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AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN DEL MAR DE GRAU____

Ingeniería en industrias Alimentarias

Universidad Nacional Jorge Basadre Grohmann

Practica Nº 4: NUMERACIÓN DE

STAPHYLOCOCCUS AUREUS COAGULASA POSITIVO

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NOMBRE: Yoselin Noelia Jalanoca Quispe PROFESOR: Amelia Castro Gamero CURSO: Laboratorio de Microbiología AÑO: Tercero HORARIO: Lunes 11:00am – 01:00pm

Tacna – Perú 2016 1

AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN DEL MAR DE GRAU____

Práctica Nº4:

NUMERACIÓN DE STAPHYLOCOCCUS AUREUS COAGULASA POSITIVO 1.- INTRODUCCION: La Familia Micrococcaceae comprende cocos Gram positivos, no exigentes, catalasa positivos, con agrupación en racimos, aerobios o anaerobios facultativos. De los tres géneros que la integran, Micrococcus, Planococcus y Staphylococcus, este último es el único de importancia médica. Se caracteriza por ser aerobio – anaerobio facultativo, capaz de fermentar la glucosa en anaerobiosis; poseer ácidos teicoicos en su pared, y ser sensible a la enzima lisostafina. Dentro del género Staphylococcusse conocen más de 20 especies, de las cuales S.aureuses la más importante. Otras especies como S. epidermidis y S.saprophyticus son actualmente reconocidas como capaces de actuar como patógenos bajo determinadas circunstancias. La infección estafilocóccica es conocida desde la antigüedad. En la actualidad el género Staphylococcus y, en especial, la especie tipo S. aureus tiene una alta incidencia como agente de infección, tanto en la comunidad como a nivel hospitalario. Es la primera como agente de infecciones, desde superficiales como el forúnculo, a profundas como osteomielitis, neumonía y endocarditis aguda. A nivel nosocomial se destaca como primer agente de infección de heridas operatorias y de prótesis. Asimismo, S. aureus es capaz de causar cuadros TÓXICOS por producción de potentes exotoxinas tales como intoxicación alimentaria, síndrome de piel escaldada y shock tóxico. Además cabe destacar la gran capacidad de adaptación y supervivencia de esta bacteria, su aumento progresivo de resistencia a los antimicrobianos, en especial en el medio hospitalario, que plantea serios problemas epidemiológicos y terapéuticos. Del punto de vista de sus factores de virulencia, tanto bioquímicos como estructurales, se lo puede definir como un "patógeno perfecto", magníficamente equipado para colonizar, invadir, diseminarse y causar enfermedad grave. No obstante, normalmente convive en armonía con el huésped humano o animal, formando parte de su flora sin causar daño. Inclusive en algunos casos se encuentran personas sanas pesadamente colonizadas, definiéndose como "portadores" y pudiendo en ocasiones ser reservorio y fuente de infección. 2

AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN DEL MAR DE GRAU____ 2.- OBJETIVOS:  Determinar la numeración de staphylococcus aureus en muestras de alimentos.  Diferenciar dentro del género de staphylococcus las especies no patógenas y la patógena.

3.- FUNDAMENTO TEORICO:

STAPHYLOCOCCUS AUREUS Staphylococcus conocido

aureus (pronunciación: /ˌstafiloˈkokus

como estafilococo

áureo,

o

ˈawrews/),

comúnmente estafilococo

dorado, es una bacteria anaerobia facultativa, grampositiva, productora de

coagulasa, catalasa,

inmóvil y

no esporulada que se

encuentra

ampliamente distribuida por todo el mundo, estimándose que una de cada tres personas se hallan colonizadas, aunque no infectadas, por ella.

Puede producir una amplia gama de enfermedades,

que

van

desde

infecciones cutáneas y de las mucosas relativamente benignas, tales como foliculitis, forunculosis o conjuntivitis, hasta enfermedades de riesgo vital, como celulitis, abscesos profundos, osteomielitis, meningitis, sepsis, endocarditis o neumonía. Además, también puede afectar al aparato gastrointestinal, ya sea por presencia física de Staphylococcus aureus o por la ingesta de la enterotoxina estafilocócica secretada por la bacteria.

