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PRACTICA N° 7 RECONOCIMIENTO DE MICROORGANISMOS NATALIA GARCÍA GONZÁLEZ CRISTIAN ANDRES GONZÁLEZ TAPIERO UNIVERSIDAD DEL QUINDÍO FACULTAD DE CIENCIAS BÁSICAS PROGRAMA DE QUÍMICA E. A. BIOLOGÍA RESUMEN PALABRAS CLAVES INTRODUCCION Un microorganismo, también llamado microbio u organismo microscópico, es un ser vivo que sólo puede visualizarse con el microscopio. Son organismos dotados de individualidad que presentan, a diferencia de las plantas y los animales, una organización biológica elemental. En su mayoría son unicelulares, aunque en algunos casos se trate de organismos cenóticos compuestos por células multinucleadas, o incluso multicelulares. Dentro de los microorganismos se encuentran organismos unicelulares procariotas, como las bacterias que tienen un tamaño medio de 10 µm; y eucariotas, como los protozoos, una parte de las algas y los hongos, que tienen un tamaño medio mayor de 250 µm.1

cualquier medio debido a que son muy básicos y tienen metabolismos muy rápidos y pueden obtener fuentes de alimentación constantes, ya que pueden alimentarse de sustancias por lo general orgánicas como restos vivos o muertos, plantas o animales. Por ejemplo para las bacterias, las superficies suaves y húmedas son idóneas para su supervivencia pudiendo vivir desde horas hasta incluso meses; los hongos encuentran un hábitat propicio en zonas húmedas o sobre vegetales en descomposición; los protozoos, la mayoría crece en colonias, dependiendo el uno del otro para sobrevivir. Son asexuales y se reproducen rápidamente a través de la fragmentación o mitosis, se encuentran las algas que como las plantas adquieren los nutrientes a través de la fotosíntesis.2

Los microorganismos tienen la capacidad de adaptarse fácilmente a

Debido a todo microorganismos

1

2

INGRAHAM. J. L., INGRAHAM. C. A. Introducción a la Microbiología. Reverte S.A., 1998. [Consulta: 03 de mayo 2014]

esto los fácilmente

KIMBALL. J. W. "The Protists"; 2011. [Consulta: 03 de mayo 2014]

representan riesgos para la salud de organismos multicelulares como lo son los mamíferos, siendo protagonistas de infecciones bacterianas, alergias por las esporas de los hongos, incluso muertes. Es necesario entonces reconocer e identificar estos microorganismos, para saber de qué clase son y cómo tratarlos e incluso como saber aprovechar su actividad; por ello surgen técnicas, como: 1. la Tinción de Gram, que es una técnica diferencial empleada en bacteriología para la visualización entre estructuras de las bacteria Gram+ (pared más gruesa, y una sola capa de peptidoglucano) y de las bacterias Gram- (pared más delgada y dividida en dos partes), las bacterias Gramestarán teñidas de un color rosáceo, y las Gram+ de un color violeta. Y 2. La Tinción de Esporas WirtzConklin, las endosporas se producen cuando las condiciones ambientales son desfavorables (agotamiento de los nutrientes, temperaturas extremas, radiaciones, compuestos tóxicos, etc.) formándose una espora por cada forma vegetativa. Al finalizar el proceso de esporogénesis, la célula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. Las endosporas, tras la primera tinción, no perderán el colorante en el lavado con agua, y sí lo harán las formas vegetativas, que quedarán teñidas con el segundo colorante.3

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VALENCIA, J. C. Bacterias-Protozoos, Hongos, Guía de laboratorio N° 6. 2014. [Consulta: 03 de mayo 2014]

PARTE EXPERIMENTAL Materiales y Reactivos                     

Vaso lavador Asa de siembra Microorganismos en medio sólido Parrilla Portaobjetos Cubreobjetos Violeta Genciana Safranina Alcohol – Acetona Lugol Fuscina Alcohol ácido Azul de Metileno Verde malaquita (5%) Safranina (0,5%) Goteros Microscopio Mecheros Pinzas de madera Aceite de inmersión. Muestras de aguas estancadas

Procedimiento 1. Bacterias Se tomo una muestra de la colonia dentro del campo estéril y se ubico en el portaobjetos, luego se tiño con azul de metileno, se dejo en reposo durante un minuto y se lavo con agua, para después teñir con Lugol durante un minuto y lavar con alcohol-acetona. A continuación se tiño por última vez con safranina por

un minuto, se lavo nuevamente con agua y se observo al microscopio. 2. Hongos Se esparció una muestra de hongos a partir de una fresa en descomposición, se tiño con verde de malaquita y se flameo durante 5 minutos sin dejar secar el colorante, después se lavo con agua destilada, y luego se tiño con safranina durante 1 minuto, se lavo nuevamente con agua destilada y se observo al microscopio. 3. Protozoos Se tomo una muestra de agua en descomposición, se tiño con Lugol y se observo al microscopio.

