

1 𝑚𝑙 = 0,70 𝑚𝐿 0,25 𝑚𝑔

RATÓN N°3 -

Peso del ratón: 30g

EXTRACTO DE MENTA -

Dosis: 200 mg/Kg Concentración: 12 mg/mL

200mg

1000g

X

30g

30 𝑔 𝑥

200𝑚𝑔 = 6,0𝑚𝑔 1000𝑔

12mg

1mL

6,0mg

6,0 𝑚𝑔 𝑥

X

1 𝑚𝑙 = 0,50 𝑚𝐿 12 𝑚𝑔

6. RESULTADOS Tabla 01. Resultados de la Acción Farmacológica del Medicamento TIEMPO (min)

PARAMETROS Normal RATÓN ESTADO DE ALERTA: Alerta Ubicación visual pasividad

4 4 0

3 1 0

5

10

15

30

60

12 3

1 2 3

1 23

1 23

1 23

0 0 0 4 0 0 0 0 4 2 0 0 0 4 0

4 4 4

4 4 3

4 3 3

0 1 0

4 4 3

0 2 1

0 0 0

3 3 3

1 3 1

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ESTADO DE ANIMO: Autoacicalamiento Vocalización Intranquilidad Irritabilidad Temor

4 0 0 0 0

0 0 0 0 0

4 0 4 4 4

3 0 0 0 0

0 0 0 0 0

4 0 4 4 4

1 0 0 0 0

0 0 0 0 0

4 0 4 4 4

3 0 0 0 0

0 0 0 0 0

4 0 4 4 4

4 0 0 0 0

ACTIVIDAD MOTORA: Reactividad Actividad espont. Respuesta al dolor

4 4 4

2 1 0

4 4 4

0 0 0

0 0 0

4 4 4

2 0 4 3 0 2 0 4 3 0 2 0 4 2 0

4 4 4

3 3 2

0 0 0

4 4 4

3 3 2

0 0 0 0 0

0 3 0 2 0

4 4 2 2 0

1 0 2 1 0

0 0 0 1 0

4 4 2 2 0

0 0 2 0 0

0 0 2 1 0

0 0 0 2 0

0 0 1 1 0

0 0 0 2 0

3 3 2 2 0

0 0 2 0 0

4 4

2 2

4 4

3 3

3 1

4 4

3 0 4 3 0 2 0 4 2 0

4 4

4 3

0 0

4 4

4 3

0 0

4 4

0 0

2 2

4 4

0 0

2 4 0 2 4 2 4 0 3 4

0 0

3 1

4 4

0 0

3 1

4 4 0 4 4 4

2 3 0 3 2 0

4 4 3 4 4 0

2 2 3 0 2 0

0 0 0 0 3 4

4 4 3 4 4 0

2 2 4 2 2 0

0 0 0 0 3 4

4 4 3 4 4 0

2 3 4 2 2 0

0 0 0 0 3 4

4 4 3 4 4 0

2 0 4 3 3 0

4 0

1 0

4 0

1 0

0 0

0 0

1 0 0 1 0 0 0 0 0 0

0 0

1 0

0 0

0 0

0 0

4

4

4

4

4

4

4 4 4 4 4

4

4

4

4

4

TEST DE TRACCIÓN: Ratón normal

4

4

4

4

4

4

4 4 4 4 4

4

4

4

4

4

TEST DE HAFFNER: Ratón normal

4

4

4

1

4

4

1 4 4 2 4

4

2

4

4

2

TEST DE STRAUB PILOERECCIÓN

0 0

0 0

2 2

1 1

0 0

2 2

2 0 3 0 0 2 0 3 2 0

3 3

0 2

0 0

3 3

0 3

PTOSIS PALPEBRAL

0

0

0

1

3

0

2 3 0 0 2

0

0

2

0

0

REFLEJO PINEAL

4

4

4

0

4

4

0 4 4 0 4

4

0

4

4

0

EXCITACIÓN DEL SNC: Respuesta al espanto Sacudida de cola Temblores Contracciones Convulsiones POSTURA: Postura corporal Posición extremidades INCORDINACION MOTORA: Marcha vacilante Marcha anormal TONO MUSCULAR Extremidades Fuerza prensil Encorvamiento corp. Tono corporal Tono abdominal Ratón normal TEST DE CATALEPSIA: Ratón cataléptico Ratón normal REFLEJO DE POSTURA: Ratón normal

0 0 0 0 0

0 0 0 2 0

0 0 0 0 3 4

4 0 4 4 4

4 0 0 0 0

4 4 3 4 4 0

2 0 0 0 0

0 0 2 1 0

2 3 4 2 2 0

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REFLEJO CORNEAL REFLEJO DE FLEXIÓN LAGRIMEO MIDRIASIS Elaborado por: Grupo 03