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AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN DEL MAR DE GRAU____ En la actualidad, este microorganismo se encuentra como el principal causante de las infecciones nosocomiales. Esta situación se ve favorecida por el hecho de que esta especie habita tanto en las mucosas como en la piel de los seres humanos, lo que permite que a través de las heridas quirúrgicas pueda penetrar en el torrente sanguíneo del paciente por medio del contacto directo o indirecto con el personal sanitario, con un objeto contaminado o incluso con otro paciente.

Las cepas habituales de Staphylococcus aureus son resistentes a la penicilina, dejando como los antibióticos más eficaces para combatirlos a los aminoglucósidos, las cefalosporinas, la oxacilina o la nafcilina. Además de la administración del tratamiento antimicrobiano correspondiente, puede ser conveniente, en función del caso, la eliminación de puertas de entradas como catéteres venosos permanentes o drenajes quirúrgicos.

COAGULASA S. aureus produce dos formas de coagulasa, una que se encuentra ligada a la membrana (coagulasa ligada, ya revisada) y otra coagulasa libre. La coagulasa libre, a diferencia de la coagulasa ligada, no cataliza la reacción directa entre fibrinógeno y fibrina, su mecanismo de acción es modificar el factor de reacción con la coagulasa a estafilotrombina, un producto semejante a la trombina. Estafilotrombina es el factor que cataliza la conversión de fibrinógeno a fibrina, que formará un coágulo rodeando las células de S. aureus impidiendo que las células inmunológinas del hospedador entren en contacto con la bacteria e inicien la fagocitosis.

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AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN DEL MAR DE GRAU____ 4.- MATERIALES:

MUESTRA: QUESO FRESCO, CARNE MOLIDA Y QUESO DE CHANCHO

1. Los requisitos necesarios para la preparación y dilución de la muestra de alimento 2. Placas de Petri de vidrio (100x 15mm) o de plástico de 90 x 15mm. 3. Pipetas de1ml graduadas al 0.1 4. Extensores de vidrio 5. Baño de agua regulado a 44-46ºC 6. Incubadora regulada a 35º-37ºC 7. AGAR SAIR- PARKER 8. Caldo de cerebro-corazón 9. Tubos de 75 x 10mm contenido 0.3ml de plasma de conejo.

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AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN DEL MAR DE GRAU____ 5.- PROCEDIMIENTO: 1. Preparar las muestras, las tres muestras al ser solidas se procederá a cortar en trozos pequeños y triturar con el mortero.

2. Preparar diluciones 10−1 , 10−2 , 10−3 , y 10−4. 3. Pipetear 0. 1ml del homogenizado y las diluciones por duplicado en la superficie de las placas de Agar BAIRD PARKER previamente secadas y, distribuir cada inoculo con un extensor de vidrio hasta que la superficie del medio aparezca seca.

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AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN DEL MAR DE GRAU____ 4. Incubar las placas en posición invertida a 37±1ºC durante 30-48horas.

5. Después de 30 horas

de incubación seleccionar las placas que

representan entre 20 y 200 colonias y contar todas aquellas colonias negras y brillantes con borde blanco angosto rodeadas de zonas claras que contrastan con el medio opaco. Estas colonias corresponden a Staphylococcus aureus. 6. Marcar la posición de las colonias a incubar las placas durante 18 horas adicionales.

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AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN DEL MAR DE GRAU____ 7. Al final del periodo de incubación (48horas) contar todas las colonias con las características descritas anteriormente y además aquellas colonias negras brillantes con o sin borde blanco y sin zonas claras. Someter un número significativo de colonias sospechosas (no menor a 5) la prueba de la coagulasa. Algunas cepas de S. aureus pueden aparecer rodeadas de zona opaca después de 30 horas de incubación de 35-37ºC, para un gran número de cepas a veces no muestra esta apariencia después de 48 horas y someter a un número equivalente de ellas a la prueba de la coagulasa. esta prueba servirá para distinguir aquellos cultivos de S. aureus (coagulasa positivo) de S. epidermidis (coagulasa negativa) que puedan dar una apariencia similar.