RESULTADOS Y ANALISIS 1. Bacterias. En la tinción de gram, el azul de metileno que se agrego tiño las bacterias Gram+ y Gram-, y luego de adicionar el Lugol (compuesto formado por I2 yodo) se formo el complejo I2/azul de metileno que fue insoluble en agua, pero soluble en la solución alcohol-acetona con que se lavo después y cuya función crucial fue realizar la decoloración, donde las bacterias Gram- se decoloraron y las Gram+ no, es decir, estas últimas se verían de color azul violeta. Las bacterias Gram- que se decoloraron debieron quedar de un color rosáceo pero como se agrego safranina como colorante de contraste activo únicamente para estas, se vieron de

un color rojo (Fig. 1) mientras que las Gram+ debieron permanecer violetas (Fig. 2).4 Sin embargo no fue posible observarlas. Solo se pudo observar las bacterias Gram- que por las características de su constitución permitieron una excelente fijación de la safranina; estas bacterias poseen una pared celular más delgada y dividida en dos partes con una sola capa de péptidoglucanos sobre la que se dispone una membrana externa constituida por una capa de fosfolípidos y otra de glicolípidos asociados, estos últimos, a polisacáridos que se proyectan hacia el exterior5. No fue posible observar las bacterias Gram+, las cuales poseen una envoltura celular compuesta por una membrana citoplasmática y una pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglucano que confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram. sin embargo el tinte no se retuvo impidiendo la observación de este tipo de bacterias, lo cual pudo ocurrir por diferentes causas, bien se que el cultivo de muestra estuviera contaminado de alguna manera, que la colora concentración de los reactivos de tinción no fuera adecuada, que los tiempos de tinción no fueran correctos, o que la muestra 4

Tinción De Gram, [En línea]. http://es.wikipedia.org/wiki/Tinci%C3%B3n_de_ Gram [Consulta: 03 de mayo 2014] 5

VALENCIA, J. C. Bacterias-Protozoos, Hongos, Guía de laboratorio N° 6. 2014. [Consulta: 03 de mayo 2014]

se hubiera trabajado fuera del campo estéril.

inicialmente

Fig 1. Bacterias Gram- vistas en objetivo 10x.

Fig 2. Bacterias Gram+ y Gram- [En línea]. http://campus.usal.es/~micromed/Practicas_o dontologia/unidades/labv/LabMicro/Diag_dire cto.html [Consulta: 03 de mayo 2014]

2. Hongos. En la práctica se observaron los hongos producidos por la fresa en descomposición por medio de la tinción de esporas de Wirtz-Conklin, en la cual se produjeron endosporas, las cuales se producen cuando las condiciones ambientales son

desfavorables, formándose una espora por cada forma vegetativa. Finalizado el proceso de esporogénesis, la célula vegetativa se lisa y libera la espora al exterior. Cuando el ambiente es favorable, la espora germina generando una nueva forma vegetativa. La envuelta de la endosporas es más compleja e impermeable que la envuelta de las células vegetativas en las que se forma. Sólo se puede teñir el contenido de la espora alterando su envuelta. La impermeabilidad de las cubiertas dificulto que las endosporas se decoloraran una vez teñidas. El verde de malaquita es un colorante débilmente básico y por tanto, se une débilmente a la bacteria. Penetrándose en la célula vegetativa. Además cuando se calentó la preparación también hubo penetración en las endosporas. Durante el lavado con agua, el verde de malaquita se elimino de las células vegetativas, pero no de la endosporas. La safranina, que es el colorante de contraste solo pudo teñir a las células vegetativas. Ambas; las endosporas, teñidas de color verde, y las células vegetativas, teñidas de un rosáceo, se indican en la Fig. 3 y 4. En esta se puede observar la bacteria llamada Bacillus subtilis, la cual es una bacteria Gram+, que posee endosporas capaces de sobrevivir en tiempos de tensión ambiental.6

6

Tinción de esporas. [En línea]. http://www.pomif.com/pages/practicas/bacteriologi a/tinciones/endosporas. [Consulta: 03 de mayo 2014]

orgánica. y un alga (Fig. 6), gracias al Lugol, el cual ayuda a detener el movimiento de los protozoos pues mata las formas móviles.

Fig. 3. Bacteria Bacillus subtilis observada en objetivo 10x.

Fig. 5. Spirosfomum observados con objetivo 10x. Fig. 4. Bacteria Bacillus subtilis observada en objetivo 40x.

3. Protozoos La cantidad de microorganismos vistos en el agua fue mínima puesto que la muestra no estaba tan contaminada como para obtener varios microorganismos, sin embargo se pudo identificar un spirostomum (Fig. 5) que es un protozoo ciliado bastante común en aguas poco oxigenadas y cargadas de materia

Fig. 6. Algas observadas con objetivo 10x.

