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• Leandro Jair

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UNIVESIDAD NACIONAL DE TUMBES FACULTAD DE CIENCIAS AGRARIAS ESCUELA ACADEMICO PROFESIONAL DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL DEPARTAMENTO ACADEMICO DE BIOLOGIA

Año de la lucha contra la corrupción y la impunidad TEMA

:

PREPARACION PARA MEDIOS DE CULTIVO

CURSO

:

BIOLOGIA GENERAL

CICLO

:

I

DOCENTE

:

PRISCILA HEREDIA RECTO

ALUMNO

:

LEANDRO YAIR ROQUE RAMIREZ

TUMBES – PERU 2019.

INTRODUCION: Un medio de cultivo es un material alimenticio que se usa en el laboratorio para el desarrollo de los microorganismos. Una vez que ha sido preparado, un medio de cultivo puede ser inoculado, (es decir se le añaden organismos) y a continuación incubado en condiciones que favorezcan el crecimiento microbiano. En 1881 Koch ideo un método para reproducir bacterias en un medio de cultivo sólido hecho con gelatina, e introdujo el método de la placa para asegurar cultivos puros. Sembró en gelatina una mezcla de bacterias, después de fundir el medio por calentamiento, y vertió en este medio inoculado en una placa de cristal esterilizada y fría, para endurecerlo. Allí donde las bacterias quedaban atrapadas al irse solidificando el medio, se multiplicaban formando una masa, llamada colonia, visible a simple vista, dichas colonias debían ser puras, es decir contener un solo tipo de bacteria. Para asegurar el cultivo puro era necesario tomar una muestra de una colonia con un alambre estéril y trasladarlo a un tubo de medio estéril fresco. Este método de cultivos puros es en esencia el que se usa actualmente con la salvedad de que se usa agar en lugar de gelatina; para los cultivos en placa empleamos una cajita de vidrio llamada cápsula o caja de Petri introducida por Petri, uno de los ayudantes de Koch durante 1887.En el año 1882 tiene lugar uno de los grandes avances de la microbiología en relación con los medios de cultivo: el médico alemán Walter Hesse introduce el agar-agar (polisacárido extraído de algas rojas) como solidificante. En 1887 un ayudante de Koch llamado Petri, comienza a utilizar placas de cristal planas, que se llaman desde entonces placas de Petri, para sustituir a las clásicas bandejas de vidrio cubiertas con campanas que se usaban hasta entonces.

OBJETIVOS  Aprender a preparar los medios de cultivo más comunes que se utilizan para el cultivo de los microorganismos. Diferenciar los diversos tipos de medios y su aplicación adecuada de acuerdo al tipo de microrganismo a cultivar.

¿QUE ES UN MEDIO DE CULTIVO? Es un solución liquida o gelatinosa que contiene los nutrientes necesarios para el crecimiento de los microorganismos. Generalmente se presentan desecados en forma de polvo fino o granular antes de ser preparados; ya preparados pueden encontrarse en estado sólido, semisólido o líquido. El objetivo último del cultivo es variado: antibiograma, identificación, multiplicación. Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de oxígeno adecuado, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. Los virus, por ejemplo, son obligados parásitos intracelulares, por lo que necesitan un medio que contenga células vivas

¿COMO SE CLASIFICAN LOS MEDIOS DE CULTIVO? Por su consistencia: - líquidos: también se llaman caldos de cultivo, no contienen agar y se preparan en matraces pequeños. - Semisólidos: contienen 0.5% de agar y se preparan en matraces pequeños. - Solidos: contienen de 1.5% a 2% de agar y se preparan en cajas Petri (placas) o en tubos de ensayo.

Por su composición: - Definido: se conoce su composición exacta, se utiliza cuando ya se conocen los microorganismos que se van a cultivar. - Complejo: no se conoce su composición, pueden tener sangre, leche, extracto de levadura o carne; se utiliza cuando no se conocen a los microorganismos o no se conocen sus requerimientos nutricionales. - Mínimo: es un medio definido que proporciona solo los nutrientes necesarios. Por su función: - Selectivos: promueve o inhibe el crecimiento de los microorganismos. - Diferenciales: permiten distinguir entre diferentes tipos de microorganismos.  - De enriquecimiento: contiene factores de crecimiento, un nutriente esencial que el microorganismo no puede sintetizar.