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OBSERVACIONES: La cantidad de muestra solida será de 10gramos para luego ser diluida. Se evito abrir por completo la tapa de la placa, por medidas de seguridad para evitar la contaminación de la placa.

6.- RESULTADOS: PRESENCIA-NUMEROS DE S. AUREUS:

Queso fresco

Carne molida

Queso de chancho

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AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN DEL MAR DE GRAU____ Se multiplicara por 10 a la cantidad de colonias debido a que es una dilución. Si no tiene halo, puede que no sea un S.Aureus.

Grupo Nº1: queso fresco Número de placa(dilución)

-3 19

Número de placa(dilución)

19x10=190

190x1000=190000 ufc/gr

1x10=10

10x10000=100000 ufc/gr

-4 1

Grupo Nº2: carne molida Número de placa(dilución) Número de placa(dilución)

Número de placa(dilución) Número de placa(dilución)

-3 45

45x10=450

450x1000=450000 ufc/gr

-4 5

5x10=50

50x10000=500000 ufc/gr

Grupo Nº3: queso de chancho -4 30 -5

30x10=300

300x10000=3000000 ufc/gr

1

1x10=10

10x100000=1000000 ufc/gr

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DISCUSIONES: Todos los alimentos poseen un

riesgo finito

de contaminación

microbiológica, el nivel de los cuales varia con el tipo de alimento. Los más altos factores de riesgo incluyen alimentos de origen animal y alimentos consumidos sin cocimiento previo.

Los quesos elaborados a partir de leche no pasteurizada poseen ambos factores de riesgo y estos están involucrados en la mayoría de brotes reportados por intoxicación estafilocócica .

La NTP establece requisitos microbiológicos no mayores de

10 a 102

UFC/g para Staphylococcus aureus. Los valores reportados en este estudio dan por encima del límite máximo permitido nos indica el alto grado de contaminación alcanzado por este alimento proveniente del contacto con la piel, boca y fosas nasales de quienes manipularon el alimento, así como fue observada la falta de higiene en las superficies de contacto sobre las cuales se depositaba el mismo, el cuál en muchas ocasiones se encontraba descubierto, ninguna de las muestras se encontraba en refrigeración consiguientemente expuestas a la temperatura ambiental sumándose a esto la humedad del producto favoreciendo de esta manera la multiplicación bacteriana.

Las cargas bacterianas obtenidas ≥ 105 pueden contener enterotoxinas representando así un inminente riesgo para la salud de la población .

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AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN DEL MAR DE GRAU____ 7.-CONCLUSIONES: Es evidente de acuerdo a los resultados obtenidos medidas sanitarias insuficientes en el expendio de este producto, el riesgo de contener enterotoxinas es altamente probable de acuerdo a los niveles de carga microbiana encontrado lo que puede desencadenar en intoxicación estafilocócica, náuseas severas, vómito y diarrea con el consiguiente riesgo para la salud de sus consumidores; a los cuales se sugiere percatarse de las buenas condiciones de higiene que deben mantenerse en cuanto a el almacenamiento y forma de expendio hasta su consumo para prevenir la contaminación; recomendando no consumir estos alimentos de forma cruda. 

RECOMENDACIONES: Se recomienda que al momento de hacer cada dilución se flamee la boquilla de cada uno de los tubos de ensayo en el mechero, debido a que como estamos trabajando con caldo peptonado, la peptona también puede servir como alimento para otros microorganismos, porque lo que se desea determinar son los coliformes totales y evitar el ingreso de otro microorganismo. Lavarse las manos cuidadosamente una vez que acabe la práctica y tener cuidado al manipular los instrumentos del laboratorio.

8.- BIBLIOGRAFIA:  https://es.wikipedia.org/wiki/Staphylococcus_aureus  http://www.respyn.uanl.mx/vii/2/articulos/quesos_frescos-1.htm  http://virus.usal.es/web/demo_microali/Saureus/SaureusPlaca.htm l  https://es.scribd.com/doc/6595039/Microbiologia-de-AlimentosPractica-n%C2%BA-09-Recuento-e-identificacion-deStaphylococcus-aureus

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