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Producido por Neogen Corp (www.neogen.com). Empresa norteamericana con acreditación ISO 9001: 2000 . El mismo fabricante de los kits VERATOX histamina y REVEAL histamina. AHORA no necesita ser un experto en Laboratorio para detectar en forma muy rápida y segura Histamina en pescado y conservas.

VENTAJAS. 

Combina lo mejor de la tecnología de los métodos producidos por Neogen Corp, para dar lugar a un método de 3 pasos que da resultados 5 minutos después de obtener el extracto. Es el método mas rápido presente en el mercado.

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No hay reacciones cruzadas con otras aminas biogenicas.

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Especificidad: 100% y Sensibilidad: 100%

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AUSPICIOSAMENTE COMENTADO - FDA 2011

Comparison study of three rapid test kits for histamine in fish: BiooScientific MaxSignal enzymatic assay, Neogen Veratox ELISA, and the Neogen Reveal Histamine Screening test. (FDA 2011 ). James Hungerford, , Wen-Hsin Wu- Applied Technology Center, Pacific Regional Laboratory, Northwest, FDA, 22201 23rd Dr. S.E., Bothell, WA 98021, United States

“ The LFIC kit Reveal was also found to be simpler and easier to use than ELISA kits, having only one critical pipetting step, requiring no acylation, and only minimal sample manipulation. If accelerated sample removal and grinding could be implemented and validated, the LFIC kit Reveal appears to have excellent potential for onsite testing “ . ¨ Reveal also showed no interference at levels of histidine, agmatine, anserine, and carnosine expected in fish sample

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Todos el kit puede conservarse a temperatura ambiente.

COMPONENTES DEL KIT PARA 25 MUESTRAS

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25 tiras de detección de histamina 25 frascos con etiqueta azul prellenados con 7 ml de Buffer diluente de muestra 25 copas que sirven para colocar el extracto de muestra ya listo para uso y la correspondiente unidades de detección de histamina.

METODO DE TRABAJO PREPARACION DE LA MUESTRA. Peces histamínicos grandes: La sección anterior y baja del lomo es la mas representativa ( FDA . Fish and Fishery Products Hazards and Controls Guidance. Fourth Edition – April 2011) Atún enlatado (Conserva de pescado). AOAC937.07b: Coloque todo el contenido de la lata, tanto la carne como el líquido, en la mezcladora. Mezcle hasta que adquiera una consistencia homogénea. Almacene las muestras a una temperatura de 2 a 8 °C hasta su rápido análisis. Nota: La norma FDA anterior indicaba tomar 3 pedazos de tejido como representativo de 1 pez Peces histaminicos AOAC 937.07ª: Limpie y eviscere tres pescados. Haga tres cortes transversales de 2,5 cm (1 pulgada) de grosor: uno detrás de las aletas pectorales, otro a la mitad del orificio de respiración y el tercero detrás del orificio de respiración. Retire los huesos de las rebanadas, mezcle o muela o corte muy finamente las muestras combinadas hasta que sean homogéneas. Almacene las muestras a una temperatura de 2 a 8 °C hasta su rápido análisis. ** Siempre consulte con el Inspector Sanipez que visite su planta en cuanto a la toma de muestra y el equipamiento necesario para procesarla

METODO DE TRABAJO 1.- OBTENCION DEL EXTRACTO FILTRADO En un frasco plástico con tapa, adicione 10 gramos de muestra representativa previamente homogenizada. Agregue 190 ml de agua destilada. A. Si está evaluando 1 o pocas muestras agite manualmente el o los frascos con la mezcla en forma continua durante 2 minutos o más. Esperar 1-2 minutos a que aparezca sobrenadante. Filtrar solo el sobrenadante. B. Si está evaluando muchas muestras a la vez, use este método , el cual le permite trabajar muchos frascos en forma manual: Ponga el timer o cronometro a 5 minutos. Agitar vigorosamente por 20 segundos el primer frasco. Al termino agite vigorosamente por 20 segundos el segundo frasco y asi sucesivamente. . Si le queda tiempo espere a que se complete los 5 minutos. Comenzar a agitar nuevamente cada uno de los frascos por 20 segundos. Esperar a que se completen los 5 minutos. Comenzar a agitar nuevamente cada uno de los frascos por 20 segundos. Esperar hasta que observe que se ha producido sobrenadante . Filtrar solo el sobrenadante. C. Si usa licuadora o un equipo profesional de agitación de frascos. El tiempo total de agitación es 1 minuto. Esperar a que aparezca sobrenadante. Filtrar solo el sobrenadante Como filtrar? Coloque la jeringa con filtro encima de un tubo , saque el embolo de la jeringa y agregue solo el sobrenadante dentro de la jeringa con filtro (si no sabe cómo fabricarlas…. consulte con nosotros). Ponga el embolo y presione para que pase algo de extracto filtrado hacia el tubo. En el kit de extracción se incluye frascos plásticos con tapa, jeringas con filtro y tubos con tapa para recibir extracto filtrado. Los materiales se pueden lavar y reusar. También puede filtrar usando embudo y papel de filtración rápida. Nota: Agua es agua destilada o Agua San luis sin gas o similar. No usar agua de caño o agua desionizada o agua destilada para batería. Si usa el agua incorrecta tendrá resultados anormalmente altos. 2.– DILUCION DEL EXTRACTO FILTRADO La cantidad de extracto filtrado que coloque en el frasco con diluente de muestra, le permitirá determinar diferentes niveles de histamina. Como pautas puedo indicarle:  Puede elegir cifras como 16 ppm si desea conocer si la materia prima es realmente fresca. Si utiliza muestras composito evalúe a 16 ppm para conocer si la muestra cumple o no con el tope composito FDA de 17 ppm.  Puede elegir 50 ppm si desea determinar si la muestra ya ha producido niveles significativos de histamina y si se ha excedido o no sobre el tope FDA para análisis de muestra individual .