CONCLUSIONES En la tinción de esporas se observo la bacteria Bacillus subtilis gracias a los colorantes utilizados, que ayudaron a debilitar los compuestos de los hongos.

marinos y presentan una gran diversidad de especies, y su gran utilidad en los estudios de tipo bioestratigráfico, paleoecológico, paleoceanográficoetc.8 3. Que enfermedades producen en el hombre los hemoparasitos vistos en el laboratorio? Cuales en nuestro país?

CUESTIONARIO 1. Que otros grupos de animales diferentes a protozoos podríamos encontrar en una muestra de agua estancada?

En el agua estancada por lo general se pueden encontrar microorganismos del tipo bacterias y protistas. Estos últimos se clasifican por una parte en el grupo de las algas como clorofíceas, rodofíceas, feofíceas, y crisofíceas; y por otra parte se clasifican en protozoarios como los sarcodinos, ciliados, 7 sporozoarios y mastigoforos.

Los hemoparasitos pueden causar patologías como miocarditis, vísceromegalias, insuficiencia cardiaca congestiva, hipertrofia ventricular izquierda con aneurisma apical, bloqueo auriculoventricular, síndrome de Stokes-Adams, alteraciones electrocardiográficas, bloqueo de rama derecha, arritmias; enfermedad de Chagas, síndrome de Romaña. La enfermedad de Chagas es una de las causadas por hemoparasitos en Colombia la causa el tripanosoma cruzi, que además es predominante en zonas tropicales.9

2. Porque son foraminíferos?

4. En que otros grupos de protozoos encontramos parásitos en el hombre?

importantes

los

Los Foraminiferos suelen considerarse como la más importante de los grupos de microfósiles marinos debido a que son organismos muy abundantes en los sedimentos 7

Reino protista. [En línea]. http://cmapspublic2.ihmc.us/rid=1349629945521_91419 8533_46482/REINO%20PROTISTA.cmap [Consulta: 03 de mayo 2014]

   

Tenia o Solitaria Duela del Hígado Anisakis Ascaris

8

Molina, E. (2002, 2004). Micropaleontología. Prensas Universitarias de Zaragoza, Colección Textos Docentes, 93. 634 pp. ISBN 84-7733-619-9 [Consulta: 03 de mayo 2014] 9 Dra. Diez Albares T. Hemoparácitos, [En línea].

http://www.slideshare.net/tatiana_10/hemoparsi tos [Consulta: 03 de mayo 2014]

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Trhichinella Spiralis Garrapatas Piojos Ladillas Pulgas Plasmodium Trypanosoma

5. Algunos protozoos de vida libre, como el paramecio, poseen vacuolas contráctiles. ¿Cuál es la función de ellas? ¿Qué les sucedería a estos microorganismos si las vacuolas contráctiles dejaran de funcionar? Las Vacuolas CONTRÁCTILES o Pulsátiles cumplen la función de acumular agua en los seres unicelulares como los protozoos que acumulan el agua excesiva en una o varias Vacuolas Pulsátiles, las que se encargan de expulsarla conservando constante la concentración del medio intracelular. En las vacuolas pulsátiles o contráctiles se observan pequeños conductos. Los conductos formados en el interior del protoplasma, extraen líquidos, y el que se abre en la superficie de la ameba, los expulsa cuando la vacuola se contrae. La ameba incorpora alimentos por el proceso de fagocitosis, es decir incorpora a través de sus pseudópodos, partículas sólidas que encuentra al desplazarse. Los pseudópodos de la ameba engloban a las partículas hasta que quedan dentro de la masa protoplasmática, rodeados por una gota de agua, lo que da origen a una vacuola alimenticia. Esta vacuola se

desplaza dentro de la ameba impulsada por los movimientos internos del protoplasma. Mientras la vacuola se traslada, el alimento que contiene es digerido mediante los jugos segregados por el protoplasma, una vez que ha sido asimilada la parte nutritiva, queda dentro de la vacuola lo que no se digiere, o sea, el excremento. la vacuola toma entonces el nombre de vacuola excretora, que se acerca a la periferia y cuando expulsa su contenido al exterior recibe el nombre de vacuola contráctil. 6. ¿Por qué las algas son importantes? Cite tres razones para ello. Las algas son hogares naturales para muchas especies marinas en sus primeros estadios son fuente de alimento primario para los quelonios evitan la erosión de los océanos son fuente de alimento para el ser humano se utilizan como fármacos en el tratamiento del cáncer etc.

7. ¿Qué diferencias encuentran entre las algas y los protozoarios que están observando? (Apóyese en revisión bibliográfica) Algas

Protozoos

Microorganismos procariotas que

Microorganismos eucariotas que

contienen clorofila que llevan a cabo la fotosíntesis oxigénica Autótrofas Tienen al menos un cloroplasto Se parecen a las plantas Unicelulares

carecen de pared celular

Heterótrofos Se clasifican de acuerdo a su tipo de movilidad Se parecen a los animales Carecen de clorofila

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LEGGETT, R. Diferencias entre protozoos y algas. [En línea]. http://www.ehowenespanol.com/diferenciasprotozoos-algas-info_176868/ [Consulta: 03 de mayo 2014]