4

4

4

2

4

4

3 4 4 3 4

4

4

4

4

3

4

4

4

0

4

4

2 4 4 2 4

4

3

4

4

3

0 0

0 0

0 3

0 0

0 0

0 3

0 0 0 0 0 0 0 4 0 0

0 4

0 0

0 0

0 4

0 0

7. DISCUSIÓN DE RESULTADOS 





La suministrar al ratón 1 de 33 g con 0,13 mL de clorpromazina, el ratón presenta temperatura del cuerpo más bajo, no hay respuesta al realizar pruebas del dolor como en el test de Haffner, el reflejo corneal es positivo, catalepsia es positivo, reflejo de enderezamiento es más o menos positiva, el ratón no reacciona al reflejo pineal, no hay respuesta al espanto, el ratón no responde al test de tracción pues cae de la cuerda de una manera rápida sin que trate de sujetarse, entre otros; esto debido a la acción de la clorpromazina que actúa sobre el sistema nervioso central y puede producir: somnolencia, mareos y disminución de la capacidad de reacción (Flórez, J. 1997). La clorpromazina es un antagonista de los receptores dopaminérgicos D2 y similares (D3 y D5) y, a diferencia de otros fármacos del mismo tipo muestra una alta afinidad hacia los receptores D1. El bloqueo de estos receptores induce una reducción de la transmisión neuroléptica en el cerebro anterior. La dopamina incapaz de unirse a sus receptores experimenta una retroalimentación cíclica que estimula a las neuronas dopaminérgicas para que liberen más neurotransmisor, lo que se traduce en un aumento de la actividad dopaminérgica neural en el momento en el que se administra la clorpromazina. Posteriormente, la producción de dopamina disminuye sustancialmente siendo aclarada de la hendidura sináptica y como consecuencia, reduciéndose la actividad neuronal. Adicionalmente, la clorpromazina bloquea los receptores serotoninérgicos 5-5HT1 y 5-HT2 lo que induce efectos ansiolíticos y antiagresivos y una atenuación de los efectos extrapiramidales. (Davis J, Casper R. 2006). Al suministrar al ratón 2 de 35 g 0,70 mL de anfetamina se pudo observar un mayor estado de ánimo, alerta, asustadizo, intranquilidad y muy activo, el ratón fue sometido a varios test de los cuales responde a varias de ellas como es el caso de: test de catalepsia donde el ratón reacciona de manera rápida ante la manipulación de su extremidad normal al manipularlo con el esfero, test de alerta el cual el ratón muestra un estado de alerta muy alto, no se muestra pasivo, es agresivo, intranquilo, irritable, se auto acicala muy temeroso; el ratón presenta una fuerza prensil puesto que es sometido al test de tracción el cual responde con una actitud muy positiva, test de Haffner el cual con una pinza se presiona la cola y el ratón reacciona al estímulo del dolor normal, entre otros; esto debido a que la anfetamina suministrada a dicho ratón es un agente adrenérgico sintético, potente estimulante del Sistema Nervioso Central, el cual causa cambios conductuales como es: aumento del estado de alerta, comportamiento agresivo y violento, aumento de energía y actividad motora,

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

aumento en la seguridad y confianza, disminuye el sueño, disminuye la fatiga, aumenta la velocidad de pensamiento y lenguaje, aumento en la presión arterial, aumento en la frecuencia cardiaca, aumento en la temperatura corporal, estimulación de la corteza cerebral desincronización en el Electro Encefalograma (E.E.G.), disminución del sueño; la anfetamina es un agonista directo de los receptores presinápticos para noradrenalina (NA) y dopamina (DA) a nivel del sistema nervioso central, la anfetamina se une a estos receptores y los activa, induciendo la liberación de los neurotransmisores de reserva alojados en las vesículas de las terminales nerviosas, convirtiendo los respectivos transportadores moleculares en canales abiertos (Quijada J.2012). Al suministrar al ratón 3 0,50 mL de extracto de menta se pudo notar que el ratón al cabo de 15 minutos se torna tranquilo relajado, no presente indicios de agresividad, presenta poco estímulos de dolor al someterlo a las pruebas, pierde un poco su fuerza prensil, aunque al cabo de sesenta minutos el ratón empieza a recuperarse a diferencia del resto, esto debido a que la menta posee acciones farmacológicas que actúan en el sistema nervioso con una acción relajante.

8. CONCLUSIONES 

Mediante la serie de pruebas se observó los tipos de actividades de los fármacos o extractos en: -

-

-

-

-

-



Test de Catalepsia: El ratón con extracto de menta y con anfetamina recuperan su posición normal inmediatamente mientras que el ratón que se administró clorpromazina no ocurre esto. Reflejo de Postura: El ratón con extracto de menta y anfetamina se restablece de inmediatamente mientras que el ratón que se administró clorpromazina no recupera su posición rápidamente. Test de Haffner: Los medicamentos que estimulas el SNC hacen que el ratón se de vuelta y chille como en el caso del ratón con anfetamina, el ratón con clorpromazina no presenta este reflejo. Reflejo Pineal: La anfetamina hace que este reflejo no se pierda mientras que este reflejo es negativo para el ratón que fue administrado con clorpromazina y con extracto de menta. Reflejo de Flexión Ipsolateral: El ratón administrado clorpromazina no flexiona rápidamente su pata, mientras que el ratón con extracto de menta tarda en hacerlo. Estado de Alerta: El ratón se encuentra en alerta al percibir nuestra mano menos en el caso de depresión del SNC.