Nivel de histamina a detectar Dilución de la muestra filtrada en el frasco pre-llenado con los 7 ml de diluente de muestra. 100 ppm

Colocar 50 ul de sobrenadante el frasco etiqueta azul . Tape y agite hasta mezclar.

50 ppm

Colocar 100 µl de sobrenadante en el frasco etiqueta azul. Tape y agite hasta mezclar.

25 ppm

Colocar 200 µl de sobrenadante en el frasco etiqueta azul. Tape y agite hasta mezclar

16 ppm

Colocar 300 µl de sobrenadante en el frasco etiqueta azul. Tape y agite hasta mezclar.

Desea determinar cifras de histamina diferentes a las indicadas… Consúltenos

3.– LA PRUEBA EN SI Usando 1 punta de pipeta nueva por cada muestra transfiera 200 ul (son 2 pipeteadas con la pipeta de 100 ul) del frasco etiqueta azul donde mezclo el sobrenadante filtrado con el buffer , hacia la copa para extracto de muestra que viene en el kit Coloque la unidad de detección en su correspondiente copa. Observe que la tira de detección tiene un extremo con la imagen de 2 flechas lo que indica que esa sección se sumerge.

La tira (unidad de detección ) debe permanecer exactamente 5 minutos dentro de la copa. (En ese lapso de tiempo, notara que la tira comienza a absorber el líquido y casi hacia el final del tiempo observara la aparición de la ó las línea de color) INTERPRETACION DEL RESULTADO Al término del tiempo, retire la o las tiras y colóquela cuidadosamente encima de un papel blanco, puesto sobre una mesa (esto facilitara la lectura.)

La línea “Control “ siempre debe aparecer e indica que la prueba es válida. Fíjese en la intensidad de color de la línea que se formo en su prueba

La línea en la sección “Prueba” indica el resultado. En este caso como la intensidad de color es igual o más intensa a la línea Control, el resultado es que la muestra está por debajo de ….

La línea en la sección Prueba indica el resultado. Si la intensidad de color es menor a la línea Control o no hay línea coloreada. El resultado es que la muestra está por encima de …. Si corrió la prueba a 25 ppm, entonces el resultado es que la muestra evaluada es mayor a 25 ppm de histamina.

Si corrió la prueba a 15 ppm, entonces el resultado es que la muestra evaluada es menor a 15 ppm de histamina.

NO HAGA LECTURAS DESPUES DE LOS 6 MINUTOS, PORQUE OBTENDRA RESULTADOS ERRADOS POR SOBREDESARROLLO DE LA PRUEBA. INMEDIATAMENTE DESPUES DE QUE UD OBTUVO SU RESULTADO, COLOQUE LA TIRA DENTRO DE PAPEL TOALLA O PAPEL ABSORVENTE DOBLADO VARIAS VECES Y PRESIONE HASTA ELIMINAR TODO RESTO DE LIQUIDOS QUE QUEDE DENTRO DE LA TIRA . CAMBIE EL PAPEL Y REPITA EL PASO ANTERIOR HASTA ASEGURARSE DE QUE LA TIRA ESTE REALMENTE SECA A FIN DE QUE LOS COLORES OBTENIDOS PERSISTAN POR ALGUNOS MESES

4.– REGISTRO DE RESULTADOS. ES UNA NORMA QUE SIEMPRE DEBE QUEDAR UNA EVIDENCIA DE UNA PRUEBA REALIZADA , Por ello es adecuado CREAR UN “ CUADERNO REPORTE DE RESULTADOS ” . Pegue la tira previamente secada y a su costado anote : Día y hora en que realizo la prueba Lote del kit REVEAL usado ( ese dato esta en la caja) Tipo de muestra evaluada. Persona que realizo la prueba. Resultado obtenido ( mayor o menor de 16 ppm, etc ).

Dr. Juan Carlos Flores N. MULTIVET SRL