Según su origen: - Naturales: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composición química no se conoce exactamente.

- Sintéticos: son los medios que contienen una composición química definida cualitativamente y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. - Semisintéticos: son los sintéticos a los que se les añaden factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgánico complejo, como por ejemplo extracto de levadura.

¿COMO SE DE CULTIVO?

PREPARAN LOS MEDIOS

Durante las prácticas se van a manejar medios de cultivo de composición muy variada y de tres tipos diferentes en cuanto a consistencia: medios sólidos, semisólidos y líquidos. Este último aspecto es importante a la hora de la preparación de los mismos. Aunque los medios artificiales o sintéticos se pueden preparar a partir de sus componentes individuales, se pueden adquirir comercialmente como medios deshidratados a los que solamente hay que añadir la cantidad de agua necesaria. El fabricante indica la composición, la caducidad,  y la cantidad que debe pesarse por cada litro a preparar e incluso como debe esterilizarse.

CONDICIONES QUE DEBE REUNIR UN MEDIO DE CULTIVO: Para que los microorganismos crezcan adecuadamente, un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones: - contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios - disponer de oxígeno - temperatura adecuada - humedad - pH. - Exento de microorganismos contaminantes.

DISPONIBILIDAD DE NURIENTES EN LOS MEDIOS DE CULTIVO: Un medio de cultivo para que permita el crecimiento adecuado de microorganismos debe contener como mínimo: - Carbono - Nitrógeno

- Azufre - Fósforo - Sales inorgánicas que suplan iones (K, Mg, Fe, Ca, etc.).

¿QUE ES EL ROJO DE FENOL? El rojo de fenol es un compuesto orgánico usado en laboratorio como indicador de pH, también se le conoce como Fenolsulfonftaleina, Sulfental, Sulfonftal o PSP. Se presenta en polvo o en cristales de color rojo, inodoro, se descompone a temperatura de ebullición, su temperatura de fusión es de 285 °C. Tiene baja solubilidad en agua, soluble en disoluciones de hidróxidos alcalinos y ligeramente soluble en acetona y alcohol etílico. En los medios de cultivo se utiliza como indicador de pH. A pH inferiores a 6,8, el cultivo vira a amarillo, a pH superiores a 8 el cultivo se torna de color violeta, los pH entre 6,8 y 8 dan tonalidades graduales de color naranja. Su fórmula es (C19H14O5S) con una masa molecular de 354.39u.m.a

¿QUE ES EL AGAR SS? El agar Salmonella-Shigella también conocido como agar SS, es un medio moderadamente selectivo y diferencial, especialmente diseñado para el aislamiento de bacterias enteropatógenas de los géneros Salmonella y Shigella, tanto de muestras ambientales como clínicas. El agar SS tiene una composición compleja; está constituido por extracto de carne, peptona, lactosa, sales biliares, citrato de sodio, tiosulfato de sodio, citrato férrico, agar, rojo neutro, verde brillante y agua destilada. Dada su gran selectividad se pueden sembrar muestras con abundante flora mixta.

En los laboratorios de microbiología el medio Salmonella-Shigella es muy utilizado

para investigar la presencia de Salmonella y Shigella en muestras de heces diarreicas, aguas residuales, agua potable y alimentos.

En ocasiones es necesario utilizar caldos de pre-enriquecimiento (caldo lacto sado) y enriquecimiento (caldo selenito cistina) para recuperar cepas de Salmonella.

Estos pasos son requeridos cuando se sospecha la existencia de Salmonella en muy baja cantidad, o donde la cepa pueda estar maltratada por procesos propios de la producción industrial, principalmente de alimentos procesados. También es aconsejable enriquecer muestras de heces provenientes de pacientes que han sido tratados con antibióticos.

Posteriormente, el caldo enriquecido se puede sembrar en agar SalmonellaShigella y en otros medios similares, como el agar xilosa, lisina desoxicolato (XLD) y agar Hektoen entérico (HE).

