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Expresión de proteínas heterólogas en Pichia Pastoris

Díaz Rodríguez Erick Efrén Huicochea Medina Magaly Ocampo Abrajan Iván

Pichia Pastoris Como sistema de expresión de proteínas heterólogas ¿Por qué elegir a Pichia Pastoris?

Pichia Pastoris es una levadura metilotrófica su principal característica es la existencia de un promotor fuerte (elevado nivel de trascripción) y altamente regulable . El promotor de la alcohol oxidasa, (PAOX1),Levadura que combina la facilidad de la

manipulación genética y las características de crecimiento de las procariotas además de la maquinaria celular necesaria para llevar a cabo modificaciones postraduccionales.

Características principales La biología molecular de Pichia Pastoris es bien conocida. El promotor del gen de la enzima alcohol oxidasa (AOX1) es inducible por metanol

Eficiente crecimiento en metanol como única fuente de carbono. No tiene tendencia a fermentar.

Como funciona Mecanismo clásico de represión- desrepresion combinada con un mecanismo de inducción:

• El crecimiento en presencia de glucosa reprime la transcripción incluso en la presencia del inductor metanol.

• La sustitución de glucosa por glicerol y la simultanea adición de metanol al medio induce la expresión del gen AOX1 a altos niveles.

• Se puede obtener un potente efecto inductor si solo se utiliza metanol como fuente de carbono.

Pichia Pastoris Como sistema de expresión de proteínas heterólogas Diseño del plásmido     

Fragmento del promotor de la enzima alcohol oxidasa Péptido de secreción (dependiendo del vector empleado). Lugar de clonaje, donde en su momento ira el gen que queremos expresar. Terminador de la trascripción de l alcohol oxidasa Un extremo 3’ homologo a la secuencia que flaquea , también en 3’ al gen de la enzima alcohol oxidasa

Pichia Pastoris Como sistema de expresión de proteínas heterólogas Principales vectores de expresión en Pichia pastoris

Pichia Pastoris Como sistema de expresión de proteínas heterólogas Algunos ejemplos de la producción heteróloga de Pichia pastoris