DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE MÉTODO DE SANGER 20M1 Sección 1 INTRODUCCION Las pr
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DETERMINACIÓN DE AMINOÁCIDOS TERMINALES CON GRUPO ALFA AMINO LIBRE MÉTODO DE SANGER 20M1
Sección 1
INTRODUCCION Las proteínas están conformadas por cadenas de aminoácidos, que son moléculas orgánicas que contienen un grupo amino y un carboxilo. La secuenciación de proteínas permite predecir la función de la proteína, clasificar las proteínas en familias, detectar secuencias de aminoácidos relacionados con funciones importantes, así como conocer relaciones genéticas y evolutivas, entre otros. Existen tres importantes técnicas para secuenciar los péptidos de aminos terminales: Sanger, Edman y Dansyl Chlorid. La más antigua es la utilizada por el científico Frederick Sanger desde 1975. Este método utiliza el compuesto 2,4-dinitrofluorobenceno (DNFB) que reacciona con el residuo N-terminal bajo condiciones alcalinas que junto con otros procesos y una cromatografía en papel permite la identificación del aminoácido N-terminal. OBJETIVO Determinar e identificar el aminoácido alfa-amino terminal de las cadenas de la molécula de la hemoglobina mediante el método de Sanger.
RESULTADOS Tabla 1 Calculo de Rf (Factor de Solución Distancia de Distancia de Rf la marca a la marca a recorrido línea sonrisa Alanina 20.8cm 34.6cm 0.6 Valina 22.4cm 34.6cm 0.65 Fenilalanina 19.2cm 34.6cm 0.55 DNFB 18.5cm 34.6cm 0.53 Problema 21.5cm 34.6cm 0.62 retención) cromatografía 1>2
Fig 1. Cromatografía del amino α-terminal de la hemoglobina y su escala a 1:2 DISCUSION La hemoglobina es una molécula formada por 2 cadenas α y 2 β, cada cadena beta (Peña, et. al, 2004), gracias a la práctica, se pudo determinar su amino alfa terminal teniendo como resultado a la valina, siendo el Rf 0.65 es decir, el más cercano a 1. Esto se puede corroborar gracias a que en base al Protein Data Bank se encuentra que el alfa amino terminal de la hemoglobina de bovino es la hemoglobina (cabe mencionar que la hemoglobina que se maneja en laboratorio es proporcionada por un proveedor que maneja a este grupo de vertebrados). Por otra parte, en el cromatograma puede observarse una mancha que puede compararse con el DNFB que además con el Rf muestra que en nuestro problema existe presencia de este reactivo, esto puede deberse a que no se desechó por completo la fase etérea quedando rastros del dinitrofenilado; también puede mencionarse que el cromatrograma pudo presentar ciertos problemas en el momento de desarrollarse debido a que la
cámara se abría y cerraba constantemente Peña, A, et al. 2004. Bioquímica. Editorial Limusa: México. afectando el resultado. P.p.: 84. Lippicott W. 2000. Pruebas bioquímicas para la identificación de bacterias de importancia clínica. 3A ed. Editorial CONCLUSION Panamericana. España. 185-187 pp. Se identificó al a la Valina como el aminoácido alfa-terminal de las cadenas de la molécula de hemoglobina. Hemoglobina. Protein Data Bank. Disponible en línea en: http://pdb101.rcsb.org/motm/41. Consultado el 24-08-2016 BIBLIOGRAFIA