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• Dannery Lu Katia Flores Fuentes

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2. NUEVOS METODOS PARA CONTEO DE COLIFORMES Y E.COLI 2.1. ISO-GRID HGMF (AOAC 990.11) Aplicación: Conteo de coliformes totals y E. coli en muestras de alimentos en general. Cultivo principal/NMP: Dilución y homogenización de muestras, seguida de filtración en filtro-menbrana con cuadricula hidrofobica (HGMF) y transferencia de membrana para agar selectivo diferencial. El medio de cultivo contiene azul de anilina, que detecta lactosa positiva con cambio a azul. Un conteo o el cálculo de NMP/g de muestra sigue el mismo principio del método para conteo total (ítem 20.2.1.), sin embargo incluir solo los cuadraditos típicos de coliformes totales, azul. Para el conteo de E. coli, la membrana es transferida para un segundo medio, conteniendo MUG (4-metilumbeliferil β-D-glicuronideo), para detección de actividad de glicuronidasa, 96% típica de las cepas de E. coli. Procedimiento: Muestra + diluyente - Filtracion en HGMF  Plaqueamiento en Lactosa Monensin Glucuronate Agar (LMG)  35ºC/24h  Colonias azules = NMP coliformes/g  Transferencia de membrana para Buffer MUG Agar (BMA)  35ºC/2-5h  Colonias azules con fluorescencia azul sob UV  NMP E. coli/g.

Velocidad: Coliformes totales en 24h + 2-5h para E. coli Ventajas: No exige diluciones, permite inoculación de mayores volúmenes, aumenta el límite de detecion, el medio de cultivo contiene ácido glicuronico, que estimula una producción de glicuronidasa, la fluorescencia no difunde por el medio de cultivo, el que facilita una visualización, una filtración elimina los falsos positivos con alimentos gliuronidasa (+), no hay interferencia del pH del medio del crecimiento sobre una acción de glicuronidasa y sobre una emisión de fluorescencia por el umbeliferona, hay menor posibilidad de confundir a fluorescencia producida por Pseudomonas con una fluorescencia azul de E. coli y una coloración purpura de fondo que facilita la visualización de fluorescencia. Desventajas: Las mismas observadas para conteo total (itm 20.2.1.), además de no contar coliformes fecales. 2.2. PETRIFILM COLIFORMES (AOAC 991.14) 2.3. COLILERT (AOAC 991.15) Aplicación: Detección y recuento de coliformes totales y E. coli en el agua. Fabricante: IDEX Laboratories Inc. Una Idex Drive, Westbrooh, Maine 04092 EE.UU. Cultivo principal/NMP:. Formulación Colibert y un pre-distribuida en viales estériles, que consiste de las fuentes de sales, de carbono y nitrógeno, indicadores y nutrientes específicos para la detección simultánea de coliformes totales y E. coli. La formulación

contiene o-nitrofenil-β-D-galactopiranósido (ONPG) a la diferenciación de los organismos que presentan la enzima de fermentación de la lactosa (β-galactosidasa) y 4metilumbeliferil-β-D-glucurónido (MUG) para diferenciar E. coli que tiene la enzima βglucuronidasa. Las muestras de coliformes positivas se detectan visualmente por el desarrollo del color amarillo en el medio de cultivo, y la presencia de E. coli detectados por la observación de fluorescencia azul bajo luz UV. El kit y se presenta en dos formatos: múltiples tubos para la inoculación de 5 o 10 porciones de 10 ml de agua, o unidades de presencia / ausencia para la inoculación de 100 ml de agua. La hidratación se lleva a cabo por medio de la Propia muestra de agua. Limitación: Hasta la fecha, sólo aprobado para las muestras de agua. Procedimiento: Muestra de agua (100 ml o 5 x 10 x 10ml o 10ml) + medio de cultivo desedratado -> 35 ° C/24h-> coliformes (amarillo) y E. coli (fluorescencia a la luz ultravioleta). Velocidad: Prueba completa en 24 horas. Necesiten para prepararlos. No. VALORACIÓN GLOBAL (EDBERG et. Al 1994). Sensibilidad 1/100ml, la concordancia con el método tradicional de APHA 94% de falsos positivos tasa cero. VENTAJAS. Extremadamente rápido y simple, los resultados en 24 horas, no requiere cualquier Previo trabajo de preparación, la ejecución de la prueba muy rápida (unos pocos segundos a la presencia / ausencia) y no requiere la confirmación de E. coli. Desventajas. Actualmente sólo se aprobó para el agua. 2.4. COLI COMPLETE DISCS (AOAC 992.30) APLICACION. La detección y el recuento de coliformes totales y E. coli en muestras de alimentos en general. FABRICANTE. BioControl Systems Inc. 19805 North Creek Parkway, Botthell, WA 98011 EE.UU.

PRINCIPIO CULTURAL / NMP. Coli completas y una formulación estéril comprimen los discos, que consta de indicadores y nutrientes específicos para la detección simultánea de coliformes totales y E. coli. La formulación que contiene 5-bromo-4-cloro-3-indolil-β-Dgalactopiranósido, que diferencia organismos dispoem enzimas de fermentación de la lactosa (β-galactosidasa) y 4-metilum-beliferil-β-glucurónido (MUG) para la diferenciación de E. coli, que tiene la enzima β-glucuronidasa. Los discos se añaden al caldo de triptosa Lauril Sulfato (LTS) y muestras de coliformes positivas se detectan visualmente por el desarrollo de color azul en el disco o en el medio de cultivo alrededor. La presencia de E. coli y detectado por observación de la fluorescencia bajo luz UV, discos se pueden utilizar tanto múltiple y tubos para la determinación de la presencia / ausencia.

PROCEDIMIENTO. Se añadió a cada tubo un caldo LST disco y muestra inoculada en la forma tradicional -> 35 ° C/24h -> coliformes totales (azul) -> Re incubamos los tubos fueron positivos 30h hasta completar -> E. coli (fluorescencia bajo UV) -> los tubos reincubados fueron negativos, y la lectura se repite después de 48 h de incubación. VELOCIDAD. Prueba completa de 24-48h. MEDIO. Caldo LST. EVALUACIÓN GENERAL. Considerado como equivalente al método tradicional para todos los alimentos (FELDSINE et al, 1994). VENTAJAS. Simple, pruebas exhaustivas en el 48h máximo, no requiere confirmación de E. coli y se puede aplicar a cualquier tipo de alimento. DESVENTAJAS. No detectar coliformes fecales.