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• Israel Cachumba

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Electroforesis Anaguano C.*; Cachumba J.*; García N.*; Villacres A.*. LABORATORIO DE BIOQUIMICA *Escuela Politécnica Nacional, Facultad de Ingeniería Química y Agroindustria Quito, Ecuador e-mail: [email protected] , [email protected], [email protected] , [email protected]

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1. ¿Qué es la electroforesis? La electroforesis es un proceso de separación de moléculas en una mezcla, el cual consiste en el movimiento de las moléculas en un gel o un fluido dentro de un campo eléctrico relativamente uniforme. La separación de las moléculas se puede dar en función de su carga, afinidad y tamaño. Se puede separar distintos tipos de moléculas como proteínas, ácidos nucleicos, plásmidos, ADN y ARN (Cruces, 1998, p. 14; Mendez, 2011). 2.

¿Cómo se determina el peso molecular mediante este método?

Para determinar el peso molecular de una proteína desconocida mediante electroforesis, se debe aislar la muestra en el mismo gel con un grupo de estándares de peso molecular . Después de haber establecido los estándares y la muestra de proteína desconocida, el gel se procesa con la tinción deseada y luego se decolora alrededor de 12 a 14 horas para representar las bandas de proteína (Manz, Dittrich, Iossifidis, 2015). Después de ejecutar el gel, se debe determinar la distancia de migración relativa (Rf) de los patrones de proteína y la proteína desconocida (Manz, Dittrich, Iossifidis, 2015). 𝑅𝑓 =

𝑑𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒 𝑙𝑎 𝑝𝑟𝑜𝑡𝑒í𝑛𝑎 𝐷𝑖𝑠𝑡𝑎𝑛𝑐𝑖𝑎 𝑑𝑒 𝑚𝑖𝑔𝑟𝑎𝑐𝑖ó𝑛 𝑑𝑒𝑙 𝑓𝑟𝑒𝑛𝑡𝑒 𝑑𝑒𝑙 𝑡𝑖𝑛𝑡𝑒

Alternativamente, también se puede usar un software apropiado para determinar los valores de Rf de las bandas resultantes. Se realiza un gráfico con los valores obtenidos de las bandas en el estándar, el logaritmo del peso molecular del polipéptido desnaturalizado con SDS y su distancia relativa (Rf ) (Lith, Haller, Zutphen, 1992).

3. ¿Cuál es la influencia del pH y la fuerza iónica de la solución reguladora en la separación? Las proteínas poseen la capacidad de separarse mediante electroforesis, debido a que obtienen carga eléctrica dependiente del medio, por lo tanto, las fuerzas iónicas

presentes en las proteínas proporcionan un punto isoeléctrico propio a cada una de ellas. (Peña et, 2004). Mientras que la influencia del pH, se atribuye mediante el punto isoeléctrico que es el pH donde la carga eléctrica neta de la proteína es cero. Las técnicas electroforéticas se generan a un pH constante por medio de una solución buffer. (Castiñeiras, Fuentes, Queraltó, 1998) 6. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS Castiñeiras, M. Fuentes, X. Queraltó, J. (1998).” Bioquímica Clínica y Patología Molecular: Volumen I”. (2da Edición). Editorial Reverté. Barcelona, España. Pp: 170 Cruces. (1998). “Electroforesis Capilar”. (1ra edición). España: Editorial Universidad de Almería servicio de publicaciones Khan Academy. (2017). “Electroforesis en Gel”. Recuperado de: https://es.khanacademy.org/science/biology/biotech-dnatechnology/dna-sequencing-pcr-electrophoresis/a/gelelectrophoresis Mendez. (2011). “Electroforesis” .Recuperado https://quimica.laguia2000.com/general/electroforesis

de:

Peña A., Arroyo A., Gómez A., Tapia R., (2004). “Bioquímica”. (3ra. Edición). México D.F., México: Editorial Limusa. HA Van Lith, M. Haller, LFM Van Zutphen y AC Beynen., (1992) . Analytical Biochemistry (4ta. Edición). México D.F., México: Editorial Imperial Manz, A., Dittrich, P., Iossifidis, D. y Pamme, N. (2015). Química bioanalítica . Londres: Imperial College Press.