¿QUE ES EL AGAR DE CITRATO DE SIMMONS? El agar citrato de Simmons se emplea comúnmente como parte de un grupo de pruebas bioquímicas. Es un medio definido, selectivo y diferencial que prueba la capacidad de un organismo para usar citrato como única fuente de carbono e iones de amonio como única fuente de nitrógeno. En 1923, Stewart Koser desarrolló un medio líquido formado por sales inorgánicas, en el que una sal de amonio era la única fuente de nitrógeno y el citrato era la única fuente de carbono, para realizar la diferenciación entre lo que ahora se conoce como Escherichia coli y Enterobacter aerogenes. James S. Simmons, en 1926, modificó la fórmula de Koser con la adición de 1,5 % de agar y azul de bromotimol. El medio contiene citrato, iones de amonio, y otros iones inorgánicos necesarios para el crecimiento. También contiene azul de bromotimol, un indicador de pH. El azul de bromotimol es verde a un pH por debajo de 6,9 y luego se vuelve azul a un pH de 7,6 o mayor. Se recomienda para la diferenciación de bacilos gramnegativos entéricos de muestras de laboratorio, muestras de agua y muestras de alimentos.

¿QUE ES EL AGAR CETRIMIDE? King y cols. Desarrollaron un medio denominado Medio A con el fin de poner en evidencia la producción de Piocianina por la Pseudomonas. El Cetrimide Agar es una modificación donde se ha incorporado la Cetrimida (Bromuro de Cetiltrimetilamonio), compuesto de amonio cuaternario, como agente inhibidor de la mayoría de la flora acompañante de Pseudomonas. Las cepas de Pseudomonas son diferenciadas de otras especies por la producción de Piocianina, pigmento azul, soluble en agua , que unido a la morfología de las colonias y la producción de un característico olor a Aminoacetofenona, permite la identificación

de la P. aeruginosa. La producción de Piocianina es estimulada por la presencia de Cloruro Magnésico y del Sulfato Potásico. El Cetrimide Agar, está recomendada para análisis de cosméticos, productos farmacéuticos y muestras clínicas, y también para la evaluación de desinfectantes.

¿QUE ES EL AGAR MACCONKEY? El agar MacConkey es un medio de cultivo selectivo y diferencial para bacterias

diseñado para aislar selectivamente bacilos Gram negativos y entéricos (encontrados normalmente en el tracto intestinal) y diferenciarlos sobre la base de la fermentación de la lactosa.1 El cristal violeta y las sales biliares inhiben el crecimiento de organismos Gram positivos, lo que permite la selección y el aislamiento de bacterias gramnegativos. Las bacterias entéricas que tienen la habilidad de fermentar lactosa pueden ser detectadas utilizando el carbohidrato lactosa y el indicador de pH rojo neutro.

Aquí procedemos a ver unas imágenes de lo que hemos estado haciendo en el laboratorio, trabajando con diferentes tipos de agar

CONCLUSION Los medios de cultivo son uno de los métodos más usados para el análisis de microorganismos con varios fines, como el de multiplicación, identificación, antibiograma, entre otros, y puede ofrecer información valiosa sobre los mismos si se realiza de manera adecuada e higiénica para evitar la contaminación del medio y la alteración de los resultados. Fue una práctica muy interesante, sobre todo ver como las bacterias se van reproduciendo y creciendo.

REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

.https://es.slideshare.net/guest5e31b0e1/medios-de-cultivo .https://es.slideshare.net/mwampii/medios-de-cultivo-practica .https://www.ecured.cu/Medio_de_cultivo_(Microbiolog%C3%ADa) .https://es.wikipedia.org/wiki/Medio_de_cultivo .http://www.ucv.ve/fileadmin/user_upload/facultad_farmacia/catedraMicro/10_Preparac i%C3%B3n_de_medios_de_cultivo.pdf

.https://sites.google.com/a/goumh.umh.es/practicas-demicrobiologia/indice/preparacion-de-medios-de-cultivo

.http://www.pv.fagro.edu.uy/fitopato/cursometodosfito/03-Medios_de_cultivos.pdf .https://www.lifeder.com/agar-salmonella-shigella/ .http://www.medioscultivo.com/salmonella-shigella-agar-ss-agar/ .https://es.wikipedia.org/wiki/Agar_citrato_de_Simmons .http://f-soria.es/Inform_soria/Difco%20Fichas%20tecnicas/PLACAS%20DIFCO%20Y %20CROMOGENICAS%20BD/FT%20CETRIMIDE%20AGAR%20(PSEUDOSEL%20AGAR).pdf

.https://es.wikipedia.org/wiki/Agar_MacConkey