La anfetamina funcionó como estimulantes del sistema nervioso central pues mediante el screening mostraron estados de hiperactividad un estado de alerta más grande respecto mientras que la clorpromazina actúa como un depresor del sistema nervioso central y del extracto de menta.

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La cantidad de extracto de menta funcionó como depresor del sistema nervioso central esto debido a que en las pruebas realizadas el ratón mostro un estado de pasividad.

9. CUESTIONARIO 

¿Podría especificar en base a los resultados la acción farmacológica de los extractos utilizados? ANFETAMINA: La anfetamina es un agonista indirecto de los receptores presinápticos para noradrenalina (NA) y dopamina (DA) a nivel del sistema nervioso central. La anfetamina se une a estos receptores y lo activa, induciendo la liberación de los neurotransmisores de reserva alojados en las vesículas de las terminales nerviosas, convirtiendo los respectivos transportadores moleculares en canales abiertos. También tiene una acción agonista serotoninérgica, aunque relativamente más débil. Al administrar anfetamina se pudo observar un mayor estado de ánimo, alerta, intranquilidad y muy activo. En base a estos resultados obtenidos en esta práctica se puede concluir que la cafeína tiene efectos estimulantes en el Sistema Nervioso Central, efectos en el sistema cardiovascular, efectos en las funciones renales, efectos en el sistema respiratorio, efectos en los músculos, efectos en el sistema gastrointestinal y efectos en el metabolismo energético. CLORPROMAZINA: Mediante los resultados obtenidos en esta práctica se logró determinar la acción farmacológica de este medicamento en cual actúa sobre el sistema nervioso central produciendo una somnolencia, pasividad e incapacidad para realizar tareas de destreza puesto que no presenta reflejos de flexión ipsolateral, corneal, postura e incoordinación motora. En base a estos resultados se puede concluir con mucha veracidad que este fármaco tiene acción depresora del Sistema Nervioso Central y tiene acciones farmacológicas tanto como: ansiolítico, antiemético, sedante y antipsicótico. EXTRACTO DE PLANTA (MENTA): La menta, la parte de esta planta que se utilizada con fines medicinales es la hoja y de los principios activos de la menta podemos destacar el mentol, el cineol o el limoneno y sus flavonoides, fenoles y taninos. Todos estos componentes son los que confieren a la menta sus cualidades terapéuticas. Debido a sus efectos energéticos, el aceite de menta es utilizado para controlar el estrés y tratar los trastornos nerviosos y la fatiga mental. Estudios sugieren que el aceite esencial podría tener un efecto similar a los psicoestimulantes, según demuestra un estudio realizado con ratones. Además de estos beneficios a la salud, el aceite de menta también puede usarse como repelente natural de insectos. La frescura que brinda la menta también puede ayudar a aliviar la comezón ocasionada por los insectos, al bloquear la sensación.

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En esta práctica se obtuvo acción farmacológica muy similar a la de la cafeína y no alcanzo el estado propiamente dicho de este extracto, un factor importante para que no se lleve al cabo dicha función alucinógena se pudo deber a la cantidad de solución administrada. En conclusión, la menta posee acciones farmacológicas estimulantes del Sistema Nervioso Central. 10.

REFERENCIAS Y BIBLIOGRAFÍA       

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Castells, S., Hernández, M. (2007). Farmacología en Enfermería. España: Elsevier. Davis J, Casper R. (2006). Clorpromazina. Obtenido de: http://www.iqb.es/cbasicas/farma/farma04/c137.htm Flórez, J. (1997). Farmacología Humana 3ª edición. Ed. Panamericana S. A Korolkovas, A., Burckhalter, J. (1983). Compendio esencial de química farmacéutica. España: Reverté. Quijada, J. (2012). Anfetaminas en el Sistema Nervioso. Obtenido de: https://prezi.com/jxcurfe-lswa/anfetaminas-en-el-sistema-nervioso/ Raffa, B., Rawls, S. y Portyansky, E. (2008).Netter Farmacología Ilustrada. España: Elsevier Masson. Samaniego, E. (2014). Fundamentos de Farmacología, Editorial Universitaria. Traynor y Elliot, (2007). Sistema Opiáceo. Obtenido de: https://www.newsmedical.net/news/2007/10/15/26/Spanish.aspx Torres, N., Mrad de Osorio, L. (s.f). Selección de la actividad farmacológica del extracto etéreo purificado de las flores de Spilanthes Americana. Obtenido de: http://www.ciencias.unal.edu.co/unciencias/data-file/farmacia/revista/V17P5-20.pdf Velasco, A. (1998). Compendio de Psiconeurofarmacología. España: Díaz de Santos. ANEXOS

Figura N°01. Administración del fármaco Clorpromazina

Figura N°01. Administración del fármaco Clorpromazina

Figura N°02. Diferencia del efecto producido por Clorpromazina (ratón inferior) y Anfetamina (ratón superior)

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